2026年大肠杆菌检测试题及答案

2026年大肠杆菌检测试题及答案一、单项选择题（每题2分，共20分）1.下列关于大肠杆菌生物学特性的描述，错误的是（）A.革兰氏阴性杆菌B.兼性厌氧C.能发酵乳糖产酸产气D.氧化酶试验阳性2.按照GB4789.38-2012《食品安全国家标准食品微生物学检验大肠杆菌计数》，检测固体样品时，前处理需称取（）样品加入无菌稀释液。A.5gB.10gC.25gD.50g3.使用伊红美蓝琼脂（EMB）分离大肠杆菌时，典型菌落的特征是（）A.无色透明，边缘整齐B.黑色带金属光泽，表面湿润C.粉红色，有沉淀环D.紫黑色，有绿色金属光泽4.下列培养基中，属于大肠杆菌选择性增菌培养基的是（）A.营养肉汤B.月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤（LST）C.脑心浸出液肉汤D.沙氏葡萄糖琼脂5.MPN（最可能数）法检测大肠杆菌时，若3个稀释度（10⁻¹、10⁻²、10⁻³）的阳性管数分别为3、2、0，查MPN表对应的结果是（）A.9.5×10¹CFU/gB.2.2×10²CFU/gC.4.6×10²CFU/gD.1.1×10³CFU/g6.大肠杆菌PCR检测的常用靶基因是（）A.16SrRNA基因B.uidA基因（编码β-葡萄糖醛酸酶）C.18SrRNA基因D.肠毒素基因7.检测水样中的大肠杆菌时，若采用滤膜法，滤膜应接种于（）培养基进行培养。A.营养琼脂B.mFC培养基（改良的远藤氏培养基）C.血琼脂D.巧克力琼脂8.关于大肠杆菌检测的质量控制，下列说法错误的是（）A.每批培养基需做无菌试验B.阳性对照菌株可选用ATCC25922C.阴性对照应无任何菌落生长D.样品稀释液可使用生理盐水，无需调节pH9.某乳制品企业检测原料乳的大肠杆菌，若采用平板计数法，培养温度和时间应为（）A.30℃，24hB.35℃，48hC.37℃，24hD.42℃，72h10.下列情况中，可判定样品大肠杆菌“未检出”的是（）A.所有稀释度的乳糖发酵管均未产气B.分离平板未出现典型菌落C.生化试验中靛基质试验（I）阴性D.PCR扩增未出现目标条带二、填空题（每空1分，共20分）1.大肠杆菌属于______科，其典型生化反应为：乳糖发酵______（产酸/不产酸）、靛基质试验______（阳性/阴性）、甲基红试验______（阳性/阴性）、VP试验______（阴性/阳性）、柠檬酸盐利用试验______（阴性/阳性）。2.GB4789.38-2012规定，大肠杆菌计数的方法包括______法和______法；其中______法适用于大肠菌群数量较少的样品。3.乳糖胆盐发酵管中添加胆盐的作用是______，溴甲酚紫作为______指示剂，当发酵产酸时颜色变为______。4.分离大肠杆菌的选择性培养基除伊红美蓝琼脂外，还包括______（列举1种）；该培养基通过添加______（成分）抑制革兰氏阳性菌生长。5.分子生物学检测大肠杆菌时，需提取样品中的______，经______反应扩增靶基因，通过______（技术）判断扩增结果。6.检测过程中，若怀疑培养基被污染，应进行______试验；若阳性对照无反应，可能的原因是______（列举1种）。7.某样品经MPN法检测，接种3个稀释度（10⁻¹、10⁻²、10⁻³）各5管，阳性管数分别为5、3、1，查MPN表（5管法）对应的结果为______MPN/g（参考值：当阳性管数组合为5-3-1时，MPN值为110）。三、判断题（每题2分，共20分。正确填“√”，错误填“×”）1.大肠杆菌是严格需氧菌，因此培养时需严格通入氧气。（）2.所有能发酵乳糖产酸产气的革兰氏阴性杆菌均可判定为大肠杆菌。（）3.检测食品样品时，若样品含防腐剂，需在稀释液中添加中和剂（如卵磷脂、吐温80）。（）4.MPN法的结果表示为“最可能数”，其实质是基于概率统计的估算值。（）5.伊红美蓝琼脂中，伊红和美蓝的作用是抑制革兰氏阳性菌，同时与大肠杆菌代谢产物结合显色。（）6.大肠杆菌检测中，前增菌的目的是恢复受损菌体的活性，提高检出率。（）7.采用qPCR检测大肠杆菌时，Ct值越小，说明样品中目标菌数量越多。（）8.检测水样时，滤膜法的优点是可直接计数，缺点是对浑浊水样需预处理。（）9.若样品的大肠杆菌检测结果为“110MPN/g”，表示每克样品中恰好含有110个大肠杆菌。（）10.实验室废弃物（如阳性菌液）需经121℃高压蒸汽灭菌30分钟后再处理。（）四、简答题（每题8分，共40分）1.简述大肠杆菌作为粪便污染指示菌的主要依据。2.比较MPN法和平板计数法检测大肠杆菌的优缺点。3.