CN117177993B 针对artemin的人抗体及其使用方法 （瑞泽恩制药公司）

2023.10.19PCT/US2022/0254242022.04.19WO2022/225985EN2022.10.27US2011135648A1,2011.06.09本公开提供了结合人artemin的抗体及其抗原结合片段。还提供了使用抗artemin抗体和抗2(a)由SEQIDNO:4的氨基酸序列组成的HCDR1、由SEQIDNO:6的氨基酸序列组成的IDNO:8的氨基酸序列组成的HCDRIDNO:12的氨基酸序列组成的IDNO:14的氨基酸序列组成的LCDR2和由SEQIDNO:26的氨基酸序列组成的IDNO:32的氨基酸序列组成的IDNO:34的氨基酸序列组成的LCDR2和由SEQIDNO:46的氨基酸序列组成的IDNO:52的氨基酸序列组成的IDNO:54的氨基酸序列组成的LCDR2和由SEQIDNO:66的氨基酸序列组成的IDNO:72的氨基酸序列组成的IDNO:74的氨基酸序列组成的LCDR2和由SEQ2.如权利要求1所述的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原由SEQIDNO:64的氨基酸序列组成的HCDR1、由SEQIDNO:66的氨基酸序列组成的3.如权利要求2所述的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原4.如权利要求2所述的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原5.如权利要求1所述的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原由SEQIDNO:4的氨基酸序列组成的HCDR1、由SEQIDNO:6的氨基酸序列组成的HCDR2、由SEQIDNO:8的氨基酸序列组成的HCDR3、由SEQI6.如权利要求5所述的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原37.如权利要求5所述的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原8.如权利要求1所述的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原由SEQIDNO:24的氨基酸序列组成的HCDR1、由SEQIDNO:26的氨基酸序列组成的9.如权利要求8所述的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原由SEQIDNO:44的氨基酸序列组成的HCDR1、由SEQIDNO:46的氨基酸序列组成的12.如权利要求11所述的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗13.如权利要求11所述的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗20.如权利要求1所述的单克隆抗体或其抗原结合片段在制备用于减少有此需要的受45[0001]本公开涉及特异性结合artemin的人抗体和人抗体的抗原结合片段，及其使用方[0003]序列表的正式副本以ASCII格式的序列表与说明书同时通过EFS_Web以电子方式[0004]Artemin(ARTN)是一种神经营养因子，所述神经营养因子是神经胶质细胞系衍生受体GFRα1_4构成。ARTN优先结合受体GFRα3，并且是GFRα3的唯一已知配体。ARTN和其他癌基因被发现。只有当配体首先结合其GFRα受体时，RET才被GDNF家族[0005]ARTN和GFRα3在发育期间高度表达，并且参与交感神经系统的发育。在成年小鼠(Airaksinen等人,NatureReviewsNeuroscience(2002),3:383_394；Airaksinen等人,根神经节(DRG)的感觉神经元(Orozco等人,EuropeanJ.Neuroscience,(2001),13:2177_明将artemin蛋白注射到啮齿动物的后爪中导致热痛觉过敏，并且当artemin与NGF共注射究显示，arteminmRNA表达在鼠炎性模型中上调，并且artemin转基因小鼠具有TRPV1和TRPA1的高表达以及对热和冷的高行为敏感性(Elitt等人,J.Neuroscience,(2006),266抗体或其抗原结合片段以如在25℃下通过表面等离子