ISOTS 57982022 体外诊断试验系统.用核酸扩增法检测严重急性呼吸综合征冠状病毒2（SARS-CoV-2）的要求和建议标准立项发展报告

ISO/TS5798:2022体外诊断试验系统用核酸扩增法检测严重急性呼吸综合征冠状病毒2（SARS-CoV-2）的要求和建议标准立项发展报告StandardizationDevelopmentReport:Invitrodiagnostictestsystems—Requirementsandrecommendationsfordetectionofsevereacuterespiratorysyndromecoronavirus2(SARS-CoV-2)bynucleicacidamplificationmethods摘要2022年4月19日，国际标准化组织（ISO）正式发布ISO/TS5798:2022《体外诊断试验系统用核酸扩增法检测严重急性呼吸综合征冠状病毒2（SARS-CoV-2）的要求和建议》。该技术规范是全球首个针对SARS-CoV-2核酸扩增检测方法系统性的国际标准化技术文件，其发布标志着全球新冠肺炎疫情防控中体外诊断领域的标准化工作迈入新阶段。本报告系统梳理了该标准的立项背景、编制历程、核心技术内容及国际影响。标准涵盖检测系统的性能特征、样本采集与处理、核酸提取与扩增、质量控制、结果解读及实验室安全等全流程环节，为全球不同经济发展水平地区的实验室提供了分层级、可操作的技术指引。该标准的发布有效填补了ISO在突发公共卫生事件中快速响应病原体检测领域的标准空白，为全球疫情防控中检测结果的一致性和可比性提供了重要技术保障，同时为未来应对新发传染病标准化工作建立了可借鉴的快速响应范式。本报告亦对该标准主要起草单位及未来修订方向进行了简要分析。关键词：体外诊断；核酸扩增；SARS-CoV-2；国际标准化；新冠肺炎；质量要求；实验室检测Keywords:Invitrodiagnostics;Nucleicacidamplification;SARS-CoV-2;Internationalstandardization;COVID-19;Qualityrequirements;Laboratorytesting一、引言（一）研制背景2019年底暴发的新型冠状病毒肺炎（COVID-19）疫情迅速演变为全球性公共卫生危机。世界卫生组织（WHO）于2020年1月30日宣布其构成“国际关注的突发公共卫生事件”（PHEIC），并于2020年3月11日正式将其定性为全球大流行。截至2022年4月，全球累计确诊病例超过5亿例，累计死亡病例超过600万例，对各国公共卫生体系、社会经济运行和人民生命安全造成了前所未有的冲击。面对这场公共卫生危机，快速、准确的实验室检测成为疫情防控的关键环节。核酸扩增技术（NucleicAcidAmplificationTechnology,NAT），特别是实时荧光逆转录聚合酶链反应（RT-PCR），以其高灵敏度和高特异性成为SARS-CoV-2检测的“金标准”方法。全球各国紧急启动了大规模的检测行动，大量体外诊断试剂盒迅速研发并投入市场。然而，由于缺乏统一的国际标准，各检测产品的性能指标、操作流程、质量控制及结果判读标准参差不齐，导致不同实验室之间、不同试剂盒之间的检测结果存在显著差异，给临床诊断、流行病学调查和国际间数据比较带来了严重困扰。在此背景下，制定一项专门针对SARS-CoV-2核酸扩增检测的国际标准，成为国际社会亟需解决的共性需求。（二）标准立项依据ISO/TS5798:2022的立项和编制主要基于以下法规和标准化政策依据：1.《ISO战略计划（2030）》：明确将“应对全球挑战”作为ISO工作的核心方向之一，特别是在公共卫生突发事件中发挥国际标准的关键支撑作用。2.ISO/TC212“临床实验室检验和体外诊断检验系统”技术委员会工作范围：该技术委员会专门负责临床实验室检验、体外诊断系统、参考系统及质量控制等领域的标准化工作，其下设有WG3“分子诊断”工作组，为该标准的研制提供了组织保障。3.ISO/IEC导则第2部分：规定了技术规范（TechnicalSpecification,TS）的编制规则，即在仍处于技术发展阶段的领域、或尚不能达成国际共识的情况下，可先行发布技术规范以提供即时指导。