NYT 4630-2025 牛乳及其制品中α-乳白蛋白和β-乳球蛋白的测定 高效液相色谱法标准立项发展报告

牛乳及其制品中α-乳白蛋白和β-乳球蛋白的测定高效液相色谱法标准立项发展报告StandardizationDevelopmentReport:Determinationofα-Lactalbuminandβ-LactoglobulininMilkandDairyProductsbyHighPerformanceLiquidChromatography摘要关键词：牛乳制品；α-乳白蛋白；β-乳球蛋白；高效液相色谱法；农业行业标准；质量检测Keywords:DairyProducts;α-Lactalbumin;β-Lactoglobulin;HighPerformanceLiquidChromatography(HPLC);AgriculturalIndustryStandard;QualityDetection一、引言1.1研究背景乳及乳制品作为居民膳食结构中优质蛋白质的重要来源，其营养价值与品质安全日益受到社会各界的广泛关注。蛋白质是乳制品的核心营养成分，其中酪蛋白和乳清蛋白是两大主要蛋白质组分。乳清蛋白主要包括α-乳白蛋白（α-Lactalbumin，α-La）和β-乳球蛋白（β-Lactoglobulin，β-Lg），两者在乳清蛋白中的占比合计可达70%~80%。α-乳白蛋白是乳糖合成的重要调节蛋白，富含必需氨基酸和色氨酸，具有促进矿物质吸收和免疫调节等生物学功能；β-乳球蛋白作为牛乳中最主要的热敏性蛋白之一，其含量变化与乳制品的加工工艺和热处理强度密切相关，同时也是乳制品加工中衡量蛋白变性程度的重要指示指标。因此，对牛乳及其制品中α-乳白蛋白和β-乳球蛋白进行准确测定，不仅可有效评价乳制品的营养品质，还可用于鉴别乳品掺假、判断热处理强度、指导加工工艺优化，对乳制品行业的质量控制具有重要意义。然而，长期以来我国在牛乳及其制品中α-乳白蛋白和β-乳球蛋白检测方面尚无统一的农业行业标准，各检测机构和企业所采用的检测方法存在差异，导致检测结果可比性不足，制约了乳品质量安全监管和标准化工作的深入开展。为此，亟需制定统一、科学、可操作的检测方法标准。1.2标准基本信息本标准编号为NY/T4630-2025，标准名称为《牛乳及其制品中α-乳白蛋白和β-乳球蛋白的测定高效液相色谱法》，由中华人民共和国农业农村部发布，属于农业行业推荐性标准，分类号为奶和奶制品。标准于2025年1月9日发布，2025年5月1日正式实施，目前为现行有效状态。二、标准立项的必要性与紧迫性2.1行业需求驱动我国是全球乳制品生产和消费大国。国家统计局数据显示，近年来我国牛奶产量持续稳定增长，2024年全国牛奶产量已超过4000万吨。与此同时，婴幼儿配方奶粉、功能性乳粉、蛋白强化乳制品等高端乳制品市场规模快速扩大，这些产品的品质核心指标之一即为活性乳清蛋白含量。而α-乳白蛋白和β-乳球蛋白作为衡量乳清蛋白活性与完整性的关键标志物，其检测需求呈爆发式增长态势。在行业实践中，乳制品生产企业普遍采用酶联免疫法、聚丙烯酰胺凝胶电泳法等进行乳清蛋白测定，但上述方法存在操作繁琐、重复性差等不足。随着高效液相色谱（HPLC）技术在我国检测机构中的广泛普及，基于HPLC的定量检测方法因其分离效率高、检测灵敏度好、自动化程度高的优势，已在多家企业实验室和第三方检测机构中实际应用。但由于缺乏统一的行业标准，不同实验室在色谱条件设定、样品前处理流程、定量方式选择等方面差异较大，导致检测结果缺乏可比性和互认性。2.2政策法规支撑2.3标准缺失的突出问题在NY/T4630-2025发布实施之前，我国涉及乳清蛋白检测的标准分散在多个领域。部分国家标准如GB5009系列主要针对乳制品中的常规成分进行检测，对于α-乳白蛋白和β-乳球蛋白的专门检测方法则缺乏系统性规定。已发布的部分团体标准通常基于某一类特定产品起草，适用范围有限；另有部分行业标准涉及乳清蛋白检测但年代较早，技术手段已落后于当前仪器发展水平。