CN116250545B 解淀粉芽孢杆菌fcc1256组合物和控制植物病原体的方法 （Fmc公司）

201980077543.42019.09.27PTA-1221622015.05.12解淀粉芽孢杆菌FCC1256组合物和控制植物本申请公开了控制植物上的植物病原体例No.PTA-122162保藏的解淀粉芽孢杆菌FCC12562a)以ATCCNo.PTA-122162保藏的解淀粉芽孢杆菌(Bacillusamyloliquefaciens)菌FCC1256以1.0×106CFU/mL至1.0×1012CFU/mL的浓度存在于所孢杆菌FCC1256以1.0×106CFU/g至1.0×1012CFU/g的浓度存在于所述6.根据权利要求1所述的组合物，其中所述组合物以4.0×109CFU/ha至4.0×1017CFU/杆菌FCC1256以1.0×108CFU/mL至1.0×1014CFU/mL的浓度存在于所述浓杆菌FCC1256以1.0×108CFU/g至1.0×1014CFU/g的浓度存在于所述浓19.根据权利要求15所述的组合物，其中所述组合物是油分散体或干的可湿性粉末形3amyloliquefaciens)FCC1256菌株的组合物，其施用于植物或植物周围的土壤以治疗由植菌和节肢动物。植物病虫害的第二种类型是细菌植物病原体，包括但不限于欧文氏菌属目前用于商业性生物防治产品的菌株包括：贝莱斯芽孢杆菌(Bacillusvelezensis)生物刺激产品的芽孢杆菌菌株包括：贝莱斯芽孢杆菌FZB42，用作由ABiTEPGmbH生产的4[0011]在另一个实施方案中，本发明涉及控制植物上真菌植物病原体和/或细菌植物病原体的方法，所述方法包括将包含解淀粉芽孢杆菌FCC1256的组合物施用于植物的地上部剂。所述农业组合物特别适用于保护植物免受病原体侵害或治疗易感植物中的病原体感1.0至3.0:1.0如1.5:1.0至2较了解淀粉芽孢杆菌FCC1256对于未经处理的对照组以及对于商品serenade8Optimum5[0020]在一些实施方案中，FCC1256作为包含FCC1256的孢子的发酵液或包含FCC1256的[0021]本文公开的组合物和方法中包括解淀粉芽孢杆菌FCC1256的生物学纯培养物的事[0027]在本发明的某些实施方案中，提供了包括解淀粉芽孢杆菌FCC1256的组合物和方物病原体可以反映在减少的病原体感染、对植物病原体改良的抗性(例如对后续侵害的抗[0030]在另一个实施方案中，所述方法包括将包含解淀粉芽孢杆菌FCC1256的组合物施6旦提狄克氏菌(Dickeyadadantii)，Dickeyasolani)，农杆菌属(Agrobacteriu(如根癌农杆菌(Agrobacteriumtumefaciens))，黄单胞菌属(例如地毯草黄单胞菌(Xanthomonasaxonopodis)，野油菜黄单胞菌胡萝卜致病变种(Xapv.carotae)，桃李黄单胞菌(Xanthomonaspruni)，藤黄单胞菌(Xanthomonas韧皮部杆菌(Candidatusliberibacter))，镰刀菌属(如大刀镰刀菌(Fusarium孢镰刀菌古巴专化型(Fusariumoxysporumf.sp.cubense)，尖孢镰刀菌番茄专化型菌属(Sclerotiniaspp.)(如核盘菌(Sclerotiniasclerotiorum)，小核盘菌(Sclerotiniaminor)，银斑核盘菌(Sclerotiniahomeocarpa))，尾孢属(Cercospora/Cercosporidiumspp.)，钩丝壳霉属(Uncinulanecator))，柄球菌属(Podosphaeraspp.)(如苹果白粉病柄球菌(Podosphaera孢(Alternariatenuissima)，帕列氏链格孢(Alternariaporri)，互格链格孢(Alternariaalternate)，马铃薯早疫病链格孢(Alternariasolani)，纤细链格孢(Alternariatenuis))，假单胞菌属(如丁香假单胞菌番茄致病变种(Pseudomonassyringaepv.Tomato))，疫霉属(Phytophthoraspp.)