4.WHO《SARS-CoV-2分子检测建议》：WHO于2020年发布的实验室检测指导文件为该标准的核心技术指标提供了基准参考。5.ISO15189:2012《医学实验室—质量和能力的要求》：该标准为医学实验室的通用质量管理提供了框架基础，ISO/TS5798在此基础上进一步细化了NAT检测SARS-CoV-2的技术要求。（三）研制过程概述ISO/TS5798的研制工作体现了国际标准组织应对突发公共卫生事件的快速响应机制。2020年初，ISO/TC212即启动了相关议题的讨论，多国专家提出应尽快制定针对SARS-CoV-2核酸检测的国际标准。经过成员国投票表决，该项目以技术规范（TS）形式立项，由ISO/TC212/WG3（分子诊断工作组）负责编制。中国作为ISO/TC212的积极成员，深度参与了该标准的研制工作，在标准框架设计和核心指标制定中发挥了重要作用。来自中国、德国、美国、日本、韩国、法国等多国的专家共同组成工作组，经过多轮讨论、征求意见和修改完善，最终于2022年4月19日正式发布。该标准的制定周期仅约两年，相较于常规ISO标准通常3-5年的制定周期显著缩短，充分体现了国际社会对疫情防控标准化需求的紧迫性和各成员体的高效协作。（四）与国内外标准的关系ISO/TS5798:2022的发布与多项现有国内外标准形成了良好的互补关系：1.与ISO15189的关系：ISO15189规定了医学实验室质量和能力的通用要求，而ISO/TS5798在此基础上针对SARS-CoV-2核酸检测这一特定应用场景提供了细化的技术指引。两者构成“通用要求+专用标准”的层级关系。2.与WHO技术指导文件的关系：WHO发布的系列实验室检测建议侧重于公共卫生视角的检测策略，而ISO/TS5798从标准化角度出发，更侧重于检测系统的技术性能要求和质量管理规范，两者相互补充。3.与我国国家标准的关系：我国在疫情期间先后发布了GB/T40982-2021《新型冠状病毒核酸检测试剂盒质量评价要求》等系列国家标准，ISO/TS5798的发布为我国体外诊断产业的国际对接提供了新的参照。4.与区域标准的关系：欧盟体外诊断医疗器械法规（IVDR,Regulation(EU)2017/746）对SARS-CoV-2检测试剂提出了严格的性能评估要求，ISO/TS5798可作为IVDR合规的重要参考技术文件。二、标准适用范围ISO/TS5798:2022适用于以下使用核酸扩增技术检测SARS-CoV-2的体外诊断检验系统和设备：1.适用的检测方法：包括实时荧光RT-PCR、数字PCR（dPCR）、等温核酸扩增技术（如LAMP）等各类基于核酸扩增原理的检测方法。2.适用的样本类型：包括上呼吸道样本（鼻咽拭子、口咽拭子、鼻腔拭子等）、下呼吸道样本（痰液、支气管肺泡灌洗液等）以及其他符合检测要求的临床样本。3.适用的使用场景：包括临床实验室、移动方舱实验室、快速检测点、社区筛查点等不同层级的检测场所。4.适用的人员：包括医学检验专业人员、实验室技术人员以及经培训合格的相关检测人员。5.适用的产品范围：包括商品化的核酸检测试剂盒、实验室自建检测方法（LDT）以及全自动核酸检测系统。该标准不涉及血清学检测（抗体检测）和抗原检测方法，其适用范围明确限定于核酸扩增检测技术。同时，该标准可作为检测系统制造商产品研发和质量控制的参考依据，也可为独立实验室的方法验证和日常质量控制提供技术指导。三、标准主要内容ISO/TS5798:2022的核心内容涵盖以下几个主要技术方面：（一）检测系统性能要求标准详细规定了SARS-CoV-2核酸检测系统的关键性能特征及其评价方法，包括：1.分析灵敏度（检测限，LoD）：规定检测系统的最低检测限应满足临床需求，建议各制造商明确定义并验证其产品的检测限，推荐使用国际单位或数字拷贝数（copies/mL）进行表示。标准要求使用有限稀释法结合概率统计分析（如Probit分析）来确定检测限。2.分析特异性：要求检测系统应能够特异性识别SARS-CoV-2，避免与其他人类冠状病毒（如SARS-CoV、MERS-CoV、HCoV-229E、HCoV-OC43、HCoV-NL63、HCoV-HKU1）及常见呼吸道病原体发生交叉反应。