这种标准体系不完善、方法不统一的局面，严重影响了乳品质量监管的权威性和检测资源的有效利用。三、标准主要技术内容与编制原则3.1技术方法概述本标准采用高效液相色谱法（HighPerformanceLiquidChromatography，HPLC）作为核心检测技术。在技术路线设计上，本标准主要涵盖以下内容框架：（1）原理：试样中的α-乳白蛋白和β-乳球蛋白经适当的前处理后，采用高效液相色谱系统在特定的色谱柱上进行分离，通过紫外检测器（或二极管阵列检测器）在特定波长下进行定量检测，以外标法或内标法进行定量分析。（2）试剂与材料：规定了试验用水（应符合GB/T6682中一级水的要求）、标准品（α-乳白蛋白和β-乳球蛋白标准品，纯度应不低于98%）、流动相配制所用试剂（包括乙�itrile、三氟乙酸等色谱纯试剂）、样品提取和沉淀试剂等。（3）仪器与设备：规定了高效液相色谱仪（配紫外检测器或二极管阵列检测器）、分析天平（感量0.01mg）、pH计、离心机（转速不低于10000r/min）、涡旋混合器、微孔滤膜（0.45μm）等设备的技术参数要求。（4）样品前处理：根据样品基质的差异，分别针对液态乳、乳粉、婴幼儿配方乳粉、发酵乳等不同制品类型规定了相应的前处理流程，包括脱脂、蛋白沉淀、离心、过滤等关键步骤。（5）色谱条件：规定了推荐的色谱柱类型（如C18反相色谱柱，250mm×4.6mm，粒径5μm）、流动相体系（含三氟乙酸的水-乙腈梯度洗脱体系）、柱温（30℃~40℃）、流速（0.8mL/min~1.0mL/min）、检测波长（280nm）和进样量（10μL~20μL）等关键色谱参数。（6）结果计算与表述：规定了基于标准曲线回归方程进行定量计算的方法，以及结果的有效数字保留和单位表述规则。（7）精密度与回收率：规定了在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的15%，以及方法回收率应处于90%~110%区间的技术要求。3.2编制原则本标准的编制严格遵循以下原则：科学性原则：充分参考了国内外相关标准和技术文献，基于多实验室协同验证的实验数据确定技术参数，确保方法的科学性、准确性和可靠性。适用性原则：在保证方法灵敏度和精密度满足检测需求的前提下，兼顾了不同类型乳制品基质的差异性，合理设计了样品前处理方案，确保标准的实用性和可操作性。协调性原则：在标准编制过程中，充分考虑了与现有食品安全国家标准、行业标准及团体标准的衔接与协调，避免技术指标和检测要求之间的交叉与矛盾。开放性原则：在色谱柱、流动相体系等技术参数设置上，采用了性能导向的表述方式，允许检测实验室在满足分离度和灵敏度要求的前提下，根据自身仪器条件进行适当调整，体现了标准的开放性和包容性。四、标准主要内容阐述4.1适用范围本标准适用于牛乳（包括生乳、巴氏杀菌乳、超高温灭菌乳等液态乳）及其制品（包括乳粉、婴幼儿配方乳粉、发酵乳、调制乳等）中α-乳白蛋白和β-乳球蛋白含量的测定。对于其他哺乳动物乳及其制品，在适用性验证的基础上也可参照执行。4.2方法原理详解α-乳白蛋白和β-乳球蛋白为乳清中的主要蛋白质组分。当乳制品经过脱脂处理后，采用酸性沉淀法或酶凝法将酪蛋白从体系中沉降分离，所得上清液即为乳清部分。含有目标蛋白的乳清溶液在经微孔滤膜过滤后直接进入高效液相色谱系统进行分析。由于α-乳白蛋白和β-乳球蛋白的相对分子质量和等电点不同，在C18反相色谱柱上具有不同的疏水相互作用力，在梯度洗脱条件下可实现各组分的有效分离。蛋白质分子中的芳香族氨基酸（主要为色氨酸和酪氨酸）在280nm波长附近具有特征吸收，因此可采用紫外检测器进行定量检测。4.3质量控制在标准中的重要地位为保证检测结果的准确性和稳定性，本标准在质量控制方面提出了定量要求。标准中明确要求使用空白实验以确认试剂和环境的洁净度；要求标准工作溶液的配制需使用与待测样品基质相近的基底溶液以减少基质效应；同时建议实验室定期参加能力验证活动，以评价和持续监控实验室的检测能力。此外，标准中还对色谱柱的使用维护和系统适用性试验提出了建议性要求，确保色谱分离效果始终处于受控状态。