体共振测量的小于5nM的KD与结合人[0012]在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段与来自至少一种非人类物种的[0021](a)包含SEQIDNO:4的氨基酸序列的HCDR1、包含SEQIDNO:6的氨基酸序列的HCDR2、包含SEQIDNO:28的氨基酸序列的HCDR3、包含SEQIDNO:32的氨基酸序列的LCDR1、包含SEQIDNO:34的氨基酸序列的LCDR2和包含SEQIDNO:36的氨基酸序列的HCDR2、包含SEQIDNO:48的氨基酸序列的HCDR3、包含SEQIDNO:52的氨基酸序列的LCDR1、包含SEQIDNO:54的氨基酸序列的LCDR2和包含SEQIDNO:56的氨基酸序列的HCDR2、包含SEQIDNO:68的氨基酸序列的HCDR3、包含SEQIDNO:72的氨基酸序列的LCDR1、包含SEQIDNO:74的氨基酸序列的LCDR2和包含SEQIDNO:76的氨基酸序列的7[0028](a)包含SEQIDNO:2的氨基酸序列的HCVR和包含SEQIDNO:10的氨基酸序列的[0029](b)包含SEQIDNO:22的氨基酸序列的HCVR[0030](c)包含SEQIDNO:42的氨基酸序列的HCVR[0031](d)包含SEQIDNO:62的氨基酸序列的HCVR[0033](a)包含与SEQIDNO:18的氨基酸序列具有至少85％序列同一性的氨基酸序列的重链，和包含与SEQIDNO:20的氨基酸序列具有至少85％序列同一性的氨基酸序列的轻[0034](b)包含与SEQIDNO:38的氨基酸序列具有至少85％序列同一性的氨基酸序列的重链，和包含与SEQIDNO:40的氨基酸序列具有至少85％序列同一性的氨基酸序列的轻[0035](c)包含与SEQIDNO:58的氨基酸序列具有至少85％序列同一性的氨基酸序列的重链，和包含与SEQIDNO:60的氨基酸序列具有至少85％序列同一性的氨基酸序列的轻[0036](d)包含与SEQIDNO:78的氨基酸序列具有至少85％序列同一性的氨基酸序列的重链，和包含与SEQIDNO:80的氨基酸序列具有至少85％序列同一性的氨基酸序列的轻[0040]在另一方面，提供了包含编码抗体或其抗原结合片段的核苷酸序列的核酸分8给有此需要的受试者(例如，患有与artemin表达或活性相关的疾病、病症或病状的受试抗原结合片段的药物组合物在制备用于治疗与artemin表达或活性相关的疾病、病症或病[0048]图1.不同浓度的hArtemin_MMH(人Artemin)与Artem[0049]图2.不同浓度的MfArtemin_MMH(食蟹猴Artemin)与ArteminmAb捕获的Octet生[0050]图3.不同浓度的mArtemin_MMH(小鼠Artemin)与ArteminmAb捕获的Octet生物传9[0051]图4.在以10mg/kg施用抗artemin抗体(H4H33331P、H4H33335P、H4H33336P或H4H33349P)或同种型对照抗体(阴性对照)的动物中抑制artemin诱导的足底热 加工部分)。在一些实施方案中，artemin蛋白包含Uniprot登记号Q5T4W7中示出的人包含通过二硫键相互连接的四个多肽链(两个重(H)链和两个轻(L)链)的免疫球蛋白分子(在本文中缩写为LCVR或VL)和轻链可以进一步细分为被称为互补决定区(CDR)的高变区，其散布有更保守的被称为框架区(FR)的区。每个VH和VL由从氨基末端到羧基末端按照以下次序排列的三个CDR和四个FR构并列分析来定义氨基酸共有序列。蛋白。可以例如使用任何合适的标准技术(诸如和任选地抗体恒定结构域的DNA的操作和表达的重组基因工程技术)从全抗体分子衍生出尺寸或氨基酸组成并且通常将包括与一个或多个框架序列毗邻或符合读框的至少一个H结构域与VL结构域缔合的抗原结合片段中，VH和VL结构域可相对于彼此以任本公开的语境中使用的示例性双特异性形式包括但不限于例如基于scFv的或双体双特异10_7_8_9_10性结合抗原的方法是本领域已知的，包括例如平衡透析、表面等离子体共振(例如，BIACORETM由分配在样品板中的一种生物分子与固定在生物传感器板上的第二种生物分子的结合引起的干涉图案，例如使用octetg系统(SartoriusAG,Gittingen,Germany)来测量实时生物分子相互作用。段)相互作用的氨基酸的另一种方法是通过质谱法(HDX)检测的氢/氘交换。参见，例如，多肽具有相同或基本上类似的氨基酸序列的实质上改变蛋白的功能性质。