牛奶和饲料标准化操作流程

牛奶和饲料标准化操作流程2020年6月10日目录过渡牛检测流程进厂原料检测流程TMR混合日粮检测流程微生物检测流程生鲜乳出入库检测流程水分、粗灰分、粗蛋白、粗脂肪检测流程纤维、钙、磷及淀粉检测流程病理实验室检测流程一、生鲜乳出入库检测流程

1.煮沸实验判定牛奶新鲜度

取10ml牛奶与锥形瓶中放入沸水5分钟，观察是否有絮状物产生，若产生，说明牛奶不新鲜甚至已变质。2.酒精实验

取移液管吸取2ml鲜乳于洁净平皿中，取另一只移液管加入2ml78%的酒精，振摇30s后观察是否有颗粒状沉淀或絮状物产生。若有，则酒精实验阳性；若无，则为阴性。一、生鲜乳出入库检测流程3.酸度滴定用移液管吸取10ml鲜乳于干净三角瓶中，并用量筒量取20ml蒸馏水加入其中，用移液管加入2ml0.5%酚酞溶液摇匀，用0.1mol/L氢氧化钠标准溶液滴定至微红色，1min内不褪色。消耗0.10.1mol/L氢氧化钠标准溶液的毫升数乘以100乘以氢氧化钠浓度，即为鲜乳酸度。一、生鲜乳出入库检测流程

4.快抗检测

4.1SNAP抗生素检测；4.2β-内酰胺类检测；4.3黄曲霉毒素M1检测；

4.4磺胺类抗生素检测；

4.5喹诺酮抗生素检测；

4.6β-内酰胺酶检测；4.1SNAP抗生素检测4.1.1.打开试剂包用吸管吸取牛奶到标记线处（400ul-500ul），将牛奶加入样品管，摇晃样品管，使试剂球溶解。4.1.2将样品管内的样品全部倒入样品孔。样品流向蓝色激活环，在激活环的边沿颜色开始消失到中间的时候按下。4.1.3保持4min反应时间，判定结果。4.2β-内酰胺类检测4.3黄曲霉毒素M1检测4.4磺胺类抗生素检测4.4.1用移液枪取200μL回温后的奶样加入微孔中，反复吹打至孔内的试剂完全溶解；4.4.2将微孔放于室温下（20-25℃）孵育3分钟；4.4.3将试纸条插入微孔中，室温下继续孵育5分钟；4.4.4从微孔中取出试纸条，弃去试纸条下端的样品垫，判读结果。4.4磺胺类抗生素检测4.4.5结果判定：4.5喹诺酮抗生素检测4.5.1用移液枪取200μL奶样加入微孔中，反复吹打至孔内的试剂完全溶解；4.5.2将微孔放至温育器上，40℃孵育3分钟；4.5.3将试纸条插入微孔中，继续孵育3分钟；4.5.4观察结果。4.5喹诺酮抗生素检测5.结果判定：

T线比C线深，阴性；

T线和C线一样深，弱阳性；

T线比C线浅或T线不显色，阳性；

T线出现，C线不出现，无效C线T线阴性弱阳性阳性无效4.6β-内酰胺酶检测一、生鲜乳出入库检测流程5.慢抗检测每班次牛奶出库时快抗合格后做慢抗。5.1戴尔沃慢抗操作步骤：5.1.1将待检测样品混匀，药品恢复到室温。5.1.2将铝箔切开取出所需要的微孔个数。5.1.3用移液枪吸取100ul待测奶样，加入微孔中，不可吹打。5.1.4用盒中自带的胶带/条将微孔仔细封好。5.1.5置于64℃±0.5℃的水浴锅或孵育器，孵育2小时45分钟后观察结果。5广谱慢速抗生素的检测5广谱慢速抗生素的检测

5.1.6结果判定：↓↓

阳性

阴性5广谱慢速抗生素的检测5.2利普斯慢抗操作步骤：5.2.1将待检测样品混匀，药品恢复到室温。5.2.2将铝箔切开取出所需要的微孔个数。5.2.3用移液枪分别吸取50ul阴性质控奶样及待测奶样，分别加入微孔中，不可吹打。5.2.4用盒中自带的胶带/条将微孔仔细封好。5.2.5置于65℃的水浴锅或孵育器，孵育约2小时45分钟（具体时间参照外包装盒内所示的最佳培养时间）后观察结果。5广谱慢速抗生素的检测（6）结果判定：↓