标准列出了推荐的交叉反应验证物质清单。3.包容性（Inclusivity）：鉴于SARS-CoV-2在传播过程中不断发生变异，标准要求检测系统应对已知的主要变异株具有可靠的检出能力，并对引物和探针设计区域的保守性提出要求。4.精密度：规定了对重复性（批内精密度）、中间精密度和再现性（批间精密度）的评价方法和可接受标准。5.阳性/阴性符合率：要求与参考方法进行比较研究，明确临床样本验证的最低样本量和评价标准。（二）样本采集、运输和保存1.样本采集容器和保存液：标准推荐使用含病毒灭活功能的样本保存液，降低实验室生物安全风险，同时确保核酸稳定性。2.样本运输条件：规定不同保存温度（2~8°C、-20°C及以下）下样本的可接受保存时限及冻融次数限制。（三）核酸提取与扩增1.核酸提取方法：对不同提取方法（磁珠法、柱提法、裂解法等）的性能验证提出了要求。2.内参（内源性和外源性内参）：标准强调检测系统中应包含内参以监控核酸提取效率和扩增抑制情况，并区分了内源性内参（如人RNaseP基因）和外源性内参的不同用途。3.扩增反应体系：对引物和探针设计、反应条件优化、防污染措施（如UNG酶体系）等提出了技术建议。4.靶基因选择：建议检测系统应针对SARS-CoV-2的多个保守基因区域（如ORF1ab、N基因、E基因、S基因等）进行设计，以降低因病毒变异导致的漏检风险。（四）质量控制1.质控品设置：标准详细规定了阴性质控、弱阳性质控和阳性质控的设置频率、位置及判读规则。2.质控规则：推荐使用Westgard多规则或等效的质控方法，规定了失控时的处理程序和记录要求。3.外部质量评价（EQA）：建议实验室定期参加外部质量评价或能力验证活动。（五）结果解读与报告1.结果判读标准：对阳性、阴性、灰区（临界值）及无效结果的判读标准给出了明确建议。2.Ct值的临床应用：提出了对Ct值报告的建议及其在病程判断中的参考价值。3.结果报告中应包含的要素：包括检测方法、检测试剂、检测限、样本类型、采集日期、接收日期、检测日期等关键信息的要求。（六）实验室生物安全1.实验室分区要求：建议按照“试剂准备区—样本处理区—扩增区—产物分析区”的物理分区原则进行实验操作。2.个人防护装备（PPE）：对检测人员在不同操作环节的防护要求提出了具体建议。3.废弃物处理：对检测过程中产生的医疗废弃物的处理和灭活要求进行了规定。四、标准核心内容与亮点分析（一）检测系统的技术要求与性能验证ISO/TS5798:2022明确了SARS-CoV-2核酸检测系统在分析灵敏度、特异性、包容性、精密度和准确性方面的性能指标，并系统规定了方法验证和性能评价的标准化流程。其中，针对病毒变异株的检测包容性要求是本次标准的重要特色，标准明确要求制造商验证检测系统对不同谱系变异株的检出能力，这对全球范围内持续跟踪病毒变异趋势、防范漏检风险具有重要的实践意义。（二）质量管理与过程控制标准涵盖从检测系统设计到实验室常规使用的全过程质量管理链条。其核心亮点包括：首次在国际标准层面系统性地将Westgard质控规则应用于病毒核酸检测，并对弱阳性质控的频率和位置提出了具体建议；引入风险管理的理念，强调实验室应根据自身条件和检测目的进行风险评估，制定相应的质量控制策略。标准对检测系统制造商和用户实验室的质量职责进行了清晰界定，形成了“设计验证+使用验证”的双层质量保障机制。（三）结果判读与临床沟通在结果判读与报告方面，标准对Ct值在临床中的应用提出了审慎建议，核心要点包括：Ct值受多种因素影响，不应作为疾病严重程度或传染性的独立判断指标；建议实验室在报告中注明检测系统的检测限信息；对于灰区结果（临界值），建议重复检测或重新采样检测。标准同时强调了实验室与临床科室之间的沟通机制，包括异常结果的快速报告通道和结果解释的支持服务，为提升检测结果的临床有效运用提供了规范化指导。（四）经济社会发展价值从经济社会发展角度审视，该标准的发布产生了多维度的积极效益。在公共卫生层面，通过统一检测技术要求，有效提高了全球范围内检测结果的可比性和互认性，为跨国旅行、跨境贸易和国际公共卫生合作提供了技术支撑。