2025 饲料添加剂 第13部分：其他 胆汁酸

GB73001301—2025

.

前言

本文件按照标准化工作导则第部分标准化文件的结构和起草规则的规定

GB/T1.1—2020《1:》

起草

。

本文件为饲料添加剂的第部分已经发布了以下部分

GB7300《》1301。GB7300:

第部分氨基酸氨基酸盐及其类似物苏氨酸

———1:、L-(GB7300.101);

第部分氨基酸氨基酸盐及其类似物甘氨酸

———1:、(GB7300.102);

第部分氨基酸氨基酸盐及其类似物蛋氨酸羟基类似物

———1:、(GB7300.103);

第部分氨基酸氨基酸盐及其类似物缬氨酸

———1:、L-(GB7300.104);

第部分维生素及类维生素抗坏血酸磷酸酯盐

———2:L--2-(GB7300.201);

第部分维生素及类维生素维生素油

———2:D3(GB7300.202);

第部分维生素及类维生素甜菜碱

———2:(GB7300.203);

第部分维生素及类维生素甜菜碱盐酸盐

———2:(GB7300.204);

第部分矿物元素及其络螯合物碘化钾

———3:()(GB7300.301);

第部分矿物元素及其络螯合物亚硒酸钠

———3:()(GB7300.302);

第部分矿物元素及其络螯合物碘酸钾

———3:()(GB7300.303);

第部分矿物元素及其络螯合物甘氨酸铁络合物

———3:()(GB7300.304);

第部分矿物元素及其络螯合物碱式氯化铜

———3:()(GB7300.305);

第部分矿物元素及其络螯合物烟酸铬

———3:()(GB7300.306);

第部分矿物元素及其络螯合物甘氨酸锌

———3:()(GB7300.307);

第部分矿物元素及其络螯合物苏氨酸锌螯合物

———3:()(GB7300.308);

第部分酶制剂木聚糖酶

———4:(GB7300.401);

第部分酶制剂植酸酶

———4:(GB7300.402);

第部分酶制剂纤维素酶

———4:(GB7300.403);

第部分酶制剂β甘露聚糖酶

———4:-(GB7300.404);

第部分酶制剂α半乳糖苷酶

———4:-(GB7300.405);

第部分微生物酿酒酵母

———5:(GB7300.501);

第部分微生物植物乳杆菌

———5:(GB7300.502);

第部分微生物屎肠球菌

———5:(GB7300.503);

第部分微生物嗜酸乳杆菌

———5:(GB7300.504);

第部分微生物凝结芽孢杆菌

———5:(GB7300.505);

第部分非蛋白氮尿素

———6:(GB7300.601);

第部分防腐剂防霉剂和酸度调节剂碳酸氢钠

———8:、(GB7300.801);

第部分防腐剂防霉剂和酸度调节剂丙酸

———8:、(GB7300.802);

第部分防腐剂防霉剂和酸度调节剂氯化铵

———8:、(GB7300.803);

第部分防腐剂防霉剂和酸度调节剂苯甲酸

———8:、(GB7300.804);

第部分着色剂β胡萝卜素粉

———9:-(GB7300.901);

第部分着色剂ββ胡萝卜素二酮斑蝥黄

———9:,--4,4-()(GB7300.902);

第部分调味和诱食物质谷氨酸钠

———10:(GB7300.1001);

Ⅰ

GB73001301—2025

.

第部分调味和诱食物质大蒜素

———10:(GB7300.1002);

第部分调味和诱食物质新甲基橙皮苷二氢查耳酮

———10:(GB7300.1003);

第部分其他胆汁酸

———13:(GB7300.1301)。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利本文件的发布机构不承担识别专利的责任

。。

本文件由中华人民共和国农业农村部提出并归口

。

Ⅱ

GB73001301—2025

.