如来自不同生物物种的同源多肽)之间或野生型蛋白和其突变蛋白之间的序列同源性或序数的计算机程序BLAST，尤其是BLASTP或TBLASTN。(参见，例如，Altschul等人,1990,J.Mol.Biol.215:403_410和1997NucleicAcids轻链或CDR)是指包含与参考多肽序列至少约70％_99.9％(例如至少70％、75％、80％、可由本领域的技术人员使用已知技术确定(参见例如Lloyd(1999)TheArt,ScienceandTechnologyofPharmaceu述专利通过引用并入本文。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段结合前体形式的artemin或其片段。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段结合蛋白水解加工形式的白或蛋白水解加工形式)。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段特异性结合人猴、恒河猴或黑猩猩artemin。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段特异性结合人artemin)交叉反应。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段不与来自非人物种的[0091](a)包含SEQIDNO:4的氨基酸序列的HCDR1、包含SEQIDNO:6的氨基酸序列的HCDR2和包含SEQIDNO:68的氨基酸序列的H[0095]在一些实施方案中，抗artemin抗体包含HCVR，其包含与SEQIDNO:2具有至少至少98％或至少99％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗artemin抗体包含包含SEQIDNO:8的氨基酸序列的HCDR3，其中HCVR与SEQIDNO:2具有至少85％、至少或至少99％序列同一性。在一些实施方案中，抗artemin抗体包含重链，其包含与SEQID[0096]在一些实施方案中，抗artemin抗体包含HCVR，其包含与SEQIDN至少98％或至少99％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗artemin抗体包含或至少99％序列同一性。在一些实施方案中，抗artemin抗体包含重链，其包含与SEQID[0097]在一些实施方案中，抗artemin抗体包含HCVR，其包含与SEQIDN至少98％或至少99％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗artemin抗体包含或至少99％序列同一性。在一些实施方案中，抗artemin抗体包含重链，其包含与SEQID[0098]在一些实施方案中，抗artemin抗体包含HCVR，其包含与SEQIDN至少98％或至少99％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗artemin抗体包含或至少99％序列同一性。在一些实施方案中，抗artemin抗体包含重链，其包含与SEQIDLCDR2和包含SEQIDNO:76的氨基酸序[0108]在一些实施方案中，抗artemin抗体包含：包含SEQIDNO:4的氨基酸序列的[0109]在一些实施方案中，抗artemin抗体包含：包含SEQIDNO:24的氨基酸序列的HCDR1、包含SEQIDNO:26的氨基酸序列的HCDR2和包含SEQIDNO:28的氨基酸序列的HCDR3；或包含SEQIDNO:32的氨基酸序列的LCDR1、包含SEQIDNO:34的氨基酸序列的LCDR2和包含SEQIDNO:36的氨基酸序列的LCDR3。在一些实施方案中，抗artemin抗体包在一些实施方案中，抗artemin抗体包含：HCVR，其包含SEQIDNO:22的氨基酸序列，和[0110]在一些实施方案中，抗artemin抗体包含：包含SEQIDNO:44的氨基酸序列的HCDR1、包含SEQIDNO:46的氨基酸序列的HCDR2和包含SEQIDNO:48的氨基酸序列的HCDR3；或包含SEQIDNO:52的氨基酸序列的LCDR1、包含SEQIDNO:54的氨基酸序列的LCDR2和包含SEQIDNO:56的氨基酸序列的LCDR3。