(如蔓延疫霉(Phytophthora椒疫霉(Phytophthoracapsici)，肉桂疫霉(Phytophthoracinnamon)，草莓疫霉薯层锈菌(Phakopsorapachyrhizi)，山马蝗层锈菌(Phakopsorameibomiae))，曲霉属胞锈菌属(Uromycesspp.)(如疣顶单胞锈菌(Uromycesappendiculatus))，枝孢属(Cladosporiumspp.)(如腊叶枝孢(Cladospo蜀黍丝核菌(Rhizoctoniazeae)，稻丝核菌(Rhizoctoniaoryzae)，博爱丝核菌(Rhizoctoniacaritae)，禾谷丝核菌(Rhizoctoniacerealis)，紫纹羽丝核菌(Rhizoctoniacrocorum)，草莓丝核菌(Rhizoctoniafragariae)，多枝丝核菌(Rhizoctoniaramicola)，灌木枯病菌(Rhizoctoniarubi)，豆类丝核菌(Rhizoctonialeguminicola))，大壳球孢属(Macrophominaspp.)(如菜豆壳球孢(Macrophominaphaseolina)，稻瘟病菌属(Magnaporthespp.)(如Magnaporthegrisea，稻稻瘟病菌(Magnaortheoryzae))，球腔菌属(Mycosphaerellaspp.)(如禾生球腔菌(Mycosphaerellagraminocola)，斐济球腔菌(Mycosphaerellafijiensis(黑条叶斑病citri))，链核盘菌属(Moniliniaspp.)(如桃褐腐病菌(Moniliniafruticola)，7Moniliniavacciniicorymbosi，核果链核盘菌(Monilinialaxa))，毛盘孢属孢(Colletotrichumacutatum)，白毛盘孢(ColletotrichumCandidum))，间座壳属豆生棒孢(CorynesporaCassiicola))，胶锈菌属(Gymnosporangiumspp.)(如菌(Schizothyriumpomi))，粘壳孢属(Gloeodesspp.)(如仁果粘壳孢(Gloeodespomigena))，葡萄座腔菌属(Botryosphaeriaspp.)(如疖葡萄座腔菌(BotryosphaeriaWilsonomycescarpophilus)，单丝壳菌属(Sphaerothecaspp.)(如斑点单丝壳菌(Sphaerothecamacularis)，蔷薇单丝壳菌(Sphaerothecapannosa))，白粉菌属(Erysiphespp.)，壳多孢属(Stagonosporaspp.)(如颖枯壳多孢(Stagonospora特里亚腐霉(Pythiumlutriarium)，猝倒病腐霉(Pythiumsylvatium))，黑星菌属(Venturiaspp)(如苹果黑星菌(Venturiainaequalis))，轮枝孢属(Verticillium菌(Clavicepspuprrea))，腥黑粉菌属(Tilletiaspp.)(如小麦网腥黑粉菌(Tilletia黑粉菌(Tilletiacontroversa))，茎点霉属(Phomaspp.)(如大豆茎点霉(Phoma(Cocliobolusspp.)(如禾旋孢腔菌(Cocliobolussativus))，Gaeumanomyces属(Gaeumanomycesspp.)(如燕麦全蚀病菌(Gaeumanomycesgaminis))，毛盘孢属孢菌属(Biopolarisspp.)，长蠕孢属(Helminthosporiumspp.)(如黑麦长蠕孢[0032]在一些实施方案中，本发明的方法利用包含解淀粉芽孢杆菌FCC1256的组合物来(Phytophthoracapsica))，番茄镰刀菌颈腐病(镰刀菌属)，苹果火疫病(解淀粉欧文氏8指与未使用所述方法或组合物的相应条件相比，植物病原体的生长减少至少10例如在一些实施方案中至少减少30或至少减少50或至少减少70或至少减少80或至[0034]根据本发明的方法和组合物可用于在广泛植物中预防或治疗由植物病原体引起或植物嫁接物种植在土壤或生长介质中之前的土壤或生[0039]在一种变化中，本发明涉及一种控制植物上的真菌植物病原体和/或细菌植物病原体的方法，所述方法包括将包含以ATCCNo.PTA-122162保藏的解淀粉芽孢杆菌FCC12569[0058]禾生球腔菌(Mycosphae解淀粉芽孢杆菌FCC1256以其孢子而不是营养细胞的形式施用。