ISO 251842026 分子生物标志物分析-核苷酸测序-验证的下一代序列(VNG)标准立项发展报告

分子生物标志物分析-核苷酸测序-验证的下一代序列(VNGS)标准立项发展报告StandardizationDevelopmentReport:MolecularBiomarkerAnalysis—NucleotideSequencing—VerifiedNextGenerationSequences(VNGS)摘要随着高通量测序技术（NextGenerationSequencing,NGS）在临床诊断、精准医疗、法医学鉴定及生物制品质量控制等领域的广泛深入应用，测序数据的准确性与可靠性已成为制约行业发展的关键瓶颈。国际标准化组织（ISO）于2026年4月正式发布ISO25184:2026《分子生物标志物分析-核苷酸测序-验证的下一代序列(VNGS)》标准，该标准由ISO于技术层面的权威机构主导制定，旨在为基于NGS平台产生的核苷酸序列数据提供统一的验证框架、质量评估准则和规范化报告要求。本报告系统梳理了该标准的立项背景、技术指标体系、核心内容框架及行业应用前景，重点阐述了标准对解决当前测序数据"不可比、不可溯、不可信"问题的关键作用。标准确立了VNGS的定义规范、验证流程、性能参数要求和数据质量管理体系，为全球范围内分子诊断实验室、生物医药企业及监管机构提供了统一的技术依据。该标准的发布标志着分子生物标志物分析领域从"数据产出导向"向"数据质量导向"的重要转变，对推动精准医学的标准化进程具有里程碑意义。关键词：分子生物标志物；核苷酸测序；下一代测序；标准验证；数据质量；ISO25184；生物信息学Keywords:MolecularBiomarker;NucleotideSequencing;NextGenerationSequencing;StandardVerification;DataQuality;ISO25184;Bioinformatics一、引言1.1标准立项背景分子生物标志物作为反映生物学过程、病理状态或药物响应的可测量指标，在现代医学研究和临床实践中发挥着不可替代的作用。随着人类基因组计划的完成和高通量测序技术的迅猛发展，基于核苷酸序列的分子生物标志物检测已成为肿瘤精准诊疗、遗传病筛查、感染性疾病病原鉴定及法医学个体识别等领域的核心技术手段。然而，下一代测序技术的高速发展也带来了严峻的标准化挑战。不同测序平台（如Illumina、IonTorrent、华大智造等）在测序原理、读长特性、错误模式和通量规模上存在显著差异；不同实验室在文库构建、目标区域富集、生物信息学分析流程等方面缺乏统一规范；VCF（VariantCallFormat）等数据格式的变通使用和质量评分体系的不一致，导致跨平台、跨实验室、跨批次的测序结果难以直接比较和有效整合。这种"数据孤岛"现象严重制约了分子生物标志物研究成果的临床转化和监管认可。1.2标准制定的紧迫性根据国际医学检验领域质量管理的总体要求，临床实验室的检测体系需要通过ISO15189认可，检测方法的性能验证需参照ISO/IEC17025的相关理念。然而，针对NGS测序数据的生成、验证和报告环节，此前尚缺乏专门针对"已验证序列"层面的国际共识标准。各国监管机构（如美国FDA、欧洲EMA、中国NMPA）虽然先后发布了NGS生物标志物检测的相关指导原则，但各机构间的技术要求仍存在明显差异，难以形成全球统一的互认体系。在此背景下，ISO组织汇聚全球分子诊断领域专家力量，历经多轮草案讨论和意见征集，最终于2026年4月发布了ISO25184:2026国际标准，填补了分子生物标志物分析领域核苷酸测序验证标准的国际空白。二、标准概述2.1标准基本信息|项目|内容||------|------||标准编号|ISO25184:2026||标准全称|分子生物标志物分析-核苷酸测序-验证的下一代序列(VNGS)||英文名称|Molecularbiomarkeranalysis—Nucleotidesequencing—Verifiednextgenerationsequences(VNGS)||发布机构|国际标准化组织（ISO）||ICS分类号|生物学、植物学、动物学||发布日期|2026年4月2日||标准状态|现行||标准语言|英语||版本说明|电子版加密PDF，约1分钟可下载，有水印，需安装FileOpen插件，电脑需联网，限制累计3台电脑共打印5次||国际售价|808.0元（瑞士法郎计价模式折算）|2.2标准适用范围三、标准核心技术内容3.1VNGS的定义框架ISO25184:2026首次在ISO标准层面系统定义了"验证的下一代序列"（VerifiedNextGenerationSequences,VNGS）这一术语。VNGS是指在标准化的实验流程和生物信息学分析条件下，经过多重技术手段（如正交平台验证、Sanger测序复核、独立生物信息学流程交叉确认等）验证，并满足既定质量阈值要求的NGS测序序列。这一概念框架的确立，为测序数据设定了一个明确的"质量准入线"，使得"已验证"从一个模糊的定性概念演变为具有可操作性的技术指标集合。3.2测序数据质量的标准化指标体系标准确立了一套涵盖全测序流程的多层级质量指标体系：-文库质量评估：针对文库浓度、片段分布范围、接头污染率等关键参数设定了最低质量要求和推荐最佳实践值，确保进入测序环节的文库具有可接受的均一性和代表性。-测序过程质量控制：包括簇密度范围、Q30碱基质量分数比例、reads比对率、重复率及链特异性等指标的归一化计算方法。