NYT 765-2025 高致病性禽流感 样品采集、保存及运输技术规范标准立项发展报告

高致病性禽流感样品采集、保存及运输技术规范StandardizationDevelopmentReport:TechnicalSpecificationforCollection,PreservationandTransportationofHighlyPathogenicAvianInfluenzaSamples摘要高致病性禽流感（HighlyPathogenicAvianInfluenza,HPAI）是由正黏病毒科A型流感病毒引起的一种烈性禽类传染病，被世界动物卫生组织（WOAH）列为须通报动物疫病，我国将其列为一类动物疫病。样品采集、保存及运输作为疫病监测、诊断和防控的首要环节，其规范化程度直接影响检测结果的准确性和疫情防控的时效性。随着我国禽类养殖规模化、集约化程度不断提高，以及禽流感病毒变异株不断出现，对样品全流程管理的技术要求日益严格。在此背景下，农业农村部于2025年1月9日发布NY/T765-2025《高致病性禽流感样品采集、保存及运输技术规范》，并于2025年5月1日正式实施。本报告对该标准的立项背景、编制依据、主要技术内容及其创新点进行系统阐述，分析其对我国禽流感防控工作的重要支撑作用，并对标准的推广应用前景进行展望。该标准的实施将对规范禽流感样品管理流程、提升病原学检测准确性、保障生物安全具有重要的指导意义。关键词：高致病性禽流感；样品采集；样品保存；样品运输；技术规范；动物疫病防控；生物安全；行业标准Keywords:HighlyPathogenicAvianInfluenza;SampleCollection;SamplePreservation;SampleTransportation;TechnicalSpecification;AnimalDiseasePreventionandControl;Biosafety;IndustrialStandard一、引言1.1标准立项背景高致病性禽流感（HPAI）严重危害家禽养殖业健康发展，并对公共卫生安全构成潜在威胁。自2003年以来，H5N1亚型高致病性禽流感病毒在全球范围内广泛传播，我国也多次暴发大规模疫情，造成重大经济损失。近年来，H5N6、H5N8及H7N9等亚型病毒不断出现和重组变异，疫情形势日趋复杂。据农业农村部通报数据，2020至2024年间，我国仍有多省份报告高致病性禽流感疫情，疫病防控压力持续存在。在禽流感防控工作中，实验室检测是疫情确诊、病毒监测和防控效果评估的核心技术手段，而检测结果的准确性与样品的采集质量、保存条件和运输环节密切相关。不规范的操作可能导致样品降解、污染或病原灭活，进而造成假阴性结果，延误疫情处置时机。2004年颁布的NY/T765-2004《高致病性禽流感样品采集、保存及运输技术规范》在近二十年的防控工作中发挥了重要作用，但已难以适应当前疫病防控形势和技术发展的需要。1.2标准修订的必要性第一，病原变异对检测技术提出新要求。近年来，高致病性禽流感病毒变异加快，不同亚型、不同谱系病毒并存，对样品采集的类型、部位和检测方法的适用性提出了更高要求。同时，分子生物学检测技术（如实时荧光RT-PCR、基因测序等）的广泛应用，对样品采集和保存方式提出了新的技术要求。第二，生物安全法规体系日趋完善。2021年修订实施的《中华人民共和国动物防疫法》明确强化了生物安全管理要求，2021年国务院发布《生物安全法》实施，对动物病原微生物的采集、保存和运输提出了更为严格的规范。2004年版标准在生物安全方面的要求已明显滞后于现行法规的要求。