五、主要起草单位介绍本标准的主要起草单位为中国农业科学院北京畜牧兽医研究所（以下简称“北京畜牧兽医研究所”），并联合多家省级农科院质标所、乳品企业研发中心和第三方检测机构共同编制完成。中国农业科学院北京畜牧兽医研究所成立于1957年，是国家级畜牧兽医综合研究机构，长期致力于动物营养与饲料科学、动物遗传育种与繁殖、畜产品质量安全与加工技术等领域的应用基础研究和关键技术攻关。研究所建有农业农村部农产品质量安全风险评估实验室（北京）、农业农村部奶及奶制品质量安全控制重点实验室等国家级和省部级科研平台，拥有一支以中国工程院院士领衔的高水平科研团队。在乳品质量安全与检测技术研究方面，北京畜牧兽医研究所先后主持完成多项国家科技支撑计划课题、国家重点研发计划项目、国家自然科学基金项目和农业行业标准制修订项目等，在乳品蛋白质检测技术、掺假鉴别技术和功能性乳制品评价等领域积累了丰富的研究经验和大量的基础数据。研究所在乳清蛋白分离纯化、液相色谱检测方法开发和标准化研究方面具有国内领先的技术储备和条件基础，先后参与制修订多项乳品相关的国家标准和农业行业标准，为本标准的顺利制定提供了坚实的技术保障和编制力量。六、标准实施的意义与影响6.1填补标准空白，完善标准体系NY/T4630-2025的发布实施填补了我国农业行业在牛乳及其制品中α-乳白蛋白和β-乳球蛋白检测方法标准化方面的空白，使乳品中关键乳清蛋白组分的检测有标可依、有据可查。该标准与现有乳品质量安全检测标准互为补充，共同构成更为完善的乳品质量检测方法标准体系。6.2支撑质量监管，保障消费安全标准的实施为各级农产品质量安全检测机构、市场监管部门和第三方检测机构提供了统一、可靠的检测技术依据。通过对α-乳白蛋白和β-乳球蛋白含量的准确测定，可有效鉴别掺假乳粉（如以廉价蛋白替代乳清蛋白）、判断乳制品是否经过过度热处理、评价功能性乳制品的活性蛋白含量是否达到宣称水平，进而为乳品质量安全监管提供有力的技术支撑。6.3促进企业技术进步，推动产业升级标准的实施将引导乳制品生产企业规范蛋白质检测流程和方法，推动企业在乳清蛋白检测技术和质量控制水平上的整体提升。同时，随着消费者对乳品营养品质关注度的不断提高，以α-乳白蛋白和β-乳球蛋白含量为核心指标的功能性乳制品评价体系逐步形成，将进一步激励企业加大在功能性乳制品研发和生产工艺优化方面的投入，推动乳制品产业从“规模扩张”向“质量提升”转型。七、结论与展望7.1结论7.2展望展望未来，乳清蛋白检测技术的标准化工作可在以下方面持续深化：第一，技术方法的迭代升级。随着超高效液相色谱（UHPLC）、液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS）等高新检测技术的不断成熟和普及，未来可适时开展相关检测方法的修订与升级，进一步提高方法的灵敏度、选择性和检测通量。第二，检测范围的持续拓宽。针对羊乳、驼乳等特色乳制品以及植物基仿乳产品中乳清蛋白检测的需求逐步增加，可适时研究制定适用于更多乳源类型的检测标准，扩大标准的适用范围。第三，标准的国际对标与互认。国际乳品联合会（IDF）和国际标准化组织（ISO）在乳制品检测方法标准化方面已有较为成熟的标准体系，未来应加强与国际标准的对接与互认，提升我国乳品检测标准的国际化水平，为乳制品国际贸易提供便利。第四，标准与产业发展的深度融合。围绕功能性乳制品品质评价、乳品真实性鉴别、加工过程质量控制等产业需求，进一步完善以蛋白质组学为核心的检测方法标准群，推动乳品质量检测从“被动合规”向“主动赋能”转变。总之，NY/T4630-2025标准的发布实施是开端而非终点。随着乳制品行业的持续发展和技术水平的不断提升，乳清蛋白检测方法标准化工作必将不断完善，为我国乳制品质量安全保驾护航，助力奶业全面振兴。参考文献[1]全国人民代表大会常务委员会.中华人民共和国农产品质量安全法[Z].2022年修订.[2]全国人民代表大会常务委员会.中华人民共和国食品安全法[Z].2021年修正.[3]中共中央,国务院.国家标准化发展纲要[Z].