NYT 4748-2025 饲料中大观霉素的测定 液相色谱-串联质谱法标准立项发展报告

饲料中大观霉素的测定液相色谱-串联质谱法标准立项发展报告StandardizationDevelopmentReport:DeterminationofSpectinomycininFeedsbyLiquidChromatography-TandemMassSpectrometry摘要随着畜牧养殖业规模化、集约化程度的持续提升，兽用抗生素在饲料添加剂和疾病防治中的应用日益广泛，由此引发的畜产品质量安全及细菌耐药性问题受到社会各界高度关注。大观霉素作为一种常用的氨基糖苷类抗生素，其在饲料中的残留水平直接关系到动物源食品安全和人体健康。然而，长期以来我国缺乏针对饲料中大观霉素检测的国家级或行业级标准方法，导致检测依据不一、结果可比性差，制约了饲料质量安全监管效能的提升。本标准（NY/T4748-2025）是农业行业首部专门针对饲料中大观霉素测定的液相色谱-串联质谱法标准，由中华人民共和国农业农村部于2025年4月27日发布，于2025年8月1日正式实施。本标准确立了基于液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS）技术的饲料中大观霉素定量分析方法，涵盖样品提取、固相萃取净化、色谱分离、质谱检测及定量计算等完整技术流程，具有灵敏度高、选择性好、抗干扰能力强等显著技术优势。本报告的编制旨在系统阐述该标准的立项背景、编制原则、核心技术内容和预期实施效益，为标准使用者提供全面的技术解读和应用指导，同时为饲料质量安全监管体系的持续完善提供参考依据。关键词：饲料安全；大观霉素；液相色谱-串联质谱法；标准制定；兽药残留检测；质量控制Keywords:FeedSafety;Spectinomycin;LiquidChromatography-TandemMassSpectrometry;StandardDevelopment;VeterinaryDrugResidueDetection;QualityControl1引言1.1立项背景与意义大观霉素（Spectinomycin），又称壮观霉素，是一种由链霉菌产生的氨基环醇类抗生素，其化学结构中含有稠合环系和多个羟基与氨基基团（分子式C₁₄H₂₄N₂O₇，分子量332.35），易溶于水，微溶于甲醇，几乎不溶于乙醚、氯仿等有机溶剂。大观霉素通过与细菌核糖体30S亚基结合，干扰蛋白质合成而发挥抑菌作用，对革兰氏阴性菌和部分革兰氏阳性菌具有良好抗菌活性，对支原体亦有较强抑制作用。因其抗菌谱较广、残留较低、毒性较小、与氯霉素无交叉耐药性等特点，大观霉素被广泛应用于畜禽消化道和呼吸道感染的预防与治疗。然而，不当使用或超量添加大观霉素可能导致其在动物体内残留超标，并通过食物链传递至人体，引发过敏反应、肠道菌群失调等健康风险。1.2国内外标准现状分析在国际层面，世界卫生组织食品法典委员会（CodexAlimentariusCommission,CAC）对大观霉素在动物源性食品中的最大残留限量（MRL）已有明确规定。欧盟委员会法规（EU）No37/2010规定牛、羊、猪、鸡的肌肉、脂肪、肝脏、肾脏等组织中大观霉素的MRL值为200~500μg/kg不等；日本肯定列表制度（PositiveListSystem）亦设定了大观霉素在食用动物组织中的一律限量标准。在检测方法方面，国际标准化组织（ISO）和美国分析化学家协会（AOAC）均发布过针对动物组织中抗生素残留的LC-MS/MS检测方法，但专门针对饲料基质中大观霉素测定的国际标准仍较为稀缺。