在一些实施方案中，抗artemin抗体包在一些实施方案中，抗artemin抗体包含：HCVR，其包含SEQIDNO:42的氨基酸序列，和[0111]在一些实施方案中，抗artemin抗体包含：包含SEQIDNO:64的氨基酸序列的HCDR1、包含SEQIDNO:66的氨基酸序列的HCDR2和包含SEQIDNO:68的氨基酸序列的HCDR3；或包含SEQIDNO:72的氨基酸序列的LCDR1、包含SEQIDNO:74的氨基酸序列的LCDR2和包含SEQIDNO:76的氨基酸序列的LCDR3。在一些实施方案中，抗artemin抗体包在一些实施方案中，抗artemin抗体包含：HCVR，其包含SEQIDNO:62的氨基酸序列，和[0113]在一些实施方案中，本公开的抗artemin抗体或抗原结合片段可以与另一种功能入和/或缺失。通过将本文公开的氨基酸序列与可从例如公共抗体序列数据库获得的种系框架和/或一个或多个CDR残基中的一个或多个突变为不同的种系序列(即，不同于最初衍以这种通用方式获得的抗体和抗原结合片段涵盖在本中公开的PAM250对数似然矩阵中具有正值的任何变化：Gonnet等人(1992)Science256:[0117]本公开还包括抗体或抗原结合片段，其包含与本文公开的任何HCVR、LCVR和/或分子包含与表1、表2或表9中公开的序列具有至少85％序列同一性，例如至少90％、至少所述Fc结构域包含例如在与中性pH相比的酸性pH下增强或减弱抗体与FcRn受体结合的一抗体或抗原结合片段，其中所述突变增加了Fc结构域在酸性环境中(例如，在pH范围为约含一对或多对或一组或多组选自由以下组成的组的突变：250Q和248L(例如，T250Q和M248L)；252Y、254T和256E(例如，M252Y、S254T和T256E)；公开的抗体可变结构域内的其他突变都涵盖在本公开的范围个多核苷酸序列。[0125]在一些实施方案中，核酸分子包含编码分别包含SEQIDNO:4、6和8的HCDR1、分子包含SEQIDNO:17的多核苷酸序列或与SEQIDNO:17具有至少90％的序列同一性(例核酸分子包含SEQIDNO:19的多核苷酸序列或与SEQIDNO:19具有至少90％的序列同一含第一核酸分子的第一表达载体，所述第一核酸分子包含编码抗artemin抗体的HCVR的多抗体的LCVR的多核苷酸序列)。在一些实施方案中，表达载体包含两种或更多种核酸分子培养包含本文所述的一种或多种核酸序列和/或表达载体的宿主细胞，并且回收如此产生[0135]在一些实施方案中，包含本文所述的一种或多种核酸序列和/或载体的宿主细胞抗体或抗原结合片段来产生抗artemin抗体或抗原结合片[0137]本公开包括以高亲和力结合人artemin的抗体及其抗原结合片段。在一些实施方案中，本公开包括以小于约5nM的KD结合人ARTN(例如，在25℃下)的抗体及其抗原结合片蛋白序列的氨基酸108_220。在某些实施方案中，本公开的抗体或抗原结合片段以小于约用本文实施例2中定义的测定形式或基本类似的[0139]在一些实施方案中，本公开包括阻断ARTN蛋白与GFRα3结合的抗体及其抗原结合[0140]在一些实施方案中，本公开包括抑制artemin介导的细胞信号传导的抗体及其抗[0143]本领域普通技术人员已知的各种技术可以用于确定抗体是否在多肽或蛋白质内包括例如常规交叉阻断测定(诸如Antibodies,Harlow和Lane(ColdSpringHarborProteinScience9:487_496)。可以用于鉴定与抗体相互作用的多肽内的氨基酸的另一种方法是通过质谱法检测的氢/氘交换。一般而言，氢/氘交换方法涉及对感兴趣的蛋白进行对靶蛋白进行蛋白酶裂解和质谱分析，从而揭示氘标记的残基，这些残基对应于与抗体相互作用的特定氨基酸。参见例如，Ehring(1999)AnalyticalBiochemistry267(2):252_体与之相互作用的多肽内的氨基酸。合分析)以确认观察到的试验抗体的结合的缺乏是否实际上是由于与参考抗体结合相同的Biacore、流式细胞计量术或本领域可获得的任何其他定量或定性抗体结合测定来进行这种抗体抑制另一种抗体的结合至少50但优选地75％、90％或甚至99如在竞争性结合测定法中所测量，则两种抗体结合至相同的(或重叠)表位(参见例如，Junghans等人,体结合的氨基酸突变会减少或消除另一种抗体的结合，则认为这两种抗体结合相同的表130,081、US10,561,124和US10,640,800中描述遗传修饰的小鼠产生抗体的方法，这些文献的全部内容通过引用并入本文。如本文所用，结合分子、抗体、抗原结合片段或其免疫球蛋白结构域的每个多肽的全长上包含由来自人序列的DNA编码的氨基酸序列。