CN119390757A 一种小囊菌属真菌、抗炎与抗骨质疏松化合物及其制备方法与应用 （中国医学科学院医药生物技术研究所）

CGMCCNo.408832023.09.21所croci)中获得2个新结构环酯肽化合物小囊菌素小囊菌素B为微生物发酵得到的天然产物，原料易得，小囊菌素A和/或小囊菌素B及药物组合物可用于炎症和/或骨质疏松症的预防和治疗。小囊菌素A和/或小囊菌素B也可与已知药物组成复方制剂用于炎症和/或骨质疏松症的预防和治21R5选自61藏管理委员会普通微生物中心的登记入册编号为CGMCCNo.5.权利要求1_3中任一项所述的环酯肽化合物或其药学上可接受的盐、酯或溶剂化物3所述产品具有下述至少一方面功效：1)预防和/或治疗炎症；2)预防和064，其在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的登记入册编号为CGMCC4丢失、骨组织微结构损坏、骨脆性增加、骨密度下降，患者易发生骨折[KaninJ.A.,et质疏松症、以及特发性骨质疏松症。原发性骨质疏松症包括绝经后骨质疏松症折等。骨质疏松症多见于绝经后女性和老年男性[KennyA.,etal.ClinCornestone,es.Clin.Endocrinol.Metab.2022,36,101611]。衰老细胞通过分泌衰老相关分泌表型[0003]目前治疗骨质疏松的方法主要是通过补钙或双膦酸盐药物治疗，但会伴有吸收556[0012]更进一步地，所述环酯肽化合物具体可为小囊菌素A(microascusinA)或小囊菌素B(microascusinB)。所述小囊菌素A和小囊菌素B均来自于橘黄小囊菌(Microascus6[0017]本发明的环酯肽化合物可以以衍生自无机酸或有机酸的药学可接受的盐或溶剂的盐、酯或溶剂化物在制备预防和/或治疗炎症和/或骨质疏松症和/或骨代谢相关疾病的7[0029]本发明所提供的小囊菌素A的制备方法，包括下述步骤：用培养基培养橘黄小囊[0031]本发明所提供的小囊菌素B的制备方法，包括下述步骤：用培养基培养橘黄小囊[0032]上述小囊菌素A的制备方法和小囊菌素B的制备方法中，所述橘黄小囊菌为物中心的登记入册编号为CGMCCNo.408[0038]上述小囊菌素A和/或小囊菌素B的制备方法可为固体发酵制备小囊菌素A和/或小[0040]上述固体发酵产物制备小囊菌素A和/或小囊菌素B中，从所述发酵产物中分离得[0041]上述小囊菌素A和/或小囊菌素B的制备方法可为液体发酵制备小囊菌素A和/或小[0043]上述液体发酵产物制备小囊菌素A和/或小囊菌素B中，从所述发酵产物中分离得[0044]上述液体或固体发酵制备小囊菌素A和/或小囊菌素B中，步骤(1)和步骤(a)的溶[0045]上述液体或固体发酵制备小囊菌素A和/或小囊菌素B中，步骤(2)和步骤(b)的溶9[0046]上述液体或固体发酵制备小囊菌素A和/或小囊菌素B中，所述硅胶柱色谱分离中[0047]上述液体或固体发酵制备小囊菌素A和/或小囊菌素B中，所述凝胶柱层析分离中[0048]上述液体或固体发酵制备小囊菌素A和/或小囊菌素B中，所述HPLC制备分离中所种保藏管理委员会普通微生物中心的登记入册编号为CGMCCNo[0053]所述用于制备抗炎和/或抗骨质疏松药物的菌剂含有本发明第六方面所述橘黄小[0054]上述菌剂的活性成分可为所述橘黄小囊菌或/和所述橘黄小囊菌的代谢物，上述术人员可根据菌剂的抗炎和/或抗骨质疏松[0056]第八方面，本发明提供了一种预防和/或治疗炎症和/或骨质疏松症和/或骨代谢[0057]本发明所提供的预防和/或治疗炎症和/或骨质疏松症和/或骨代谢相关疾病的方[0064]本发明中式I所示化合物小囊菌素A和式聂所示化合物小囊菌素B分别在0.1nM和0.1μM浓度下即可抑制核因子受体激活因子_κB配体(receptoractivatorfornuclearfactor_κBligand，RANKL)诱导的破骨细胞分化，分别在10nM和10μM浓度下显著抑制F_[0065]本发明中式I所示化合物小囊菌素A和式聂所示化合物小囊菌素B可用于炎症和/此可以作为抗炎和/或抗骨质疏松药物的先导化合物进行结构优化以开发活性更好的抗炎和/或小囊菌素B及药物组合物可用于炎症和/或骨质疏松症的临床治疗。