（正式版）DB34∕T 1536-2011 《水产品中酸性橙II和酸性金黄G(皂黄)的测定 液相色谱-串联质谱法》

ICS67.120.30DB34/T1536—2011G(皂黄)的G(皂黄)的测定液相色谱-串联质谱法 20111115发 I本标准起草单位：国家农副加工食品质量监督检验中心、安徽国家农业标准化与监测中心。本标准主要起草人：何俊、徐彦辉、顾亮、丁磊、董思恩、沈宏林、程浩、谭炜。DB34/T1536—20111水产品中酸性橙Ⅱ和酸性金黄G(皂黄)的测定液相色谱-串联质谱法下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3原理水产品中的酸性橙Ⅱ和皂黄用丙酮溶液提取，经弱阴离子交换固相萃取柱(WAX)净化后，液相色谱-串联质谱法测定，外标法定量。4.2甲醇：色谱纯。4.3乙腈：色谱纯。4.4甲酸：色谱纯。4.5丙酮。4.6氨水。4.7固相萃取柱平衡溶液：0.5%甲酸水溶液。4.11流动相B:乙腈。萃取柱平衡溶液(4.6)活化。4.13标准品：酸性橙Ⅱ和皂黄，纯度大于98%。4.14标准储备液(0.10mg/mL):称取适量酸性橙Ⅱ和皂黄标准品，分别用甲醇配成0.10mg/mL的标准储备液，-18℃保存，保存期为六个月。2DB34/T1536—20114.15混合标准储备溶液(1μg/mL):吸取酸性橙Ⅱ和皂黄标准储备溶液(4.13),用甲醇稀释成14.16混合标准工作溶液：根据需要，临用前吸取一定量的混合标准储备溶液(4.14),用50%甲醇水溶液稀释成适当浓度的混合标准工作液。5.6旋涡混匀器。6.1提取称取5.00g试样于50mL离心管中，加入5g无水硫酸钠和20.0mL丙酮，匀浆2min,超声提取30min,旋涡混匀，10000r/min离心10min,上清液转移至100mL鸡心瓶中；残渣中再加入20.0mL丙酮，重复提取一次，合并两次提取溶液，45℃下旋蒸至近干，加入5mL0.5%甲酸水溶液，旋涡混匀后待用。6.2净化弱阴离子固相萃取柱，使用前依次用3mL甲醇、3mL水以及3mL固相萃取柱平衡溶液(4.6)活化，样品提取液全部过柱，再依次用0.5%甲酸水溶液，甲醇各3mL淋洗，抽干。用3mL洗脱液 (4.7)洗脱，收集洗脱液，氮吹至近干，用流动相定容至1.0mL,过0.22μm滤膜后供液相色谱-6.3.1色谱条件a)色谱柱：ZorbaxExtend-C18柱(50mm×2.1mm×1.8μm)或相当者；d)流动相及流速见表1。DB34/T1536—20113表1液相色谱梯度洗脱条件时间(min)流速(μL/min)流动相A流动相B05a)离子源：电喷雾离子源(ESI);d)雾化气(NEB)、气帘气(CUR)、碰撞气(CAD)均为高纯氮气；使用前应调节各气体流量以使质谱灵敏度达到检测要求；f)定性离子对和定量离子对见表2。名称母离子(m/z)子离子(m/z)碰撞电压(V)碰撞能量(V)酸性橙Ⅱ352.1皂黄327.16.3.3.1定性测定各检测目标化合物以保留时间和两对离子的(特征离子对/定量离子对)所对应的LC-MS/MS色谱峰面积相对丰度进行定性。要求被测试样中目标化合物的保留时间与标准溶液中目标化合物的保留时间一致(偏差±0.5%),同时要求被测试样中目标化合物的两对离子丰度比与标准溶液中目标化合物的丰度比一致，相对丰度>50%、20～50%、10～20%、<10%时，容许偏差分别为±20%、±25%、±30%和±50%。6.3.3.2定量分析本标准采用外标校准曲线法定量测定。以酸性橙Ⅱ和皂黄的标准溶液浓度为横坐标，定量离子的峰面积为纵坐标，作校准曲线线性回归方程，以试样的峰面积与标准曲线比较定量。按以上步骤，对同一试样进行平行测定。4测定结果按式(1)计算：V—样品定容体积，单位为毫升(mL);W—样品称样量，单位为克(g)。和皂黄的回收率范围为70～110%,相对标准偏差小于10%。9.2精密度DB34/T1536—2011(资料性附录)DCMidi-DCMidi-dd总离子流图2李415000agid皂黄的选择离子流图D2酸性橙的选择离子流图s;2710fm0007Eata酸性橙的选择离子流图