引言

饲料添加剂是指在饲料加工制作使用过程中添加的少量或者微量物质包括营养性饲料添加剂

、、,

和一般饲料添加剂为了便于使用按照产品类别饲料添加剂分为以下个大类

,,,GB7300《》13:

氨基酸氨基酸盐及其类似物

———、;

维生素及类维生素

———;

矿物元素及其络螯合物

———();

酶制剂

———;

微生物

———;

非蛋白氮

———;

抗氧化剂

———;

防腐剂防霉剂和酸度调节剂

———、;

着色剂

———;

调味和诱食物质

———;

粘结剂抗结块剂稳定剂和乳化剂

———、、;

多糖和寡糖

———;

其他

———。

本文件的产品胆汁酸属于第大类其他因胆汁酸是此大类第个发布的产品标准所以本文件

13,1,

以编号作为的部分

GB7300.1301,GB73001301。

Ⅲ

GB73001301—2025

.

饲料添加剂第13部分其他

:

胆汁酸

1范围

本文件给出了胆汁酸主要成分猪胆酸猪去氧胆酸和鹅去氧胆酸的化学名称分子式相对分子质

、、、

量和化学结构式规定了饲料添加剂胆汁酸产品的技术要求检验规则及标签包装运输贮存和保质

,、、、、

期描述了取样和试验方法

,。

本文件适用于以提取胆红素后的猪胆膏为原料经皂化脱色酸化纯化干燥等加工工艺获得的

,、、、、

饲料添加剂胆汁酸产品

。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款其中注日期的引用文

。,

件仅该日期对应的版本适用于本文件不注日期的引用文件其最新版本包括所有的修改单适用于

,;,()

本文件

。

饲料粉碎粒度测定两层筛筛分法

GB/T5917.1

饲料中水分的测定

GB/T6435

饲料中粗灰分的测定

GB/T6438

饲料中水溶性氯化物的测定

GB/T6439

分析实验室用水规格和试验方法

GB/T6682

数值修约规则与极限数值的表示和判定

GB/T8170

饲料标签

GB10648

饲料中总砷的测定

GB/T13079

饲料中铅的测定原子吸收光谱法

GB/T13080

饲料中镉的测定

GB/T13082

饲料中沙门氏菌的测定

GB/T13091

饲料采样

GB/T14699

饲料微生物检验采样

GB/T42959

3术语和定义

本文件没有需要界定的术语和定义

。

4化学名称分子式相对分子质量和化学结构式

、、

41化学名称

.

猪胆酸ααα三羟基β胆烷酸猪去氧胆酸αα二羟基β胆烷酸鹅去氧胆酸αα

:3,6,7--5-;:3,6--5-;:3,7-

二羟基β胆烷酸

-5-。

1

GB73001301—2025

.

42分子式

.

猪胆酸猪去氧胆酸鹅去氧胆酸

:C24H40O5;:C24H40O4;:C24H40O4。

43相对分子质量

.

猪胆酸按年国际相对原子质量猪去氧胆酸按年国际相对原子质

:408.57(2022);:392.58(2022

量鹅去氧胆酸按年国际相对原子质量

);:392.58(2022)。

44化学结构式

.

猪胆酸猪去氧胆酸和鹅去氧胆酸的化学结构式分别见图图和图

、1a)、1b)1c)。

a猪胆酸b猪去氧胆酸c鹅去氧胆酸

)))

图1猪胆酸猪去氧胆酸和鹅去氧胆酸的化学结构式

、

5技术要求

51外观与性状

.

本品应为白色或类白色粉末有轻微腥味

,。

52鉴别

.

在硫酸甲醛溶液中呈现蓝绿色

。

53理化指标

.

应符合表的要求

1。

表1理化指标

项目指标

胆汁酸总量以猪胆酸猪去氧胆酸和鹅去氧胆酸含量之和计

(、)/%≥95.0

猪去氧胆酸猪胆酸

+/%≥78.0

鹅去氧胆酸

/%≥17.0

水溶性氯化物以-计

(Cl)/%≤0.5

粗灰分

/%≤0.1

水分

/%≤1.0

粒度试验筛通过率

(180μm)/%≥95

2

GB73001301—2025

.