第三，行业管理和追溯体系发展需求。当前动物疫病防控信息化、可追溯管理已成为行业发展方向，样品编号、信息记录和追溯体系等需要在标准中予以规范。第四，标准有效期到期。根据《标准化法》相关规定，行业标准一般不超过五年需进行复审修订，NY/T765-2004已严重超期，亟需全面修订。1.3编制过程概况本标准的修订工作由全国动物防疫标准化技术委员会归口管理，主要起草单位包括中国动物卫生与流行病学中心、中国动物疫病预防控制中心等单位。编制工作自2023年启动，历经预研论证、立项评审、草案起草、征求意见、专家审定等阶段，于2024年底完成报批稿，经农业农村部批准于2025年1月9日正式发布。二、编制依据与原则2.1法律法规依据本标准编制严格遵循以下法律法规和规范性文件要求：-《中华人民共和国动物防疫法》（2021年修订）-《中华人民共和国生物安全法》（2021年施行）-《重大动物疫情应急条例》（国务院令第450号）-《病原微生物实验室生物安全管理条例》（国务院令第424号）-《高致病性动物病原微生物菌（毒）种或者样本运输包装规范》（农业部公告第503号）-《动物检疫管理办法》（农业农村部令2022年第3号）2.2主要参考标准本标准在修订过程中充分参考了国内外相关标准和文献，包括但不限于：-GB19489-2008《实验室生物安全通用要求》-GB/T19495-2004《转基因产品检测核酸定性PCR检测方法》（相关样品处理要求）-GB/T6682-2008《分析实验室用水规格和试验方法》（涉及保存液配制用水要求）-NY/T541-2016《动物疫病实验室检验样品采集、保存和运输技术规范》-GB/T38597-2020《生物样品采集、保存和运输通用要求》-《世界动物卫生组织（WOAH）陆生动物诊断试验与疫苗手册》（第29版，2021年）-WHO手册《禽流感病毒标本采集、保存和运输指南》-国际航空运输协会（IATA）《危险品规则》（DGR）中关于感染性物质运输的相关要求2.3修订原则本标准修订过程中坚持以下主要原则：（一）科学性原则。以禽流感病毒生物学特性和流行病学规律为基础，结合实验室检测技术发展和实际工作需要，确保各项技术指标的先进性和科学性。（二）实用性原则。充分考虑基层防疫人员和实验室检测人员的实际操作条件和技术水平，规定的操作方法和流程应简便易行，具有较强的可操作性。（三）协调性原则。与现行法律法规、上级标准及相关标准保持协调一致，确保标准体系的统一性和完整性，避免技术指标和要求的冲突。（四）安全性原则。强化生物安全要求，确保样品采集、保存和运输各环节的人员安全、环境安全和病原体可控。三、标准主要技术内容本章节重点介绍本次修订中调整和新增的核心技术内容。3.1样品采集技术规范3.1.1采样人员要求3.1.2采样时机与对象对不同类型样品采集的时机和对象进行了科学界定。活禽样品的采集应选择在发病急性期进行，此时病毒滴度较高，有利于病原检测。病死禽样品的采集应在死亡后6小时内尽早完成，超过24小时的尸体组织通常已自溶腐败，病毒核酸降解严重，不建议作为检测样品。靶动物样品的选择包括：-喉头/泄殖腔拭子：适用于活禽感染状态监测。-气管/肺脏组织：适用于死亡禽只的病原学诊断。-血清样品：适用于血清学监测和免疫效果评价（仅用于抗体检测，不用于病原分离）。-环境样品：包括粪便、饲料、饮水、笼具表面拭子等，适用于养殖环境病原污染监测。值得注意的是，修订后的标准对不同亚型病毒的采样策略进行了区分和明确。对于H5亚型病毒感染，由于病毒对呼吸系统的嗜性增强，上呼吸道拭子的检出率显著高于泄殖腔拭子，因此标准强化了咽喉部采样在H5亚型监测中的权重和优先性；而对于H7亚型病毒，消化道排毒在早期感染中更为突出，泄殖腔拭子的诊断价值更为显著。