在技术创新层面，该标准明确了性能验证的系统要求，引导企业从研发初期即对标国际规范，提升了产品的国际竞争力。在患者安全层面，标准对检测质量和结果解读的系统要求有效降低了误诊和漏诊风险，保障了患者的诊疗权益。此外，该标准通过合理的性能分级和建议，兼顾了高资源与低资源地区的不同需求，具有较强的全球适用性和可操作性。五、标准实施与推广应用ISO/TS5798:2022的发布在全球范围内产生了广泛影响，其应用情况主要体现在以下方面：1.全球检测产品的规范化引导：该标准已成为全球多个国家和地区的体外诊断制造商设计、验证和注册SARS-CoV-2核酸检测产品的重要参考依据，推动了检测试剂盒质量的整体提升。2.实验室质量提升的实用工具：各国医学实验室在建立或优化SARS-CoV-2核酸检测能力时，将该标准作为方法验证、质量控制和方法比对的重要参考文件。尤其是疫情期间新建的大量检测实验室，依据该标准建立了规范的质量管理体系。3.国际协作中的互认支撑：该标准为不同国家间检测结果的互认提供了统一技术语言，为疫情期间国际旅行恢复和跨境人员流动提供了便利。4.我国标准体系的有效补充：我国在疫情期间发布了GB/T40982-2021等针对新型冠状病毒核酸检测试剂盒的质量评价系列国家标准。ISO/TS5798的发布为国内企业产品出口及与国际要求对标提供了重要参考。两者的配套实施有效促进了我国体外诊断产业的国际化发展。六、标准实施建议为确保ISO/TS5798:2022的有效实施和持续发挥价值，提出以下建议：1.积极采用国际标准：建议国内相关标准化技术机构加快对该国际标准的分析评估和转化研究，适时推动将ISO/TS5798转化为我国标准化指导性技术文件或推荐性国家标准，促进国内检测体系的国际对接。2.加强培训与推广：建议相关行业协会和学术组织举办针对该标准的解读和培训活动，提高检测机构对该标准技术要求的理解和执行能力。3.推动多方协同应用：鼓励体外诊断产品制造商在新产品研发中将该标准作为设计输入，医疗机构和第三方检测实验室在方法建立和日常质控中参照执行，监督管理部门在技术审评和监督抽检中参考采用。4.关注标准更新迭代：鉴于SARS-CoV-2持续变异和国际上检测技术不断演进，建议相关技术委员会持续跟踪该标准的实施反馈，适时提出修订建议，确保标准与技术发展保持同步。七、主要起草单位介绍ISO/TS5798:2022由ISO/TC212“临床实验室检验和体外诊断检验系统”技术委员会（以下简称ISO/TC212）负责归口管理，由WG3“分子诊断工作组”具体承担编制工作。ISO/TC212成立于1995年，秘书处设在美国国家标准学会（ANSI），是国际临床检验和体外诊断领域最权威的标准化技术组织之一。截至目前，ISO/TC212已发布国际标准60余项，涵盖参考系统、抗菌药物敏感性试验、分子诊断、POCT等核心领域，其制定的ISO15189系列标准被全球数万个医学实验室采信。ISO/TC212的成员包括来自全球40余个国家的标准化机构以及WHO、国际临床化学与检验医学联合会（IFCC）等国际组织的联络代表。在ISO/TS5798的制定过程中，中国国家标准化管理委员会（SAC）作为ISO/TC212的积极成员（P成员），组织国内体外诊断领域专家深度参与了标准框架的讨论、技术指标的论证和文本的审核修订工作，中国专家在标准立项论证、技术框架设计和关键性能指标制定等方面提出了多项建设性意见并被采纳，为标准的顺利发布作出了重要贡献。八、结论与展望ISO/TS5798:2022是全球体外诊断领域首个针对单一病原体核酸检测系统发布的技术规范，其发布具有重要的里程碑意义。该标准以科学性和适用性为核心原则，系统解决了SARS-CoV-2核酸检测中面临的技术要求和质量管理问题，为全球范围内检测结果的准确性、一致性和可比性提供了重要的标准化技术支撑。展望未来，该标准的价值将不仅限于应对当前疫情：它的发布为国际标准化组织应对突发公共卫生事件的快速响应积累了宝贵经验，为建立新发传染病检测标准的快速通道机制提供了成功范例，也为全球体外诊断标准体系在生物安全、质量控制和技术评价等方面的持续完善奠定了基础。在当前全球疫情趋于常态化管理的背景下，该标准将继续在检测质量保障和全球公共卫生合作中发挥不可