54卫生指标

.

应符合表的要求

2。

表2卫生指标

项目指标

总砷以计

(As)/(mg/kg)≤0.1

铅

/(mg/kg)≤1.0

镉

/(mg/kg)≤2.0

沙门氏菌样品中不应检出

/(25g)

6取样

按和执行

GB/T14699GB/T42959。

7试验方法

71一般规定

.

除非另有规定仅使用分析纯试剂色谱分析中用水为中规定的一级水其他分析用水

,;GB/T6682,

为规定的三级水

GB/T6682。

72外观与性状

.

取适量试样放置于适宜的器皿中在正常光照通风良好无异味环境下观察其色泽和形态并嗅

,、、,,

其气味

。

73鉴别试验

.

731试剂或材料

..

7311硫酸

...。

7312甲醛

...。

732仪器设备

..

分析天平精度为

:0.1mg。

733鉴别方法

..

称取试样于洁净试管中加硫酸与滴甲醛使其溶解放置后再加水

10mg,1mL1,5min,5mL,

生成蓝绿色悬浮物

。

74胆汁酸总量猪胆酸+猪去氧胆酸鹅去氧胆酸

.、、

741高效液相色谱-荧光法仲裁法

..()

7411原理

...

试样用甲醇溶解在冠醚催化下用溴甲基甲氧基香豆素将猪胆酸猪去氧胆酸和鹅去

,18--6,4--7-、

3

GB73001301—2025

.

氧胆酸衍生为具有荧光发色基团化合物经高效液相色谱反相柱法分离后荧光检测器测定外标法

,,,

定量

。

7412试剂或材料

...

74121甲醇色谱纯

....:。

74122乙腈色谱纯

....:。

74123氢氧化钾甲醇溶液称取氢氧化钾置于容量瓶中用甲醇

....(1.8mmol/L):0.101g,100mL,

溶解并定容至刻度混匀准确移取该溶液置于容量瓶中用甲醇稀

(7.4.1.2.1),。10mL,100mL,(7.4.1.2.1)

释并定容混匀

,。

74124溴甲基甲氧基香豆素乙腈溶液称取置于

....4--7-(BMC)(10mmol/L):0.1345gBMC50mL

容量瓶中用乙腈溶解并定容混匀

,(7.4.1.2.2),。

74125冠醚乙腈溶液称取置于容量瓶中用乙腈

....18--6(DCC)(5mmol/L):0.0661gDCC50mL,

溶解并定容混匀

(7.4.1.2.2),。

74126三氟乙酸溶液移取三氟乙酸置于容量瓶中用水稀释并定容混

....0.05%:0.5mL,1000mL,,

匀微孔滤膜过滤

,0.45μm(7.4.1.2.9)。

74127混合标准贮备溶液分别准确称取猪胆酸标准品号纯度

....(1mg/mL):(CAS:547-75-1,≥

猪去氧胆酸标准品号纯度鹅去氧胆酸标准品号纯度

99%)、(CAS:83-49-8,≥97.3%)、(CAS:74-25-9,

各精确至于容量瓶中用甲醇溶解并定容混匀以

≥99%)10mg(0.01mg),10mL,(7.4.1.2.1),。4℃

下保存有效期为周

,2。

74128混合标准系列溶液精确移取混合标准储备溶液适量于容量瓶中用甲醇

....:(7.4.1.2.7)50mL,

稀释并定容混匀配制成质量浓度分别为

(7.4.1.2.1),,5μg/mL、10μg/mL、20μg/mL、50μg/mL、

的混合标准工作溶液临用现配

100μg/mL、200μg/mL。。

74129微孔滤膜有机系

....:0.45μm,。

7413仪器设备

...