标准针对不同亚型的生物学特性，对各采样部位的优先级和组合策略作出了更为科学的差异化规定。3.1.3采样方法与技术要求针对不同类型的样品，标准详细规定了具体的采样操作方法、采样量、采样部位和无菌操作要求。例如，喉头拭子的采集应使用无菌棉拭子深入喉头部位旋转擦拭后放入含病毒保存液的采样管中；组织样品的采集应在无菌条件下切取病变与正常组织交界处组织块等。主要技术进展：与旧版标准相比，修订版在采样技术方法上有以下显著调整和更新：（1）采样拭子材质要求的升级。明确了合成纤维拭子（如聚酯、人造丝等）应优先于棉拭子使用，因为棉花纤维中的脂肪酸成分可能对病毒产生灭活作用，且棉纤维对病毒粒子的吸附性较强、洗脱率低，可能影响后续检测灵敏度；（2）病毒保存液配方的优化。推荐使用含蛋白稳定剂（如牛血清白蛋白或明胶）和抗生素的Hank‘s平衡盐溶液或磷酸盐缓冲液作为病毒保存液，同时对抗生素的具体配方和浓度进行了明确规定，以有效抑制细菌和真菌生长，防止样品腐败变质；（3）不同样品类型采样量的精准化。针对不同检测目的（病毒分离、抗原检测、分子生物学检测）分别规定了适宜的样品量范围，对于荧光定量RT-PCR等分子检测方法，要求每管拭子样品保存液量不低于1mL，组织样品每份不少于0.5g，血清样品不少于0.5mL，以满足检测方法对样品量的最低需求。（4）新增基因测序样品的采集要求。针对目前病毒变异监测和溯源调查的需求，标准新增了对基因测序样品的采集要求，要求采样时应使用无核酸酶的采样管和保存液，避免外源核酸污染，确保样品适用于高通量测序分析。3.2样品保存技术规范3.2.1保存温度与时限根据样品类型和预期保存时间，标准规定了分级保存条件：|样品类型|短期保存（≤48h）|中期保存（3-7天）|长期保存（＞7天）||---------|-----------------|-----------------|-----------------||拭子样品|2-8℃冷藏|-20℃冷冻|-70℃以下（或液氮）||组织样品|2-8℃冷藏|-20℃冷冻|-70℃以下（或液氮）||血清样品|2-8℃冷藏|-20℃冷冻|-20℃以下（避免反复冻融）||环境样品|2-8℃冷藏|-20℃冷冻|-70℃以下|标准特别强调，用于病毒分离的样品严禁反复冻融，冻融次数不应超过两次。对于疑似含有高致病性禽流感病毒的组织样品，应在采集后30分钟内放入预冷的保存液或转运培养基中，并尽快降温至规定温度。3.2.2保存液与保存管要求规定了病毒保存液和样品保存管的统一要求。病毒保存液应具有维持病毒活性、抑制细菌和真菌生长、防止样品降解的功能。常用保存液包括Hank‘s平衡盐溶液、磷酸盐缓冲液等，使用前应经过灭菌处理并添加适量抗生素（青霉素、链霉素、两性霉素B等）。保存管应选用无菌、密封性能良好、耐低温的专用采样管（如冻存管），管壁应标注清晰耐久的标识信息。3.3样品包装与运输技术规范3.3.1包装要求标准对高致病性禽流感样品的运输包装进行了严格规定，采用UN3373生物物质B类或UN2814感染性物质A类三层包装系统（主容器、次级容器、外层包装）：-主容器：密封防漏的样品管或样品袋，容积不超过1L（液体）或不超过外包装容积的十分之一。-次级容器：坚固、防漏的第二层容器，内装足量吸附材料，确保意外泄漏时液体被完全吸附。-外层包装：具有足够强度的外层包装，尺寸不小于100mm×100mm，表面标注生物危害标识、样品信息和应急联系方式。3.3.2运输条件与管理要求明确规定了不同运输方式的温度控制要求和管理规定。航空运输须遵守IATA《危险品规则》中关于感染性物质的运输规定，公路运输应配备相应的温控设备。