CN115851879B 一种用于血浆游离dna的提取试剂盒及其方法 （圣湘生物科技股份有限公司）

一种用于血浆游离DNA的提取试剂盒及其方法本发明提供了一种用于血浆游离DNA的提取2所述第三提取溶液包括10～30mg/ml2.根据权利要求1所述的一种用于血浆游离DNA3.根据权利要求2所述的一种用于血浆游离D积比为15％的吐温20、质量/体积比为15％的曲4.根据权利要求2_3任一项所述的一种用于血浆游离DNA的提取试剂盒，其特征在于，5.一种权利要求1_4任一项所述用于血浆游离DNA的提取试剂盒非诊断目的的使用方其中，含有糖原、鲸蜡基聚二甲基硅氧烷的所述提取％～6.一种权利要求5所述的用于血浆游离DNA的提7.根据权利要求6所述用于血浆游离DNA的34[0001]本发明属于分子诊断DNA/RNA提取领域，具体涉及一种磁珠法提取大体积血浆游有关cfDNA与疾病相关性的研究在较长时期内进展缓慢。直到有效分离cfDNA技术的出现，和特殊荧光染料与PCR技术相结合的检测技术的应用，使这一领域的研究在最近二十多年的血液测试来监测肿瘤或转移病灶释放到血液中的循环肿瘤细胞(circulatingtumor[0004]目前市场上游离DNA提取富集试剂盒中的溶液是根据不同的提取方法相应设计，采用高盐低pH的原理制备结合液，使得核酸在该条件下与离心柱的硅胶膜或磁珠相结合；5提取溶液中含有糖原和鲸蜡基聚二甲基硅氧[0008]进一步地，所述多种提取溶液中包括第一提取溶液，所述第一提取溶液包括3~Tris_HCl、体积/体积比为0.55％的[0013]更进一步地，所述提取试剂盒还包括洗脱液，所述洗脱液包括5～15mmol/L的％～6[0029]图3为本发明实施例1提取含有不同大小DNA片段的DNALadder，使用LabChipGX[0034]可选的，所述多种提取溶液中包括第一提取溶液，所述第一提取溶液包括3~[0035]其中，本发明实施例的试剂盒在核酸第一提取溶液中添加鲸蜡基聚二甲基硅氧例提取溶液提取的核酸在PCR反应中具有良好的扩增7一洗涤液包括：1～2mol/L的硫氰酸胍、100～200mmol/ml的NaAc_HAc、10～50mmol/L的Tris_HCl、体积/体积比为0.55[0041]特别的，所述提取试剂盒还包括洗脱液，所述洗脱液包括5～15mmol/L的Tris_％～8HCl、体积/体积比为0.5％的乙基苯基聚乙二醇(NP_40)、体积/体积比为1.5％的吐温20量/体积比为1％的曲拉通X_100、体积/体积比为38％的异丙醇、10mmol/L的Tris_HCl离心，将离心管再次置于磁性分离器上磁吸30s，然后将洗脱下来的核酸转移到干净的9[0085]根据实施例1记载的步骤提取成人外周血血浆样本后，使用LabChipGX进行毛细[0087]提取实施例1中试剂提取的血浆游离DNA，使用ACTB正常人内标扩增试剂进行PCR能够提取不同大小的DNA片段，当前可看出，本发明实施例的方法能够提取最小达50bp的提取试剂3.080.930.62[0094]由上表可知，本发明提供的从血浆中提取游离DNA的方法提[0096]提取完毕后使用上述提取核酸作为模板，使用ACTB扩增试剂进行荧光定量PCR进硅氧烷显著提高了提取的血浆游离DNA的浓[0103]3.采用糖原和鲸蜡基聚二甲基硅氧烷这些修改或变更均未脱离本发明