CN118638781B 使用环状RNA和microRNA进行细胞重编程的组合物和方法 （毕昇(北京)生物科技有限公司）

使用环状RNA和microRNA进行细胞重编程的本发明提供了使用环状RNA和microRNA进行细胞重编程的组合物和方法。一种使用环状RNA和microRNA进行细胞重编程的组合物和方法。本发明将特定的miRNA组合与环状RNA联合2MYC、NANOG和LIN28A的外源环状RNA分子；所述miRNA混合物为hsa_miR_17_5p/hsa_miR_2.如权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述circula无RNase的ddH2O中以1000ng/μl的终浓度制备circularRNA混合物，其中OCT4与其他5个因3.如权利要求1所述的组合物，其特征在于，所miRNA溶解在RNasefree的ddH2O中，制成最终浓度为5μM的原液；将4.如权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述组合物包括circularRNA混合物和hsa_miR_17_5p/hsa_miR_23a_3p混合物，其中，所述circularRNA混合物为OCT4、SOX2、5.如权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述组合物包括circularRNA混合物和hsa_miR_17_5p/hsa_miR_144_3p混合物，其中，所述circularRNA混合物为OCT4、SOX2、6.如权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述组合物包括circularRNA混合物和hsa_miR_17_5p/hsa_miR_340_3p混合物，其中，所述circularRNA混合物为OCT4、SOX2、7.一种使用权利要求1_6任一项所述的组合物制备诱导性多能干细胞(iPSCs)的方法，3[0001]本发明涉及细胞重编程技术领域，特别涉及使用环状RNA和microRNA进行细胞重[0002]重编程是指不改变基因序列的情况下，通过表观遗传修饰如DNA甲基化来改变细胞命运的过程。原指哺乳动物生殖细胞发育过程中消除其亲本携带的表观遗传标志的过进行重编程。OSKMLN的这四种环状RNA是采用源自T4噬菌体的胸苷酸合酶基因或鱼腥藻的pretRNALeu的重排内含子_外显子(permutedintron_exon,PIE)I型内含子自剪接系统在室自制mRNA(参考：High_efficiencyRNA_basedreprogrammingofhumanPrimaryfilblasts)和ReproCELL(cat.00_0076)和Miltenyi(cat.130_132_990)的mRNA重编程试剂提高诱导性多能干细胞诱导率是该行业面临的主要[0006]针对现有技术所存在的技术问题，本发明提供了一种使用环状RNA和microRNA进4[0012]进一步优选地，所述组合物包括circularRNA混合物和hsa_miR_17_5p/hsa_miR_[0013]进一步优选地，所述组合物包括circularRNA混合物和hsa_miR_17_5p/hsa_miR_[0014]进一步优选地，所述组合物包括circularRNA混合物和hsa_miR_17_5p/hsa_miR_[0015]本发明的另一目的在于提供了一种使用上述组合物制备诱导性多能干细胞5括circularRNA混合物和hsa_miR_17_5p/hsa_miR_23a_3考CN201410604749.7中公开的外源环状RNA分子的构[0033]所述hsa_miR_17_5p/hsa_miR_23a_3p混合物的制备方法是将冻干的microRNA溶括circularRNA混合物和hsa_miR_17_5p/hsa_miR_144_3考CN201410604749.7中公开的外源环状RNA分子的构[0038]所述hsa_miR_17_5p/hsa_miR_144_3p混合物的制备方法是将冻干的microRNA溶括circularRNA混合物和hsa_miR_17_5p/hsa_miR_340_3考CN201410604749.7中公开的外源环状RNA分子的构[0043]所述hsa_miR_17_5p/hsa_miR_144_3p混合物的制备方法是将冻干的microRNA溶括circularRNA混合物和has_miR_367_3p/has_miR_302a_36考CN201410604749.7中公开的外源环状RNA分子的构[0048]所述has_miR_367_3p/has_miR_302a_3p混合物的制备方法是将冻干的microRNA[0053]1)向6孔细胞培养皿中加入使用了DMEM/F12稀释了100倍的Matrigel354277[0054]2)将原代人新生儿成纤维细胞以6孔细胞培养皿格式每孔200至100,000个细胞的密度铺在MatrigeI®包被的培养皿上；[0067]每隔48小时进行一次转染，在前8天每次转染后24小时更换为