[0069]在本发明方法的一些实施方案中，所述组合物是液体形式，解淀粉芽孢杆菌FCC1256在组合物中以1.0x106CFU/mL至1.0x1012CFU/mL如1.0x107CFU/mL至1.0x1011[0071]在本发明方法的其他实施方案中，所述组合物是固体形式，解淀粉芽孢杆菌[0072]在施用的组合物是固体形式的实施方案中，所述组合物可以是选自可喷粉粉末[0074]在本发明的方法中使用的包含解淀粉芽孢杆菌FCC1256的组合物的性质、实施方[0076]本文所述的组合物及其以下进一步详述的实施方案在上文所述的方法中特别有[0079]所述配制介质可以包括液体或固体载体，以及选自[0082]在一些实施方案中，所述农业组合物包含相对[0084]通常，解淀粉芽孢杆菌FCC1256以其孢子而不是营养细胞的形式包含在合适的制[0088]在农业组合物是固体形式的实施方案中，所述组合物可以是选自可喷粉粉末thuringiensisspp.aizawai)，苏云金芽孢杆菌库斯塔克亚种(Bacillusthuringiensisspp.kurstaki)，苏云金芽孢杆菌(Bacillusthuringiensis)，球孢白僵菌(Beauveria甲胺磷，速灭威(MTMC)，灭蚁灵，m-异硫氰酸酯，杀虫单，疣孢漆斑菌(Myrothecium虫菊酯，哒嗪硫磷(pyridaphenthion)，嘧螨醚，吡丙醚(pyriproxifen)，皂树提取物伊维菌素，雷皮菌素(lepimectin)和弥拜菌素(milbemectin)；A8)保幼激素模拟物腈；A12)烟碱乙酰胆碱受体通道阻断剂，例如杀虫磺，盐酸杀螟丹，杀虫环和杀虫双(fluacrypyrim)；A19)电压依赖性钠通道阻断剂，例如茚虫威(indoxacarb)和氰氟虫腙(metaflumizone)；A20)脂合成抑制剂，例如螺螨酯(spirodiclofen)，螺甲螨酯括：氟虫双酰胺(flubendiamide)2-四氟-1-(三氟甲基)乙基]苯基}-N2-(1-甲基-2-甲基磺酰基乙基)邻苯二甲酰胺和(S)-3-氯-N1-{2-甲基-4-[1,2,2,2-四氟-1-(三氟甲基)乙基]苯基}-N2-(1-甲苯肼酯(Bifenazate)，联氟砜(fluensulfone)，胡椒基丁醚，啶虫丙醚，氟啶虫胺腈灵，噻苯哒唑，麦锈灵，灭锈胺，异丙噻菌胺(isofetamid)，甲呋酰胺，联苯吡菌胺(bixafen)，氟唑菌酰胺(fluxapyroxad)，戊苯吡菌胺(penflufen)，氟唑环菌胺(sedaxane)，丁香菌酯(coumoxystrobin)，烯肟菌酯(enoxastrobin)，氟菌螨酯(triclopyricarb)，烯肟菌胺(fenaminstrobin)，苯氧菌胺(metominostrobin)，枯酞(teclofthalam)，咪唑嗪，pyriofenone，有机油，碳酸氢钾，百菌清，唑呋草(3-氯-2-甲基-苯氧基)5-氟-嘧啶-4-基氧基-苯基)-2-甲氧基亚氨基-N-甲基-乙酰胺和3-噻唑-δ-羧酰胺，N-(4'-三氟甲基甲基-1-甲基-1H-吡唑-4-羧酰胺，N-(3',4'-二氯-5-氟-联唑-4-羧酰胺，N-(3',5-二氟-4'-甲基-联苯基-2-基)-3-三氟甲基-1式-2-二环丙基-2-基-苯基)-3-二氟-甲基-1-甲基-1H-吡唑-4-羧酰胺，氟吡菌酰胺碘-N-苯基-苯甲酰胺，N-(2-二环-丙基-2-基-苯基)-3-二氟甲基-1-甲基吡唑-4-基羧酰啉(proquinazid)，三环唑，2-丁氧基-6-碘-3-丙基色原-4-酮，阿拉酸式苯-S-甲基甲基-苯氧基)-2,5-二甲基-苯基)-N-乙基-N-甲基甲脒，N'-(4氧基)-苯基)-N-乙基-N-甲基甲脒和氟茚唑菌虫威(phosphocarb)，硫磷嗪，imicyafos，甲基灭蚜磷，乙酰虫腈(acetoprole