样品运输时应随附详细的样品清单、送检单和生物安全说明，运输人员应经过生物安全培训。标准还要求运输过程应建立全程温度监控记录，确保样品在规定的温度范围内运输。3.4样品信息记录与追溯修订后的标准新增了样品信息记录与追溯管理的相关内容。要求建立完整的样品信息记录系统，包括：样品编号（采用全国统一的编码规则）、采样信息（采样地点、时间、动物种类、日龄、品种）、养殖场信息（场名、地址、联系人）、临床信息（症状、发病数、死亡数、免疫史）以及样品流转的全过程记录。该条款旨在配合国家动物疫病追溯体系建设，实现样品从采集到检测结果报告的全链条可追溯。这一新增要求对于提升疫情处置效率、实现精准防控具有重要的技术支撑作用。3.5生物安全要求标准全面强化了各环节的生物安全管控要求，明确了样品采集过程中的个人防护装备（PPE）规范、操作场所的消毒要求以及样品保存和运输环节的安全管理措施。其中，新增强调了样品采集过程中个人防护装备（PPE）的穿戴规范，要求采样人员应配备N95或以上级别防护口罩、一次性防护服、双层手套、防护眼罩/面罩和鞋套，并按照标准程序进行穿戴和脱卸。同时要求参与样品处理和运输操作的人员应接受生物安全专项培训，具备相应的生物安全意识和应急处置能力。四、主要起草单位简介本标准的主要起草单位为中国动物卫生与流行病学中心（以下简称“中心”）。中国动物卫生与流行病学中心是农业农村部直属的事业单位，挂中国动物卫生与流行病学中心、国家动物流行病学研究中心、国家动物卫生信息中心、国家动物卫生标准中心、国家动物生物安全三级实验室和世界动物卫生组织（WOAH）中国代表处等机构牌子，承担着全国重大动物疫病的监测、诊断、流行病学调查和研究工作，是我国动物疫病防控技术支撑体系的核心力量。中心设有国家禽流感参考实验室，该实验室是WOAH认可的禽流感参考实验室，同时也是联合国粮农组织（FAO）禽流感参考中心。实验室拥有国家动物生物安全三级（BSL-3）实验室，具备从事高致病性禽流感病毒分离鉴定、基因分析、抗原性研究和疫苗免疫效果评价的能力。实验室长期承担全国禽流感疫情诊断和监测任务，积累了丰富的样品采集、处理和检测经验，为本标准的修订提供了扎实的技术支撑。中心还是全国动物防疫标准化技术委员会秘书处挂靠单位，牵头组织制修订了大量动物防疫领域的国家标准和行业标准。在禽流感防控领域，中心先后主持完成了多项国家和行业标准的制修订工作，包括禽流感诊断技术、禽流感疫情监测技术规范、禽流感灭活疫苗生产与检验技术等配套标准，形成了较为完善的禽流感防控标准体系。在本标准的修订过程中，中心组建了由病毒学、流行病学、实验室检测和标准化管理等领域专家组成的编制组，系统梳理了我国禽流感防控工作对样品管理的技术需求，广泛征求了各级动物疫病预防控制机构、科研院所和高校专家的意见，确保了标准的技术先进性和行业适用性。五、标准实施意义与应用展望5.1标准实施的现实意义NY/T765-2025的发布实施具有重要的现实意义。在技术层面，该标准为高致病性禽流感样品全流程管理提供了科学规范的技术依据。通过对采样时机、采样方法、保存条件和运输要求的精细化规定，有效减少因样品质量问题导致的假阴性或检测失败，提升疫情确诊的准确性和时效性。在管理层面，标准新增的样品信息记录和追溯管理要求与我国正在推进的动物疫病追溯体系建设相衔接，有助于实现疫情监测数据的规范化采集和高效利用，提升重大动物疫病防控的精准化管理水平。在生物安全层面，标准强化了各环节的生物安全管控措施，从源头降低病原体泄漏和扩散的风险，对保障养殖业生产安全、公共卫生安全和从业人员健康安全具有重要意义。5.2应用