CN118416083B 一种利用大肠杆菌胞外多糖抗生物膜的方法 （中国科学院理化技术研究所）

号US2009318382A1,2009.12.24一种利用大肠杆菌胞外多糖抗生物膜的方法本发明公开一种利用大肠杆菌胞外多糖抗糖抑制细菌生物膜的形成以减少生物膜形成总糖由以下摩尔百分数的单糖组成：甘露糖21.大肠杆菌胞外多糖在制备抑制细菌生物膜的形成及分散细菌成熟生物膜的药物中3剂的杀灭以及免疫系统的识别。[0003]在自然界及临床上，微生物生物膜以多种细菌共同存在的共生生物膜形式为使用会造成微生物产生耐药性，因此提高微生物对抗生素的敏感性是目前亟需解决的问4[0020]进一步，所述抑制细菌生物膜的形成是将含大肠杆菌胞外多糖的PBS与细菌菌悬[0021]所述分散细菌成熟生物膜是根据孔板或基底大小将100μL_2mL细菌菌悬液培养[0023]进一步，所述抑制细菌生物膜的形成是将含大肠杆菌胞外多糖和抗生素的PBS与[0024]所述分散细菌成熟生物膜是根据孔板或基底大小将100μL_2mL细菌菌悬液培养将细菌菌悬液培养24_48h后，弃去培养菌液，然后加入含大肠杆菌胞外多糖的PBS孵育2_[0027]进一步，所述含大肠杆菌胞外多糖和抗生素的PBS中大肠杆菌胞外多糖的浓度为[0029]当分散细菌成熟生物膜时，所述含大肠杆菌胞外多糖和抗生素的PBS中抗生素的[0031]本发明使用无杀菌能力但对生物膜有显著抑制效果的大肠杆菌胞外多糖来抑制[0032]大肠杆菌胞外多糖可以通过阻止细菌间以及细菌与表面的黏附从而抑制细菌生5[0033]对于妥布霉素这类抗生素而言，在低浓度下会出现促进[0039]图6为本发明实施例12中大肠杆菌胞外多糖的提前孵育对妥布霉素杀灭成熟生物膜内的细菌的作用。[0040]图7为本发明实施例13中大肠杆菌胞外多糖的提前孵育对妥布霉素穿透成熟生物[0043]为了更清楚地说明本发明，下面结合优选实施例和附图对本发明做进一步的说[0046]含大肠杆菌胞外多糖的PBS是指将冻干后的大肠杆菌胞外多糖溶解在10mM的PBS地，金黄色葡萄球菌菌悬液是将金黄色葡萄球菌(ATCC6538)在TSB培养基中37℃培养18_铜绿假单胞菌在LB培养基中37℃培养18_24小时，调节其菌悬液的浓度为107CFU/mL杆菌菌悬液是将大肠杆菌(ATCC25922)在LB培养基中37℃培养18_24小时，调节其菌悬液6[0050]挑取大肠杆菌(ATCC25922)菌落置于LB培养基中扩增，在37℃摇床培养18_24h。磨后的大肠杆菌胞外多糖/KBr置于压片模具中进行压片，制备好的KBr压片放置于红外光的弱峰分别是羟基和C_H伸展振动产生的1642cm[0056]将含有大肠杆菌胞外多糖的PBS与铜绿假单胞菌(PAO1)菌悬液进行混合(体积比[0058]将含有大肠杆菌胞外多糖的PBS与金黄色葡萄球菌菌悬液进行混合(体积比为1:7[0065]将铜绿假单胞菌(PAO1)菌悬液在37℃恒温培养箱中培养24h和48h，弃去培养菌10mM的PBS清洗浮游细菌，加入2.5％的戊二醛溶液对生物膜进行固定，在4℃下固定4h以[0067]将金黄色葡萄球菌菌悬液在37℃恒温培养箱中培养48h，弃去培养菌液，将浓度100μg/mL的含有大肠杆菌胞外多糖的PBS加入到上述培养好的成熟生物膜中进行孵育，孵的含有大肠杆菌胞外多糖的PBS加入到上述培养好的成熟生物膜中进行孵育，孵育时间8与铜绿假单胞菌(PAO1)菌悬液在37℃恒温培养箱中培养24h，分别记为阴性对照组(浓度与铜绿假单胞菌(PAO1)菌悬液在37℃恒温培养箱中培养24h，分别记为阴性对照组(浓度别加入PBS、妥布霉素、大肠杆菌胞外多糖以及大肠杆菌胞外多糖稀释的妥布霉素进行孵9将生物膜内的细菌分散为菌悬液，对得到的菌悬液进行梯度稀释，将细菌浓度稀释至使用激光共聚焦显微镜观察生物膜内细菌的死活情况。结果参见图7，与同浓度抗生素相[0086]本实施例使用小鼠植入物生物膜感染模型验证大肠杆菌胞外多糖用于治疗生物[0087]使用康道宁Sylgard184PDMS制备植入物，在植入物置于用LB肉汤对细菌进行计数，可知胞外多糖的使用显著减少了PDMS表面生物膜内的菌落数(图9中a)。以及H&E染色，可知大肠杆菌胞外多糖的使用显著改善了生物膜感染对小鼠的皮肤感染带明的技术方案所引伸出的显而易见的变化或变动仍处于本发明的保护范围之列。