标准推荐各实验室根据平台特性建立自身的质量控制阈值体系。-变异识别与注释的质量评定：针对单核苷酸变异（SNV）、小片段插入缺失（InDel）以及拷贝数变异（CNV）的检出灵敏度、特异性、阳性预测值等技术指标设定了统一的性能评估框架。-测序深度的标准化表达：明确了均一性（uniformity）的计算方式和最低要求，以及不同应用场景（如液体活检低频突变检测vs.胚系变异分析）下的深度要求。3.3序列验证的技术要求标准的重点之一在于定义了VNGS的验证技术方案。标准推荐了以下验证路径：1.正交平台验证：当目标序列变异在原始NGS平台上被检出后，建议使用独立技术原理的测序平台或基因分型方法进行复核确认。2.生物信息学独立验证：推荐使用至少两种具有不同算法核心的生物信息学分析流程对原始数据进行独立分析，结果一致性在既定阈值以上方可认定为VNGS。3.参考物质验证：使用国际认可的参考物质（如基因分型明确的标准品细胞系DNA、合成突变梯度标准品等）作为平行对照，验证整个工作流程的系统准确度。3.4报告要求标准规范了VNGS数据的报告内容与格式框架，要求报告至少包含：样本唯一标识符及其与原始生物样本的可追溯对应关系、测序平台及试剂版本信息、文库制备方法、测序批次的总体质量统计（含reads总数、平均深度、Q30比例等）、变异识别的详细参数（每个变异位点的深度、等位基因频率、质量评分）、验证实验的方法及结论、分析局限性和不确定性声明。这一规范化要求极大增强了不同实验室间报告的可比性。四、标准的意义与行业影响4.1对临床分子诊断的规范化作用ISO25184:2026为临床实验室建立NGS检测项目的性能验证体系提供了全球统一的参照基准。按照本标准的指引，临床实验室在进行肿瘤靶向测序、遗传病Panel测序、无创产前筛查（NIPT）等检测项目时，能够明确界定"哪些序列数据可以被认定为已验证的高可信度序列"，从而有效减少假阳性和假阴性结果导致的误诊风险。在中国，随着NGS检测项目纳入临床检验项目管理体系的进程加快，本标准为国内实验室的性能确认和日常质控提供了重要的国际参照。4.2对精准医学数据共享的促进当前，大规模人群基因组计划（如"中国十万人基因组计划"、英国UKBiobank、美国AllofUs等）和肿瘤精准医学数据库建设对跨中心测序数据的可互操作性提出了极高要求。ISO25184:2026所确立的统一术语体系、质量度量和验证标准，使得不同来源的测序数据可以按照"已验证"统一标准进行筛选和整合，大幅提升了多中心数据汇交的可靠性和可比性。4.3对生物医药产业研发的支持在药物伴随诊断（CDx）开发和新药靶点发现领域，可靠的生物标志物数据是监管决策的科学基础。本标准为药物研发企业提供了与全球监管预期一致的技术规范，有助于减少研发过程中因测序数据标准不一致导致的重复实验成本，缩短药物研发的转化周期。4.4对全球贸易和实验室互认的支撑在依从ISO15189医学实验室质量体系和ISO/IEC17025检测实验室能力认可体系的框架下，本标准的实施为各认可机构评估NGS检测实验室的技术能力提供了具体的技术准则，有力促进了跨国实验室间的结果互认。五、主要参与制定单位介绍5.1国际标准化组织（ISO）国际标准化组织（InternationalOrganizationforStandardization,ISO）成立于1947年，总部位于瑞士日内瓦，是全球最大的非政府国际标准化机构。ISO由来自170多个国家的国家标准机构（NationalStandardsBodies）组成，截至目前已发布超过25,000项国际标准，涵盖了几乎所有技术领域。中国是ISO的常任理事国，中国国家标准化管理委员会（SAC）代表中国参与ISO的各项活动。ISO25184:2026由ISO下设的生物学标准化技术委员会体系下的相关工作组牵头制定。在标准制定过程中，来自各国国家标准机构推荐的领域专家、临床分子诊断实验室代表、测序设备制造商、生物信息学算法开发团队及监管机构代表等共同参与了技术内容的研讨与审核。在中国方面，中国合格评定国家认可委员会（CNAS）和中国标准化研究院的相关专家也积极参与了标准的意见反馈和适用性评估工作，确保标准内容能够兼容中国NGS临床检测实验室的实际应用需求。5.2参与标准制定的中国技术力量在中国，全国生化检测标准化技术委员会（SAC/TC387）等对口技术组织密切关注ISO25184的制定进程。国内多家NGS检测龙头企业头部临床检验所及第三方医学检验实验室也在标准草案的技术验证和现场确认阶段提供了重要的实践数据和案例反馈，为中国在该国际标准中的话语权提供了扎实的技术支撑。六、结论与展望ISO25184:2026的发布是国际分子生物标志物检测标准化进程中的重要里程碑。该标准首次在ISO层面完整定义了"验证的下一代序列（VNGS）"技术概念，为NGS测序数据的生成、质量控制、序列验证和报告规范构建了系统的国际共识框架。通过确立统一的质量度量指标体系和性能验证要求，该标准有效提升了全球范围内NGS检测结果的可靠性、可比性和可追溯性，为精准医学的规范化发展奠定了坚实的技术基础。报告撰写日期：2026年5月报告信息来源：ISO官方发布信息及标准化行业公开资料参考文献[1]ISO25184:2026,Molecularbiomarkeranalysis—Nucleotidesequencing—Verifiednextgenerationsequences(VNGS),InternationalOrganizationforStandardization,2026.[2]国家药品监督管理局.《基于高通量测序技