SN∕T 4675.10-2016 出口葡萄酒中赭由霉毒素A的测定 液相色谱-质谱∕质谱法

出口葡萄酒中赭曲霉毒素A的测定I——SN/T4675.2出口葡萄酒中2,3-丁二醇的测定气相色谱法；本部分为SN/T4675的第10部分。SN/T4675.10—20161出口葡萄酒中赭曲霉毒素A的测定SN/T4675的本部分规定了葡萄酒中赭曲霉毒素A的液相色谱-质谱/质谱检测方法。本部分适用于葡萄酒中赭曲霉毒素A的检测。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法样品采用缓冲溶液稀释后，经氢氧化钠溶液调节试样至中性，再经免疫亲和柱净化，最后由液相色4试剂和材料除非另有说明，所有试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。4.4碳酸氢钠。4.5氯化钠。4.6氢氧化钠。4.8乙腈溶液(50%):移取乙腈(4.2)100mL,用水稀释至200mL。4.9乙酸溶液(0.1%):移取乙酸(4.3)1.0mL,用水稀释至1L。4.10缓冲溶液：准确称取10g碳酸氢钠(4.4)和75g氯化钠(4.5),用水溶解并定容至500mL。4.11氢氧化钠溶液(2%):准确称取20g氢氧化钠(4.6),用水溶解并定容至1L。4.12乙酸铵溶液(0.2mol/L):称取15.4g乙酸铵固体(4.7),用水溶解并定容至1L。4.13乙酸甲醇溶液(2%):移取乙酸(4.3)2.0mL,用甲醇(4.1)稀释至100mL。4.14标准物质：赭曲霉毒素A(OchratoxinA,OTACAS编号：303-47-9):10.01mg/L,存储条件及有效期参照标准物质证书。4.15标准中间液(200μg/L):移取适量体积的赭曲霉毒素A(4.14)于10mL容量瓶中，用乙腈(4.8)定容至刻度线。该溶液在4℃下避光保存，有效期一个月。4.16标准工作溶液：分别准确移取适量标准中间液(4.15)于10mL容量瓶中，并用乙腈溶液(4.9)稀2SN/T4675.10—20163表1液相色谱的梯度洗脱程序时间/minA,甲醇/%B,0.1%乙酸水溶液/%080802.009556.009556.50807.0080d)柱温：30℃;a)离子化模式：电喷雾电离(ESI-)负离子模式；b)质谱扫描方式：多反应监测(MRM):c)其他参考质谱条件参见附录A。6.5液相色谱-质谱/质谱测定被测组分选择1个母离子，2个子离子，在相同的试验条件下，样品中待测物质的保留时间与标准溶液中对应的保留时间偏差在±2.5%之内：且样品中各组分定性离子的相对丰度与浓度接近的标准溶液中对应的定性离子的相对丰度进行比较，若偏差不超过表2规定的范围，则可判定样品中存在对应的待测物。表2定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差相对离子丰度>50%>20%～50%>10%～20%允许的相对偏差士20%士30%士50%依次测定标准系列工作液，绘制峰面积对标准溶液浓度的标准工作曲线，用标准曲线对样品进行定量，样品溶液中赭曲霉毒素A的响应值均应在仪器测定的线性范围内，超过线性范围的稀释后再进样。在上述色谱条件和质谱条件下，赭曲霉毒素A的参考保留时间及标准品多反应监测(MRM)色谱图参见图B.1。除不加试样外，均按上述操作步骤进行。7结果的计算和表述7.1采用外标法定量，按式(1)计算被测物的含量：4 X——试样中被测组分残留量，单位为微克每升(μg/L);c——从标准工作曲线得到的被测组分溶液浓度，单位为微克每升(μg/L);V₁——样液最终定容体积，单位为毫升(mL);V₂——最终样液所代表的试样体积，单位为毫升(mL)。7.2结果需扣除空白值。8定量限和回收率8.1定量限本方法中赭曲霉毒素A的定量限为0.20μg/L。8.2回收率与精密度不同基质中赭曲霉毒素A在不同添加水平下的回收率与精密度试验数据见表3。表3不同基质在不同添加水平下的回收率与精密度试验数据表SN/T4675.10—20165(资料性附录)质谱参考参数¹质谱参考参数：a)ESI负离子模式；多反应监测(MRM);b)电喷雾电压：-3500V;c)离子源温度：450℃;d)雾化气压力：40Arb:e)辅助气压力：15Arb:f)碰撞气压力：1.5Arb;g)监测离子对、套管透镜、碰撞电压见表A.1表A.1赭曲霉毒素A保留时间、定性定量离子对及套管透镜、碰撞能量V1)非商业性声明：附录A所列参考质谱条件是在ThermoScientific的TSQQuantumUltra型液质联用仪上完成6SN/T4675.10—2016赭曲霉毒素A标准物质的多反应监测(MRM)色谱图见图B.1～图B.3。RT:4.15AA:35779SN:1148SN:114890806040RT:4.63AA:330AA:330SN:37204.635.535.976.667.367.80565.535.976.667.367.80567t/min3.103.5344图B.1m/z402>m/z211色谱图(1μg/L)RT.414SN:9259080604020RT:5.65AART:5.65AA:372AA:1501AA:1501SNI:384.7652.713.2237.414.7652.713.2237.416.6800.556