在某些情况下，完全人在其他情况下，完全人类蛋白质或蛋白质序列包含嵌合序列，其中每个组分序列都来自人类序列。尽管不受任何一种理论的束缚，但嵌合蛋白或嵌合序列通常被设计成例如与任何野生型人免疫球蛋白区域或结构域相比在组分序列的连接处最小化免疫原性表位的产生。基本上生物等效的抗体的的序列。或其他生物流体中的抗体或其代谢物的浓度；(b)与人体内生物利用率数据相关联并且可其中测量了随时间推移的抗体(或其靶标)的适[0159]本文阐述的示例性抗体的生物等效变体可以通过例如对残基或序列进行各种置[0161]在另一方面，本公开提供了包含本文公开的抗artemin抗体和抗原结合片段的药各种药学上可接受的载体和赋形剂在本领域是众所周知的参见，例如，Remington's[0167]合适的笔式和自动注射器递送装置的实例包括但不限于AUTOPENTM(OwenCo.,Indianapolis,IN)、NOVOPENTMI、II和III(NovoNordisk,Copenhagen,Denmark)、NOVOPENJUNIORTM(NovoNordisk,Copenhagen,Denmark)、BDTM笔(BectonDickinson,的实例包括但不限于SOLOSTARTM笔(sanofi_aventis)、FLEXPENTM(NovoNordisk)和1984,载于MedicalApplicationsofControlledRelease,同上,第2卷,第115_138页)。[0171]在另一方面，本公开提供了使用本文公开的抗artemin抗体和抗原结合片段的方放射治疗诱导的神经性疼痛、放射相关疼痛或癌症经损伤；疼痛的神经瘤；异位近端和远端放电(ectopicproximalanddistal性疼痛；口面疼痛，包括鼻窦炎疼痛或牙痛；多发性硬化疼痛；麻风痛；格林_巴利疼痛[0175]在一些实施方案中，根据本文公开的方法向受试者施用的抗artemin抗体或抗原次施用单个初始剂量的抗体，接着施用一个或多个第二剂量的抗体，并且任选地接着施用一个或多个第三剂量的抗体。[0183]在一些实施方案中，每种第二剂量和/或第三剂量在紧接前一剂量后1周至14周[0184]本公开的方法可以包括向患者施用任意数量的第二剂量和/或第三剂量的抗体。免疫VELOCIMMUNE小鼠(即，包含编码人免疫球蛋白重链和ĸ链可变区的DNA的工程化小鼠)域和人恒定结构域的抗体)。使用此方法产生的抗ARTN抗体被命名为H4H33331P、干涉测定(BLI)测定法来确定Artemin与Artemin单克隆抗体(mAb)H4H33331P、H4H33335P、H4H33336P和H4H33349P中的每一种的结合。产生标记的Artemin蛋白，其包含以下的成熟X116R；X表示在那些特定位置的人序列)或小鼠(mArtemin，UniprotQ9Z0L2_1，氨基酸记的小鼠Artemin的序列在SEQIDNO:84摇动板。通过将生物传感器尖端浸没在含有2μg/mLArteminmAb的孔中40秒，不同的ArteminmAb首先被捕获到抗人抗体(AHC)包被的Octet生物传感器尖端(FortebioInc,#[0205]各种Artemin试剂与不同ArteminmAb的结合报告于表3中，并且浓度依赖性结合[0213]使用实时表面等离子体共振BiacoreT200生物传感器确定Artemin与Artemin单将在HBS_EP运行缓冲液中制备的不同浓度的ArteminmAb(60_2.2nM，3倍连续稀释)以50μL/min的流速注射到Artemin捕获的表面上3分钟，并且监测它们在HBS_ET运行缓冲液中的[0214]使用Scrubber2.0c曲线拟合软件将实时结合传感图拟合为具有质量传递限制的[0215]在25℃下Artemin与本发明的不同ArteminmAb结合的结合动力学参数展示于表[0216]如表4中所示，所有四种ArteminmAb在25℃下以范围为119pM至2.91nM的KD值结25℃下以范围为111pM至1.51nM的KD值结合MfArtemin_MMH。对于mAbH4H33335P也观察到别以113pM和346pM的KD值结合mArtemin_MM[0231]使用基于ELISA的形式开发了多种artemin阻断测定，以确定抗artemin(ARTN)抗[0232]在实验中使用的Artemin蛋白是上面的实施例2中公开的hArtemin_MMH、400pMmfARTN.mmh、或150pMmsARTN.mmh分别与抗ARTN抗体和不相关的IgG4抗体对照在氧化物酶(HRP)(Qiagen)缀合的抗_penta_[0234]使用PrismTM软件(GraphPad)中的s形剂量反应模型分析结合数据。