列举大肠杆菌生化鉴定的关键试验（至少4项），并说明每项试验的判断标准。4.简述使用显色培养基检测大肠杆菌的原理及操作要点。5.检测过程中若出现假阳性结果，可能的原因有哪些？如何避免？五、综合分析题（每题10分，共20分）1.某食品企业送检一批婴幼儿配方奶粉，要求检测大肠杆菌。实验室按GB4789.38-2012操作，步骤如下：①称取25g样品，加入225mL无菌磷酸盐缓冲液（PBS），均质后制成10⁻¹稀释液；②取10⁻¹、10⁻²、10⁻³稀释液各1mL，分别接种于3管乳糖胆盐发酵管（每管9mL），36℃±1℃培养24h；③观察发酵管产气情况，记录阳性管数为：10⁻¹（3/3管产气）、10⁻²（2/3管产气）、10⁻³（0/3管产气）；④从阳性管中取菌液划线接种伊红美蓝琼脂，36℃±1℃培养24h，观察到紫黑色带金属光泽菌落；⑤挑取典型菌落进行生化试验，结果为：乳糖发酵（+）、靛基质（+）、甲基红（+）、VP（-）、柠檬酸盐（-）。问题：（1）根据MPN表（3管法），计算该样品的大肠杆菌MPN值（参考：阳性管数组合3-2-0对应MPN值为95）；（2）结合生化试验结果，判断是否为大肠杆菌，并说明依据；（3）若该奶粉的大肠杆菌限值为“≤10MPN/g”，判定该样品是否合格。2.某实验室使用PCR法检测水样中的大肠杆菌，实验步骤如下：①取100mL水样，通过0.45μm滤膜过滤，收集滤膜；②将滤膜放入提取管，加入裂解液，离心后取上清作为DNA模板；③配制PCR反应体系（含引物、dNTP、Taq酶、模板DNA）；④进行PCR扩增（95℃预变性5min，95℃变性30s，55℃退火30s，72℃延伸30s，共35个循环，最后72℃延伸10min）；⑤扩增产物经琼脂糖凝胶电泳，紫外灯下观察条带。问题：（1）步骤①中使用滤膜过滤的目的是什么？（2）PCR引物设计需遵循哪些原则（至少3项）？（3）若电泳结果无目标条带，但阳性对照有条带，可能的原因有哪些？（至少3项）答案一、单项选择题1.D2.C3.D4.B5.A6.B7.B8.D9.C10.A二、填空题1.肠杆菌；产酸；阳性；阳性；阴性；阴性2.平板计数；MPN；MPN3.抑制革兰氏阳性菌；pH；黄色4.麦康凯琼脂；胆盐（或结晶紫）5.DNA；PCR；琼脂糖凝胶电泳（或qPCR定量）6.无菌；引物失效（或模板降解、扩增条件错误）7.110三、判断题1.×2.×3.√4.√5.√6.√7.√8.√9.×10.√四、简答题1.主要依据：①大肠杆菌在人及温血动物粪便中大量存在，数量远多于致病菌；②在外界环境中存活时间与肠道致病菌相近；③检测方法成熟，易于操作；④对消毒剂的抗性与致病菌相似，可反映消毒效果。2.MPN法优点：适用于菌量少、杂菌多的样品；无需严格分离纯化；结果通过概率统计计算。缺点：操作繁琐，耗时长；结果为估算值，精度较低。平板计数法优点：直接计数，结果直观；可观察菌落形态；适合菌量较高的样品。缺点：对受损菌或形态不典型菌株易漏检；需严格控制培养基和培养条件。3.关键试验及判断标准：①乳糖发酵试验：产酸产气（+）；②靛基质（吲哚）试验：加入柯氏试剂后上层呈红色（+）；③甲基红（MR）试验：培养基呈红色（+）；④VP试验：加入甲、乙试剂后呈红色（+），大肠杆菌为阴性；⑤柠檬酸盐利用试验：培养基变蓝（+），大肠杆菌为阴性。4.原理：显色培养基含特异性显色底物（如5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-葡萄糖醛酸苷，X-Gluc），大肠杆菌产生的β-葡萄糖醛酸酶可分解底物，提供有色产物，使菌落呈现特定颜色（如蓝色或紫色）。操作要点：①培养基需现配现用，避免显色底物分解；②接种量适宜，避免菌落重叠；③培养温度和时间严格控制（通常36℃±1℃，24h）；④需同时做阳性和阴性对照。5.假阳性原因：①培养基污染（如杂菌生长）；②样品中存在其他能发酵乳糖的革兰氏阴性菌（如克雷伯菌）；③生化试验操作错误（如试剂失效、培养时间不足）；④PCR检测中引物非特异性扩增。避免措施：①严格无菌操作，培养基做无菌试验；②分离后进行完整生化鉴定（如IMViC试验）；③定期校准仪器，使用标准菌株作为对照；④优化PCR引物设计，增加熔解曲线分析（qPCR）。五、综合分析题1.（1）MPN值=95MPN/g（因样品稀释度为10⁻¹、10⁻²、10⁻³，对应MPN表3-2-0组合值为95）；（2）是大肠杆菌。依据：生化试验符合大肠杆菌典型特征（乳糖发酵+、靛基质+、甲基红+、VP-、柠檬酸盐-）；（3）不合格（95MPN/g>10MPN/g）。2.（1）浓缩水样中的大肠杆菌，提高检测灵敏度；（2）引物原则