在国内层面，现行有效的检测标准主要集中于动物源性食品基质。GB31658.6-2021《动物性食品中大观霉素残留量的测定液相色谱-串联质谱法》适用于猪、牛、羊和鸡的肌肉、脂肪、肝脏和肾脏中大观霉素残留量的测定。农业农村部公告第250号《食品动物中禁止使用的药品及其他化合物清单》虽未将大观霉素列入禁用清单，但对其使用规范有明确要求。值得关注的是，在饲料基质方面，此前长期缺乏专门针对大观霉素测定的行业标准，仅有部分地方标准或企业内部方法在有限范围内使用，检测方法的统一性和规范性不足，难以满足饲料质量安全监管的实际需求。1.3标准立项的必要性综上所述，制定《饲料中大观霉素的测定液相色谱-串联质谱法》农业行业标准具有充分的必要性和紧迫性，主要体现在以下几个方面：第一，填补标准空白。截止本标准发布前，我国尚无专门针对饲料基质中大观霉素检测的国家标准或行业标准，饲料中该药物残留的检测缺乏统一的标准化技术依据。第二，完善监管体系。随着农业农村部持续推进“饲料中药物饲料添加剂退出计划”和“兽用抗菌药使用减量化行动”，亟需配套的检测标准提供技术支撑，以保障监管措施的落地实施。第三，适应行业发展需求。饲料生产企业质量控制和第三方检测机构开展委托检验均需要权威、统一的检测方法标准作为技术依据，以统一评价尺度、规范市场秩序。2标准编制原则与技术依据2.1编制原则本标准的编制遵循以下基本原则：（1）科学性。在方法学研究和验证基础上，采用液相色谱-串联质谱法这一国际公认的兽药残留确证技术，确保检测结果的准确性、可靠性和可重复性。（2）适用性。充分考虑我国饲料行业的生产实际和检测机构的仪器配置水平，在保证方法灵敏度的前提下，兼顾方法的经济性和推广可行性。（3）规范性。标准的结构和编写规则符合GB/T1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定，技术内容的表述做到准确、严谨、无歧义。（4）协调性。在与现有国家标准、行业标准保持协调一致的基础上，参考国内外相关检测技术标准的先进经验，确保标准的先进性和兼容性。（5）可操作性。样品前处理流程设计注重简便高效，方法条件优化兼顾不同实验室的设备差异，确保不同检测机构之间具有良好的重现性。2.2技术依据本标准的技术路线确立主要基于以下技术考量：（1）分析技术选型。液相色谱-串联质谱法（LC-MS/MS）因其卓越的选择性和灵敏度，已成为兽药残留检测领域的主流确证技术。该方法通过色谱分离与质谱检测的联用，能够有效消除饲料复杂基质带来的干扰，满足痕量分析的要求。相较于高效液相色谱法（HPLC）和酶联免疫吸附法（ELISA），LC-MS/MS在多残留同时检测和确证能力方面具有显著优势，符合当前国际兽药残留检测方法发展的主流趋势。（2）标准参考依据。本标准的制定充分参考了以下现有标准和技术文件：GB31658.6-2021《动物性食品中大观霉素残留量的测定液相色谱-串联质谱法》和GB/T21323-2007《动物组织中氨基糖苷类药物残留量的测定高效液相色谱-质谱/质谱法》等。在方法学指标设定方面，参考了CAC/GL71-2009《分析方法性能指标指南》和国际纯粹与应用化学联合会（IUPAC）关于方法验证的技术规范要求。（3）政策法规依据。本标准的编制严格遵循《中华人民共和国标准化法》《中华人民共和国农产品质量安全法》《饲料和饲料添加剂管理条例》以及《农业农村部关于加快推进农产品质量安全追溯体系建设的意见》等法律法规和政策文件的要求。2.3技术路线与方法原理本标准采用液相色谱-串联质谱法（LC-MS/MS）测定饲料中大观霉素的含量。方法的核心技术流程如下：（1）样品提取。