小囊菌素A和/或小囊菌素B也可与已知药物组成复方制剂用于炎症和/或骨质[0074]图7为化合物式I所示化合物抑制THP细胞粘附作用结果(图7中A)以及式I所示化[0076]图9为式I和式II化合物对RANKL诱导的破骨细胞形成的抑制作用；图9中A为化合[0083]橘黄小囊菌菌株IMB19_064(CGM[0088]2.2序列测定及分析：根据ITS区域DNA序列在微生物种属中的保守性，对真菌株IMB18_064与菌株Microascuscroci(GenBankAccessionNo.MH856123)的ITS序列相似[0090]cactgacagggccagcgagtacctcctt[0091]tgtcgtgctggggatagagcattgcaattat[0092]gcaagtcatcagcttgcgttgattacgtccc[0093]taccgattgaatggctcagtgaggcct[0094]tcagggccggaaagctgtccaaactcgg[0095]ctccgtaggtgaaccagcggagggatca[0096]acactaccccattgccgcgcgttgc[0097]gcgctccccaccccgggcccccgcc[0098]tacgttctgattaatcttgaaaaaaaca[0099]ctggcatcgatgaagaacgcagcgaaa[0100]aatcatcgaatctttgaacgcacattg[0101]gagcgtcatttcttccctcgagcgcggt[0102]tggggatctgcgggcgtagaagcccgca[0103]cgccccctgcgtagtagtaaagcacct[0104]cctattacttttgatggtttgacctcg[0106]根据菌株IMB19_064的形态特征和ITS基因序列，确定菌株IMB19_064为橘黄小囊℃恒温培养箱培养5_7天，用无菌竹签划取约3cm2的含菌琼脂块接种于100mL液体PDB发酵得到PDB液体培养基]，在500mL三角瓶中，28℃,200r/min，摇瓶培养3天得基中，37℃恒温震荡培养12h。取5mL上述大肠杆菌的种子液液接种于100mLLB中，37℃,[0119]按10％接种比例将步骤1.2中大肠杆菌ATCC25[0121]本发明从海绵来源的真菌橘黄小囊菌(Microascuscroci)中获得2个新结构环酯析，流动相为二氯甲烷-甲醇(1:1，v/v)溶液。凝胶柱层析中所用的分离介质是Sephadex时间为30.3min的洗脱峰，得到式I所示的化合物(从共培养固体发酵产物中分离得到53.0mg，从纯培养固体发酵产物中分离得到7.0mg，从纯培养液体发酵产物中分离得到端显示出1个单电荷[M+H]+准分子离子峰峰m/z817.5188(C41H69N8O9理论值为817.5188)以及1个[M+Na]+加合离子峰m/z839.5047(C41H68N8O9Na理论值为839.5007)(图1)，推测其分[0129]式I所示化合物的1HNMR谱(CDCl3，0℃,图2)显示出分辨较好的信号，13CNMR谱(CDCl3括在低场区δH6.52～8.61区间显示出3组共9个活泼氢信号，在δH3.29～基亮氨酸残基(MeLeu7)和1个哌啶酸残基(Pip8)。除了以上结构片断之外，式I所示化合物2CH2的两对亚甲基质子分别与氰基[0136]式I所示化合物中氨基酸单元的绝对构型应用高级Marfey法，通过与标准氨基酸15.4min；L_Pip:17.0min。氨基酸或羟基酸标准品的D_FDLA衍生物保留时间分别为：L_合物的结构确定为(L_2_羟基_4_氰基丁酰_L_别异亮氨酰_L_缬氨酰_L_N_甲基异亮氨酰_]+加合分子离子峰基峰m/z803.5030(C40H67N8O9计算值803.5031)以及1个[M+Na]+加合分子化合物少了1个CH2单元。式聂所示化合物在常温CDCl3中测得的1HNMR谱与式I所示化合物化合物的1HNMR谱在低场区显示出4个可交换的活泼质子信号，比式I所示化合物多出1个[0141]式聂所示化合物的平面结构通过2DNMR数据分析得到准确确定。通(L2羟基4氰基丁酰L别异亮氨酰L缬氨酰LN甲基异亮氨酰LN甘氨酰L甘氨1405cm_1；1H_NMR(CDCl3,600MHz)和13CNMR(CDCl3，150MHz)数据见表2。HRESIMS:m/z胞(THP_1，购自中国医学科学院基础医学研究所细胞资源中心)公众可从申请人获得该生进行Westernblot实验或单核细胞粘β的表达；式I所示化合物在10nM和100nM时能够降低细胞粘附分子ICAM_1和促炎细胞因子成不溶性的深蓝色至蓝紫色的NBT_forma的普通细胞培养基，更换为含有不同浓度化合物的分化诱导培养基诱导培养基继续培养，途使用。加入固定剂(25.5％柠檬酸盐溶液+66.3％丙酮+8.2％的37％甲醛溶液，100μL/孔)固定菌素B具有很好的抑制破骨细胞形成作用和抗骨质疏[0174]下述AB系斑马鱼模式动物(HuZ,ChenB,ZhaoQ.BiolOpen，2019，8(5):bio040840),公众可从申请人获得该生物材料，该生物材料只为重复本发明的相