定义为阻断50％ARTN.mmh与板包被的hGFRa3.hFc结合所需的抗体浓度的所计算的IC50值用作阻断效力的指标。基于两种artemin与一种抗体的结合化学计量，hARTN.mmh、mfARTN.mmh和[0237]使用多种阻断ELISA形式评估抗ARTN抗体阻断人、猴和小鼠artemin与人GFRa3结合的能力。在这些测定中，用各种浓度的抗ARTN抗体滴定75pMhARTN.mmh、400pM[0238]四种测试抗体有效地阻断了人、猴和小鼠artemin与板结合的人GFRa3的结合，最高测试浓度下的阻断IC50和阻断百分比。不相关的同种型对照抗体没有表现出阻断活[0243]为了评估抗Artemin抗体对Artemin介导的细胞信号传导的抑制，在HEK293细胞告基因(SRE_Luc，SABiosciences)转导并被工名为HEK293/SRELuc/hRET/hGFRa3cl.A3。在上面的实施例2中公开了Artemin蛋白同种型对照抗体在测定介质中连续稀释(1:3)至100nM至1.7pM的最终浓度(具有用于不含测试分子的单独测定介质的额外孔)，并且在37℃下在5％CO2中添加至含有固定浓度的统试剂(PromegaE6130)评估荧光素酶活性，并且使用Envision多标记板读数器(Perkin在没有配体或抗体的情况下测量的细胞的RLU值。3nMmfArtemin或1nMmArtemin测试抗Artemin抗体H4H33331P、H4H33335P、H4H33336P和最多五只一组在12小时光照/黑暗循环下圈养于温度受控的环境中，可随意获得水和标准水平和.05的α注射artemin的试验结果，计算出需要n为7_8只动物来检测恢复到基期以停止抗体治疗。选择7只动物的样品量进行实验，因为预期生长因子反应会被完全阻[0257]热痛觉过敏：使用Hargreaves测试来测试动物的热敏感性(Hargreaves等人,大光束曝光以避免组织损伤。使用单向独立组ANOVA对停药潜伏期进行统计分析以比较治[0259]在足底内生长因子诱导的痛觉过敏模型中评估了四种选择的人抗artemin抗体接受同种型对照抗体的动物的停药阈值，从而表明所有四种artemin抗体都有效抑制述的那些内容之外，本领域的技术人员根据前述说明和附图将显而易知本发明的各种修<110>瑞泽恩制药公司(RegeneronPharmaceuticals,Inc.)<120>针对artemin的人抗体及其使用方法<130>10907WO01<140>TBD<141>2022_04_19<150>63/177,369<151>2021_04_20<160>85<170>PatentIn版本3.5<210>1<211>366<212>DNA<213>人工序列(ArtificialSequence)<220><223>合成<400>1gaggtgcagctggtggagagcggcggcgacctggtgcagcccggcggcagcctgaagctg60agctgcgccgccagcggcttcaccttcagcggcagcgccatgcactgggtgaggcaggcc120agcggcaagggcctggagtgggtgggcaggatcaggaacaaggtgcacaggtacgccacc180gagtacggcgccagcgtgaagggcaggttcaccatcagcagggacgacagcaagaacacc240gcctacctgcagatgaacagcctgaagatcgaggacaccgccgtgtactactgcgtggtg300gtggtgcccggcagcatcgaggccttcgacatctggggccagggcaccatggtgaccgtg360agcagc366<210>2<212>PRT<213>人工序列(ArtificialSequence)<220><223>合成<400>2GluValGlnLeuValGluSerGlyGlyAspLeuValGlnProGlyGlySerLeuLysLeuSerCysAlaAlaSerGlyPheThrPheSerGlySerAlaMetHisTrpValArgGlnAlaSerGlyLysGlyLeuGluTrpValGlyArgIleArgAsnLysValHisArgTyrAlaThrGluTyrGlyAlaThrAspAspSerAsnLysSerValLysGlyArgPheThrIleThrAspAspSerAsnLysGluAspThrAlaValTyrAlaTyrLeuGlnMetAsnSerLeuGluAspThrAlaValTyrGluAlaPheAspTrpTyrCysValValValValProGlyGluAlaPheAspTrpGlyGlnGlyThrMetValThrValSerSer3<210>3<211>DNA<212>DNA<213>人工序列(ArtificialSequence)<213><220>合成<223>合成3<400>3ggcttcaccttcagcggcagcgcc4<210>48<211>8PRT<212>PRT<213>人工序列(ArtificialSequence)<213><220>合成<223>合成4<400>4GlyPheThrPheSerGlySerAla55<210>5<211>DNA<212>DNA<213>人工序列(ArtificialSequence)<213><220>合成<223>合成5<400>5atcaggaacaaggtgcacaggtacgccacc6<210>6<211>PRT<212>PRT<213>人工序列(ArtificialSequence)<213><220>合成<223>合成6<400>6IleArgAsnLysValHisArgTyrAlaThr7<210>7<211>DNA<212>DNA<213>人工序列(ArtificialSequence)<213><220>合成<223>合成7<400>7gtggtggtggtgcccggcagcatcgaggccttcgacatc8<210>8<211>PRT<212>PRT<213>人工序列(ArtificialSequence)<213><220>合成<223>合成8<400>8AspIleValValValValProGlySerIleGluAlaAspIle9<210>9<211>DNA<212>DNA<213>人工序列(ArtificialSequence)<213><220>合成<223>合成9<400>9gcgtgggcgacagggtgaccgacatccagatgacccagagccccagcagcctgagcgccagcgtgggcgacagggtgaccactggtaccagcagaagcccatcacctgcagggccagccagagcatcagcacctacctgaactggtaccagcagaagccctggagagcggcgtgcccagcggcaaggcccccaacctgctgatctacgccgccagcaccctggagagcggcgtgcccagcccatcagcagcctgcagccc240aggttcagcggcagcggcagcggcaccgacttcaccctgaccatcagcagcctgcagccc240tcccctggaccttcggccaggaggacttcgagatctactactgccagcagagctacaacatcccctggaccttcggccagggcaccaaggtggagatcaag<210><211>PRT<212>PRT<213>人工序列(ArtificialSequence)<213><220>合成<223>合成<400>SerAlaSerValGlyAspIleGlnMetThrGlnSerSerAlaSerValGlySerIleSerThrTyrAspArgValThrIleThrCysSerIleSerThrTyrLysLeuAsnTrpTyrGlnGlnLysProGlyLysAlaProAsnLeuLeu45ValTyrAlaAlaSerThrLeuGluSerGlyValProSerArgPheSerGlyThrSerGlySerGlyThrAspPheThrLeuThrSerSerLeuGlnProGlnGluAspPheGluIleTyrTyrCysGlnGlnSerTyrAsnProTrpThrPheGlyGlnGlyThrLysValGluLys<210><211>DNA<212>DNA<213>人工序列(ArtificialSequence)<213><220>合成<223>合成<400>cagagcatcagcacctac<210>6<211>6PRT<212>PRT<213>人工序列(Artifici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