利用大观霉素易溶于水和酸性溶液的特性，采用酸性水溶液或含适当有机改性剂的提取液对饲料样品进行提取，使待测物从饲料基质中充分释放。提取过程中可辅以涡旋振荡和超声处理以提高提取效率。（2）净化。采用固相萃取（SPE）技术对提取液进行净化处理，利用大观霉素在特定固相萃取柱上的选择性保留行为，有效去除饲料中蛋白质、脂肪、色素等干扰物质。上样、淋洗和洗脱条件均需经过系统优化，以确保回收率和净化效果的平衡。（3）色谱分离。采用亲水相互作用色谱（HILIC）或反相色谱模式，以含离子对试剂的酸性流动相体系（如含七氟丁酸或三氟乙酸的乙腈-水体系）对大观霉素进行色谱分离。由于大观霉素极性较强，在常规C18反相色谱柱上保留较弱，通常需采用HILIC模式或加入离子对试剂以改善色谱保留行为。（4）质谱检测。采用电喷雾离子源（ESI）正离子模式，以多反应监测（MRM）方式采集数据。选择大观霉素的特征母离子-子离子对进行定性确认和定量分析，其中定量离子对用于含量计算，定性离子对用于阳性确证。质谱参数的优化以确保方法灵敏度和选择性最优为目标。（5）定量方法。采用外标法或基质匹配标准曲线法进行定量。为消除基质效应的影响，推荐采用基质匹配校准溶液绘制标准曲线；必要时可采用同位素内标法（如以氘代大观霉素为内标物）进行校正，以获得更为准确的定量结果。3标准主要内容3.1范围本标准规定了饲料中大观霉素测定的液相色谱-串联质谱法。适用于配合饲料、浓缩饲料、添加剂预混合饲料和精料补充料等各类饲料产品中大观霉素含量的测定。本标准的检出限和定量限根据实际样品基质确定，满足饲料质量安全监管对痕量检测的技术要求。3.2规范性引用文件本标准规范性引用了以下文件：GB/T6682《分析实验室用水规格和试验方法》、GB/T14699.1《饲料采样》、GB/T20195《动物饲料试样的制备》等。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件；凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。3.3方法原理（详见本文2.3节技术路线与方法原理部分的详细描述。）3.4试剂与材料本标准规定了检测所需的全部试剂与材料，主要包括：大观霉素标准品（纯度≥95%，以干品计）、色谱纯乙腈和甲醇、分析纯甲酸、三氟乙酸或七氟丁酸（离子对试剂，根据色谱条件选择使用）、固相萃取柱（如WCX弱阳离子交换柱或MCX混合型阳离子交换柱等）、微孔滤膜（有机相滤膜，孔径0.22μm）等。所有试剂纯度需满足分析要求，实验用水应符合GB/T6682中一级水的规定。3.5仪器与设备本标准规定的主要仪器设备包括：液相色谱-串联质谱仪（配有电喷雾离子源，具备MRM采集功能）、分析天平（感量0.01mg和0.01g）、涡旋振荡器、超声波清洗器、高速离心机（转速≥10,000r/min）、氮吹仪、固相萃取装置、pH计等。仪器的性能指标须满足标准方法对灵敏度、精密度和重现性的要求。3.6试样制备与保存按照GB/T14699.1和GB/T20195的规定进行实验室样品的采样和制备。样品经四分法缩分后，粉碎并通过0.45mm（或0.5mm）分析筛，充分混匀，装入洁净密封容器中，标明样品信息。试样制备过程中应避免交叉污染和待测物降解，制备后的试样应于避光、干燥、阴凉处保存。3.7分析步骤（1）提取。准确称取试样适量（精确至0.01g）于50mL具塞离心管中，加入提取溶液（如5%三氯乙酸水溶液或0.1mol/L盐酸溶液-乙腈混合溶液），涡旋混匀后超声提取适当时间，离心后收集上清液，残渣可按相同步骤重复提取一次，合并提取液并定容。（2）净化。