74131高效液相色谱仪配荧光检测器

....:。

74132分析天平精度为和

....,0.1mg0.01mg。

74133氮吹仪

....。

74134涡旋仪

....。

74135水浴锅温控精度

....:±2℃。

74136超声波振荡器

....。

7414试验步骤

...

74141试样溶液的制备

....

平行做两份试验称取试样准确至于容量瓶中用甲醇超声

。200mg(0.1mg)100mL,(7.4.1.2.1)

溶解并定容V混匀准确移取V于容量瓶中用甲醇稀释并定容

(1),。5mL(2),100mL,(7.4.1.2.1)

V混匀为试样溶液

(3),,。

74142衍生

....

准确移取混合标准系列溶液和试样溶液各分别置于具塞试

(7.4.1.2.8)(7.4.1.4.1)0.5mL,10mL

管中各加入氢氧化钾甲醇溶液旋涡混匀于氮气吹干分别向试管中加入

,2.50mL(7.4.1.2.3),,55℃。

乙腈溶液和乙腈溶液各将试管盖严于水浴衍生

BMC(7.4.1.2.4)DCC(7.4.1.2.5)0.50mL,,65℃2h。

4

GB73001301—2025

.

取出试管冷却至室温衍生后的溶液过微孔滤膜待测

,。0.45μm(7.4.1.2.9),。

74143高效液相色谱参考条件

....

高效液相色谱参考条件如下

:

色谱柱柱长内径粒径或者性能相当者

a):C18,250mm,4.6mm,5μm,;

流动相相三氟乙酸溶液相乙腈

b):A:0.05%(7.4.1.2.6),B:(7.4.1.2.2);

流速

c):1.0mL/min;

检测波长荧光激发波长发射波长

d):330nm,410nm;

柱温室温

e):;

进样量

f):10μL;

梯度洗脱程序见表

g),3。

表3梯度洗脱程序

时间相相

/minA/%B/%

04060

24060

142080

182080

204060

264060

74144测定

....

在仪器最佳工作条件下将衍生反应后的混合标准系列溶液和试样溶液注入液相色谱仪猪胆酸

,,、

猪去氧胆酸和鹅去氧胆酸标准溶液色谱图见附录

A。

74145定性

....

试样溶液中猪胆酸猪去氧胆酸和鹅去氧胆酸保留时间应与混合标准系列溶液浓度相近的该组分

、

的保留时间一致其相对偏差在之内

,2.5%。

74146定量

....

以混合标准系列溶液中被测组分浓度为横坐标相应的峰面积为纵坐标绘制各组分的标准曲线

,,,

其线性相关系数不低于单点校准定量时试样溶液中猪胆酸猪去氧胆酸和鹅去氧胆酸的浓度与

0.99。,、

标准系列工作溶液的浓度相差不超过

30%。

7415试验数据处理

...

试样中猪胆酸猪去氧胆酸和鹅去氧胆酸含量以质量分数wi计数值以表示单点校准按式

、,%,(1)

计算多点校准按式计算

,(2)。

PiCiVV

××1×3

wi=×

Pi×m×V×100…………(1)

st21000

式中

:

Pi试样溶液中猪胆酸猪去氧胆酸和鹅去氧胆酸的峰面积

———、;

5

GB73001301—2025

.

Ci混合标准工作溶液中猪胆酸猪去氧胆酸和鹅去氧胆酸的质量浓度单位为微克每毫升

———、,

(μg/mL);

V试样溶液定容体积单位为毫升

1———,(mL);

V试样溶液分取体积单位为毫升

2———(7.4.1.4.1),(mL);

V稀释定容体积单位为毫升

3———,(mL);

Pi混合标准工作溶液中猪胆酸猪去氧胆酸和鹅去氧胆酸的峰面积

st———、;

m试样质量单位为毫克

———,(mg)。

测定结果用平行测定的算术平均值表示结果保留至小数点后一位

,。

CiVV

×1×3

wi=×

m×V×100…………(2)

21000

式中

:

Ci标准曲线上查得的试样溶液中猪胆酸猪去氧胆酸和鹅去氧胆酸的质量浓度单位为微克

———、,

每毫升

(μg/mL);

V试样溶液定容体积单位为毫升

1———,(mL);

V试样溶液分取体积单位为毫升

2———(7.4.1.4.1),(mL);

V稀释定容体积单位为毫升

3———,(mL);

m试样质量单位为毫克

———,(mg)。

测定结果用平行测定的算术平均值表示结果保留至小数点后一位

,。

试样中胆汁酸总量以质量分数w计数值以表示按式计算

,%,(3)。

w=w+w+w

123…………(3)

式中

:

w试样中猪胆酸含量

1———,%;

w试样中猪去氧胆酸含量

2———,%;

w试样中鹅去氧胆酸含量

3———,%。

试样中猪胆酸和猪去氧胆酸总量以质量分数w计数值以表示按式计算

',%,(4)。

w'=w+w

12…………(4)

式中

:

w试样中猪胆酸含量

1———,%;

w试样中猪去氧胆酸含量

2———,%。

测定结果用平行测定的算术平均值表示结果保留至小数点后一位

,。

7416精密度

...

在重复性条件下两次独立测定结果与其算术平均值的绝对差值含量大于或等于时不大于

,:10%,

该算术平均值的含量低于时不大于该算术平均值的

5%;10%,10%。

742高效液相色谱-示差折光法

..

7421原理

...

试样中的胆汁酸经提取液提取后经高效液相色谱反相柱法分离后示差折光检测外标法定量

,,,。

7422试剂或材料

...

74221甲醇色谱纯

....:。

74222乙腈色谱纯

....:。

6

GB73001301—2025

.

74223胆汁酸混合标准贮备溶液分别准确称取猪胆酸标准品号

....(1mg/mL):10mg(CAS:547-75-1,

纯度大于或等于猪去氧胆酸标准品号纯度大于或等于鹅去氧胆酸标准品

99%)、(CAS:83-49-8,97.3%)、

号纯度大于或等于准确至于容量瓶中用甲醇溶解

(CAS:74-25-9,99%)(0.01mg),10mL,(7.4.2.2.1),

混匀

。

74224胆汁酸混合标准系列溶液准确吸取适量胆汁酸混合标准贮备溶液于容

....:(7.4.2.2.3)50mL

量瓶中用甲醇稀释并定容混匀配制成质量浓度分别为

,(7.4.2.2.1),,20μg/mL、50μg/mL、100μg/mL、

和标准系列溶液临用现配

200μg/mL500μg/mL,。

74225微孔滤膜孔径有机系

....:0.45μm,。

7423仪器设备

...

74231高效液相色谱仪配示差折光检测器

....:。

74232超声波振荡器

....。

74233分析天平精度为和

....:0.1mg0.01mg。

74234计

....pH。

7424试验步骤

...

74241试样溶液的制备

....

平行做两份试验称取试样准确至于容量瓶中加流动相

。100mg(0.0001g)100mL,[7.4.2.4.2

约超声提取取出冷至室温用流动相定容摇匀溶液经微孔滤膜

b)]70mL,30min,,,[7.4.2.4.2b)],,

过滤待测

(7.4.2.2.5),。

74242高效液相色谱参考条件

....

高效液相色谱参考条件如下

:

色谱柱柱长内径粒径或者性能相当者

a):C18,250mm,4.6mm,5μm,;

流动相甲醇乙腈水用磷酸调至

b):(7.4.2.2.1)+(7.4.2.2.2)+=110+100+90,pH2.6±0.2;

流速

c):1.0mL/min;

检测器示差折光检测器

d):;

检测池温度

e):40℃;

柱温

f):40℃;

进样量

g):20μL。

74243测定

....

在仪器最佳工作条件下将混合标准系列溶液和试样溶液注入液相色谱仪猪胆酸猪去氧胆酸和