)，(bachmedesh)，benzofluor，buminafos，香芹酮，氯化胆碱，ciobutide，苯哒嗪钾素内酯(epocholeone)，吲熟酯，乙烯，呋苯硫脲(fuphenthiourea)，乙二醇缩糖醛[0097]本发明还涉及一种农业组合物的浓缩物，所述浓缩物包含：a)解淀粉芽孢杆菌[0098]可以通过用如上文针对农业组合物进一步指定的合适的液体载体特别是水相载[0101]通常，解淀粉芽孢杆菌FCC1256以其孢子形式而不是营养细胞的形式包含在合适以1.0x108CFU/mL至1.0x1014CF[0103]在浓缩物是液体形式的实施方案中，浓缩物可以是选自悬浮液浓缩物(SC或SD)、[0104]在其他实施方案中，所述浓缩物为固体形式，解淀粉芽孢杆菌FCC1256以8CFU/g至1.0x1014CFU/g如1.0x109CFU/g至1.0x1013CFU/g的浓度存在于浓缩物EN15784:2009确定(Animalfeedingstuffs.Isolationandenumerationof[0115]从美国北卡罗来纳州Autryville的草莓植物土壤中分离利程序的微生物保藏布达佩斯条约规定于2015年5月12日保藏在美国弗吉尼亚州Manassas[0116]最初，提取解淀粉芽孢杆菌FCC1256的全基因组序列数据以鉴别常规用于系统发孢杆菌属的代表性基因组菌株(枯草芽孢杆菌簇和蜡状芽孢杆菌(Bacilluscereus)簇)进[0117]每个基因还包括一个外群序列(outgroupsequence)。这些外群序列是从系统发[0119]将每个系统发育树重复1000次以评估系统发生分组的鲁棒性。对于每棵树，将++[0124]另外，进行了实验以确定解淀粉芽孢杆菌FCC1256在体外和在各种植物中在不同[0125]所述实验示出与含有贝莱斯芽孢杆菌QST713作为活性成分的可商购serenade8[0128]首先将解淀粉芽孢杆菌FCC1256从甘油原液中取出在固体82液加入培养基中：5mL的20％葡萄糖，1mL的1MCaCl2、1mL的0.1MMnCl2和10μL的0.1MFeSO4接种发酵罐(工作体积1.5L，Bioflo320，Eppendorf)。发酵在30℃进行，搅拌速度为[0129]在上述培养基中发酵解淀粉芽孢杆菌FCC1256和参考菌株QST713(得自商业菌素明显高于QST713。[0130]对代谢物浓缩物的进一步评估表明，FCC1256的伊枯草菌素:丰原素:表面活性肽[0133]将解淀粉芽孢杆菌FCC1256和QST713铺板于TSA平板中并在30℃过夜生长(16-182PO4豆琼脂(TSA)固体培养基中检测外，这个实验中使用的所有叶病原体均在马铃薯葡萄糖琼制备菌苔之前将小麦壳针孢在马铃薯葡萄糖培[0142]表3.表型测定：解淀粉芽孢杆菌FCC1256的植物激素产生、乙偶姻和吲哚乙酸+-+[0145]乙偶姻检测.将培养基中的20μL起始培养物移至1mLMethylRedVoges30分钟后对样品进行解释。显示红色表示乙偶姻产生。未接种的培养基用作阴性对照(Sokoletal.,1979,JournalofClinicalMicrobi丁质酶活性(N.K.S.Murthy&Bleakley,2012.“SimplifiedMethodofPreparingColloidalChitinUsedforScreeningofChitinaseProducingMicroorganisms”[0147]吲哚-3-乙酸.将培养基中的20μL起始培养物移至补充有0.5g/L色氨酸(Sigma阳性对比；将未接种的培养基用作阴性对照(Taghavi,etal.,2009,AppliedandEnvironmentalMicrobiolo铁和15g琼脂组成的Pikovskaya(PVK)琼脂培养基(pH7)上。透明区表示磷酸盐溶解细菌(Sharmaetal.,2011,JournalofMicrobiologyandBiotechnologyResearch1:90-[0154]将FCC1256的分离孢子在100％耗尽发酵液(SFB)中以1x108CFU/mL浓度配制(即取物+0.2gMgSO4[0155]类似地，将解淀粉芽孢杆菌RT