（正式版）DB34∕T 3737-2020 《大豆品种耐旱性与耐热性评价体系技术规程　》

2020-12-27实施2020-12-27实施I本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定11范围本文件规定了大豆品种耐旱性与耐热性评价体系构建过程中的干旱胁迫和热胁迫处理条件、处理仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本每盆装土和沙8kg～9kg。播前用1%次氯酸钠浸泡大豆种子1min~2min,纯水冲洗3～5次，于2处理前按正常田间管理，于大豆始花期(R1期)开始处理至成熟期(R8期)间不浇水，干旱胁迫后的土壤含水量范围为15.0%～20.0%,以形成有效的干旱胁迫效应，对照土壤含水量控制在围为40.0℃~45.0℃(通过升降塑料薄膜的覆盖高度调控处理温度),棚内湿度控制在50.0%～75.0%采集胁迫处理与对照植株上部第3、4复叶为实验材料，利用浸泡法检测其相对电导率(参见附录利用邻甲氧基苯酚(愈创木酚)显色法检测分析(参见附录D)。大豆收获期间，每种材料(处理和对照)考察10个单株的株高(cm)、单株荚数(个)、单株粒数(粒)、单株粒重(g)、百粒重(g)、籽粒饱满度(饱满/皱缩)等产量组分及性状。利用挂线标记大豆幼小花芽，于热胁迫处理后的第二天早上采集处理与对露白/紫但尚未开放),检测分析其花粉萌发率。37.1.2大豆响应干旱胁迫综合值(D)按公式(1)计算：U(xi)=(xi-xmin)/(xmax-xmin)聚类分析结果抗旱性等级耐旱型IV级较耐旱型III级中间型II级较敏感型D<0.20(或植株枯死)I级敏感型47.2.2大豆响应热胁迫综合值(H)按公式(2)计算：U(xi)=(xi-xmin)/(xmax-xmin)聚类分析结果耐热型IV级III级中间型II级I级敏感型5将处理组和对照组叶片用去离子水冲洗2次，再用洁净滤纸吸净表面水分。用6mm～8mm打孔器避开主脉打取叶圆片(或切割成大小一致的叶块),每组叶片打取叶圆片30片，分装在3支洁RC——相对电导率(%);6温下测定，温度25℃,湿度60%～70%,之后将所有样品放入烘箱，105℃杀青30min,再置于80℃烘干24h(烘干至恒重),冷却至室温后称其干重(DW)。RWC——相对含水量(%);7(资料性)按每克(叶片鲜重FW)大豆新鲜叶片加入3mL0.05mol/LpH7.8磷酸钠缓冲液，加入少量石英砂，于冰浴中的研钵内研磨成匀浆，定容至5mL刻度离心管中，于8500r/min(10000g)冷冻离心30min,上清液即为SOD酶粗提液。每个处理取8个洗净干燥好的微烧杯编号，按计算好的量加入各试剂及酶液，反应系统总体积为3mL。其中4-8号杯中磷酸钠缓冲液量和酶液量可根据试验材料中酶液浓度及酶活力进行调整(如酶液浓度大、活性强时，酶用量适当减少)。各试剂全部加入后，充光强为4500Lux的光照箱内(安装有3根20W的日光灯管)照光15min。然后立即遮光终止反应。在560nm波长下以1号杯液调零，测定各杯液光密度并记录结果。以2、3号杯液光密度的平均值作为抑制NBT光还原率100%,根据其他各杯液的光密度分别计算出不同酶液量的各反应系统中抑制B——一个酶活力单位的酶液量(uL);1000——换算系数，即1ml=1000uL;60——换算系数，即1h=60min。8(资料性)冲液提取一次，合并两次上清液备用。取光径1cm比色杯2个，向其中之一加入上述酶液1mL(酶活性过高可稀释),再加入反应混合液3mL,立即开启秒表记录时间：而向另一比色杯中加人0.20.01——A470每下降0.01为1个酶活单位(U);9为样品测定管(S₁,S₂),1支为空白管(So)(将酶液煮死),按顺序分别加入0.2磷酸缓冲液1.5mL和蒸馏水1.0mL,25℃预热后，逐管加入0.3ml0.1