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大曲酯酶活力的检测酶联免疫法(ELISA)2016-01-30实施2016-01-30实施工大曲酯酶活力的检测酶联免疫法(ELISA)3术语和定义酯酶活力单位esteraseactivityunit在37℃、pH6.0条件下，15min水解α-乙酸萘酯转化为α-萘酚，每产生1nmolα-萘酚为1个酯酶活力单位(U)。4原理5试剂和材料工25.2.7显色剂A。5.4磷酸氢二钠(Na₂HPO₄·12H₂O):优级纯。5.6磷酸盐缓冲溶液：pH=7.4。分别称取0.62g磷酸二氢钠(5.3)、5.73g磷酸氢二钠(5.4)和9g氯化钠(5.5),加水溶解至1000mL,在pH计上调节溶液pH=7.4。5.7羧酸酯酶标准溶液：根据酯酶试剂盒(5.2)的线性范围，用羧酸酯酶标准品稀释液(5.2.4)将羧酸酯酶标准品(5.2.2)稀释成不同活力的标准工作溶液，每次测定现配现用。6.1酶标仪(配备450nm滤光片)。振荡10min。将烧杯置于超声波细胞破碎仪(6.6)7.2测试程序7.2.3酯酶试剂盒(5.2)中所有的试剂的温度均应回升到室温(20～25℃)后方可使用。7.2.4洗板条件自动洗板可以设定5个周期。3(5.2.5)加入试样孔底部，再加10μL粗酶液(7.1),混合均匀。7.3.2封板膜封板后置于37℃恒温培养箱(6.5)中孵育30min。7.3.3取出微量反应板，弃去液体，甩干，立即用洗涤液(5.8)按7.2.4条件进行洗板，每次静置7.3.4吸取50μL羧酸酯酶标记物(5.2.3)于空白孔外的每一个微孔。用封板膜密封孔口，于37℃孵育30min。7.3.5按7.3.3步骤重复操作。育30min。7.5空白试验以吸光度值为纵坐标，酯酶的活力(U/L)为横坐标，绘制标准工作曲线。从标准工作曲线上得到试样中相应的酯酶活力，结果按公式

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