阳性

阴性↓一、生鲜乳出入库检测流程

6.体细胞检测

每天对一班次牛奶进行抽检，用移液枪先后吸取奶样、稀释液各200ul，加入离心管并混合均匀，在体细胞检测仪上进行检测与读数。7.乳成分分析检测脂肪、蛋白、非脂、乳糖、密度及冰点在乳成分分析仪进行检测。8.检测合格第一时间通知发车。9.微生物检测。10.做好记录并录入电脑。二、过渡牛检测流程1.观察采样牛乳（颜色发黄牛乳，水乳，血乳，结块牛乳都不进行检测）；2.酒精检测；3.慢抗检测；3.1每个奶样分别进行慢抗检测；3.2慢抗奶样每10个为一组做一个混合样检测；3.3整体奶样混合后做一个慢抗；4.快抗检测；三、微生物检测流程1.准备工作实验器皿的清洗包装、培养基的配制、生理盐水的配制、洁净工作台的杀菌消毒。2.灭菌将报纸包装严密的器皿、培养基、生理盐水放入灭菌锅进行灭菌，121度灭菌15min。三、微生物检测规程3.检测；4.菌落计数；5.菌落总数报告；6.微生物废弃处理；四、进场原料检测规程1.采样对进厂原料进行采样，精料大于9个点，粗饲料大于15个点。2.样品制备四分法将样品混合均匀，使用粉碎机粉碎。3.留样4.检测4.1黄曲霉B1；4.2三聚氰胺；4.3玉米赤霉烯酮；5.检测结果合格后第一时间通知卸车。4.1黄曲霉B1检测规程4.1.1.取1g样品于2ml离心管，加入4ml50%乙醇溶液，摇匀。4.1.2打开黄曲霉毒素B1的包装瓶，取出试剂条和微孔，用移液枪取200ul上清液加入微孔中，反复吹打至微孔内底部物质充分溶解4.2.3室温孵育3min后，将试剂条插入微孔中，使之充分浸入溶液中，然后开始计时。4.2.4在室温反应5min，取出试剂条。4.2.5T线C线均显色，结果为阴性。检测T线未显色，结果为阳性；质控C线未显色，检测结果无效。4.1黄曲霉B1检测规程4.2三聚氰胺检测规程4.2.1准确称取1.00±0.05g均质后的饲料样品于10mL离心管中；4.2.2加入5mL样品稀释液，摇匀；4.2.3取出检测卡，平放于桌面，请使用本产品附带滴管吸取上清液，加入7-8滴于样品孔中；4.2.4加样后5-8min，观察显色区；4.2.5结果判定：阴性：C线显色，T线肉眼可见，无论颜色深浅均判为阴性；阳性：C线显色，T线不显色，判为阳性；无效：C线不显色，无论T线是否显色，结果均判为无效。4.2三聚氰胺检测规程4.3.1称取2g样品，加入4ml50%乙醇溶液，摇匀。4.3.2取50μL上清液，加2ml样品稀释液，混匀。4.3.3用移液枪取200μL样品液加入微孔中，反复吹打至孔内的试剂完全溶解；4.3.4将微孔放于室温下（20-25℃）孵育3分钟；4.3.5将试纸条插入微孔中，室温下继续孵育5分钟；4.3.62分钟内观察结果。4.3饲料中玉米赤霉烯酮的检测4.3饲料中玉米赤霉烯酮的检测4.3.7结果判定：5.TNR混合日粮检测流程5.1采样分牛群进行采样，每个牛舍上、中、下取九个点，采样1000g左右。5.2TMR的干物质及理化检测5.2.1每天对新产牛日粮、头胎小高产日粮、经产小高产日粮及大高产日粮进行干物质检测。5.2.2每周对日粮所有理化指标进行检测（理化指标检测详见各项理化指标检测流程）5.TNR混合日粮检测流程5.3TMR宾州筛检测5.3.1取样九点取样法取大约400g-500g样品放入宾州筛上层。5.3.2分筛每个来回五次，转8下，共计40次。每个来回17cm,1.1s/次。5.3.3称量计重各层分别称重、记录并计算比例，与标准对比。6.水分、粗灰分、粗蛋白及脂肪检测流程6.1水分检测流程6.1.1将干净的称量皿放入105度干燥箱中烘干3-4h至恒重，放入干燥器中冷却30min。6.1.2称量皿取出称重，重量为m0.6.1.3称取5g样品于称量皿，计为m1，放入干燥箱烘干至恒重。6.1.4烘干后冷却30min，称量。计为m2.6.1.5计算 W=(m0+m1-m2)/m1*1006.水分、粗灰分、粗蛋白及粗脂肪检测流程

