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文档简介

医学细胞生物学实验细胞生物学与遗传学教研室

第二次实验Ⅰ细胞内酸性蛋白和碱性蛋白的原位显示Ⅱ细胞内DNA和RNA的原位显示

[实验目的]1.掌握酸、碱性蛋白以及DNA和RNA在细胞内的分布情况；2.了解酸、碱性蛋白以及DNA和RNA显色反应的原理和方法。[实验原理]由于不同蛋白质分子所带酸性基团和碱性基团数量不同，生理条件下，整个蛋白质带负电荷多则为酸性蛋白，带正电荷多则为碱性蛋白。可用不同pH值的固绿染色，即可显示细胞内酸性蛋白或碱性蛋白。核酸的存在会影响实验结果用三氯醋酸处理

甲基绿和派洛宁是互不混淆、互不影响的两种染色剂，由于其自身分子结构的特点，它们可与两种聚合程度不同的核酸竞争性结合，从而同时显示细胞内DNA和RNA的分布部位。[实验用品]95%乙醇三氯醋酸甲基绿-派洛宁

0.1%酸性固绿

0.1%碱性固绿[操作流程]

暴露胸腔氯仿麻醉取心脏血晾干

制血涂片固定

20min洗涤

90℃三氯醋酸95%乙醇，5-10min2张1张

(3张)0.1%酸性固绿

5min0.1%碱性固绿

45min

晾干镜检洗涤晾干洗涤甲基绿-派洛宁10min染色洗涤>1min两人一组，每组制3张血涂片其中只有2张血涂片需经过三氯醋酸处理（为什么？）[注意事项]

[结果观察]酸性蛋白碱性蛋白DNA和RNA的显示请回答细胞化学法在本次实验中的应用。通过本次实验学到哪些基本操作技能？请描述本次实验的显微观察结果。[作业]

评价本次实验的得失本次实验需要巩固的概念细胞化学法

本次实验需要掌握的实验技能

1.血涂片制作方法

2.染色的规范操作方法

3.洗涤方法（流水冲洗）

4.

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