取适量提取液以适当流速通过预先活化的固相萃取柱，依次用淋洗液去除杂质，再以洗脱液洗脱大观霉素，收集洗脱液，于适当温度下氮吹至近干，以初始流动相或适当溶剂复溶，过微孔滤膜后供仪器测定。（3）基质匹配标准溶液的制备。取空白饲料样品，按上述提取和净化步骤处理后所得的空白基质溶液，配制系列浓度的基质匹配标准工作溶液，以校正基质效应。（4）仪器测定。设置液相色谱-串联质谱仪参数，待仪器稳定后，依次进样分析空白溶液、系列标准工作溶液和试样溶液。以定量离子对的峰面积为纵坐标、对应的质量浓度为横坐标绘制标准工作曲线。3.8结果计算与表述试样中大观霉素的含量按标准中给出的计算公式计算，以质量分数表示（μg/kg或mg/kg），计算结果保留三位有效数字。当检测结果小于定量限时，报告为“未检出（＜定量限）”。3.9精密度与准确度本标准规定了方法的精密度要求，包括重复性限（r）和再现性限（R）的允许差范围。在空白饲料样品中添加三个不同浓度水平的回收率试验结果应符合标准中规定的范围（通常为70%~120%）。实验室间比对验证结果表明，方法的重复性和再现性均满足兽药残留分析标准方法的技术要求。3.10检出限与定量限本标准的检出限（LOD）和定量限（LOQ）分别以信噪比S/N=3和S/N=10确定。根据基质差异，检出限约为0.5~2.0μg/kg，定量限约为1.5~5.0μg/kg，可满足饲料中违禁添加药物筛查和残留监控的技术需求。4标准参与起草单位介绍4.1主要起草单位概况本标准由全国饲料工业标准化技术委员会提出并归口，联合多家国家级科研院所和权威检测机构共同起草完成。主要起草单位包括：中国农业科学院农业质量标准与检测技术研究所（国家饲料质量检验检测中心）、中国农业科学院饲料研究所、中国兽医药品监察所等。4.2牵头单位详细介绍中国农业科学院农业质量标准与检测技术研究所（以下简称“质标所”）是本次标准制定的牵头单位，同时挂靠“国家饲料质量检验检测中心”，是我国饲料质量安全检测技术研究的国家级权威机构。质标所长期致力于农产品及投入品质量安全检测技术研究，在兽药残留检测、饲料质量安全评价、风险评估等领域具有深厚的研究积累和雄厚的技术实力。近年来，质标所主持完成国家级科研项目数十项，制修订国家标准和行业标准百余项，多项检测方法标准达到国际先进水平，为我国农产品质量安全监管提供了重要的技术支撑。在饲料安全检测技术研发方面，质标所建有完善的色谱-质谱分析平台，配备涵盖高效液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS）、气相色谱-串联质谱（GC-MS/MS）、电感耦合等离子体质谱（ICP-MS）等多种大型精密分析仪器，具备开展复杂基质中痕量药物残留检测方法开发和标准化的优越条件。质标所具有中国合格评定国家认可委员会（CNAS）实验室认可和检验检测机构资质认定（CMA）资质，在实验室质量管理和方法验证方面积累了丰富的实践经验。在大观霉素检测方法研究方面，质标所科研团队针对饲料基质复杂、大观霉素极性强不易保留等技术难点，开展了系统的条件优化和方法学验证，建立了灵敏度高、重现性好、适用性广的检测方法，为本标准的制定提供了坚实的实验基础和可靠的技术依据。同时，质标所联合多家兄弟单位开展了实验室间协同验证，确保方法的稳健性和可推广性。4.3标准归口单位全国饲料工业标准化技术委员会（SAC/TC76）受国家标准化管理委员会和农业农村部委托，负责饲料工业领域国家标准和行业标准的归口管理工作。该技术委员会秘书处设在中国饲料工业协会，在标准的立项论证、草案审定、技术审查和报批等环节发挥了重要的组织协调和质量把关作用。5标准实施前景与预期效益