6.2粗灰分检测流程6.2.1坩埚恒重将瓷坩埚放入马弗炉，550度灼烧60min至恒重，放入干燥器备用。6.2.2称样称量干燥后的瓷坩埚，计为m0。去皮后，称量5g样品于瓷坩埚，计为m1。6.水分、粗灰分、粗蛋白及粗脂肪检测流程6.2.3样品炭化将装有样品的瓷坩埚置于电炉子加热至样品炭化（不冒白烟）。6.2.4样品灰化将马弗炉提前打开温度升到550度，将盛有样品的瓷坩埚放入马弗炉中，灼烧3h。6.2.5称量灼烧完成，待温度降低后，取出瓷坩埚放入干燥器冷却，然后称量，计为m2。6.2.6计算W=（m2-m0）/m1*1006.水分、粗灰分、粗蛋白及粗脂肪检测流程6.3粗蛋白检测流程6.3.1称样称取样品（0.5000-1.000g）于消化管中，计为M，加入混合催化剂约6.4g，加入12ml浓硫酸，置于石墨消解仪上。6.3.2样品消化250度2h使样品焦化，泡沫消失，再调节温度至450度，加热3h，时间结束后停止加热，消化管内溶液颜色呈透明的蓝绿色。6.水分、粗灰分、粗蛋白及粗脂肪检测流程

6.3.3样品的蒸馏滴定打开凯氏定氮仪，消化管依次放入蒸馏器上，取250ml三角瓶，加入2-3滴混合指示剂，将冷凝管末端浸入三角瓶，打开冷凝水，设置好参数，开始蒸馏。蒸馏完成后用0.1mol/L盐酸溶液进行滴定，至灰红色，记录消耗盐酸体积，计为V2.同时做空白，计为V1.6.3.4计算W=【（V2-V1）*C*0.014*6.25】/M*1000.014------每毫克当量氮的克数6.水分、粗灰分、粗蛋白及粗脂肪检测流程6.4粗脂肪检测流程6.4.1脂肪包称重脂肪包烘干至恒重，称量，计为M1。6.4.2称样称取样品（0.900g-1.1000g），于脂肪袋，封口，烘干至恒重，称量，计为M2。6.水分、粗灰分、粗蛋白及粗脂肪检测流程

6.4.3脂肪抽提打开脂肪仪，抽提3-5h。6.4.4称重抽提结束后，将脂肪包烘干至恒重，称量，计为M3。6.4.5计算

W（%）=（M2-M3）/(M2-M1)*1007.纤维、钙、磷及淀粉检测流程7.1纤维检测流程7.1.1NDF检测流程7.1.1.1纤维袋编号、恒重7.1.1.2称量恒重纤维袋，计为M1.称样（0.4500g-05500g），计为M2。去脂肪，去淀粉。7.1.1.3用NDF清洗剂清洗纤维袋，1h。然后用煮沸的蒸馏水冲洗至滤液澄清无泡沫，烘干至恒重，计为M3。7.1.1.4计算W（%）=（M3-M1）/M2*1007.纤维、钙、磷及淀粉检测流程

7.1.2ADF检测流程.7.1.2.1纤维袋编号、恒重7.1.2.2称量恒重纤维袋，计为M1.称样（0.4500g-05500g），计为M2。去脂肪，去淀粉。7.1.2.3用ADF清洗剂清洗纤维袋，1h。然后用煮沸的蒸馏水冲洗至滤液澄清无泡沫，烘干至恒重，计为M3。7.1.1.4计算W（%）=（M3-M1）/M2*1007.纤维、钙、磷及淀粉检测流程7.2钙检测流程7.2.1样品的制备分解，样品质量计为m7.2.2分解液的制备，分解液体积计为V0。7.2.3样品检测取分解液10ml于三角瓶，计为V1，依次加入蒸馏水50ml，10%淀粉溶液10ml，三乙醇胺2ml，乙二胺1ml，1滴孔雀石绿，20%氢氧化钾20ml，0.1g盐酸羟胺，少于钙黄绿素，依次摇匀，黑色背景下用EDTA滴定至紫红色，消耗EDTA体积计为V2.7.2.3计算X（%）=（T*V2*V0）/（m*V1）7.纤维、钙、磷及淀粉检测流程

7.3磷检测流程7.3.1样品的制备与分解，样品质量计为M1。7.3.2分解液的制备7.3.3标准曲线的制备7.3.4样品的检测7.3.5计算W= M2/（M1*5*100）M2---通过标准曲线查样品分解液磷的含量。7.纤维、钙、磷及淀粉检测流程

7.4淀粉检测流程7.4.1称样，调酸。7.4.2样品检测a.装有样品的比色管加50ml0.31mol/L盐酸；b.加耗酸量（3.1mo