义翘神州TR-FRET激酶检测试剂盒助力高通量药物筛选

义翘神州TR-FRET激酶检测试剂盒助力高通量药物筛选如何从海量的药物序列或结构中快速找出有潜力的候选物，是创新药开发面临的挑战之一。高通量药物筛选技术（HighThroughputScreening,HTS）以分子和细胞水平的实验方法为基础，通过自动化设备和生物化学检测方法，在短时间内筛选数以千计、万计的样品，有助于提高研发效率。该技术可分为荧光分析法、放射性法、化学发光法等，其中荧光分析法价格相对便宜、无放射性标记、安全性好。时间分辨荧光共振能量转移（TR-FRET）技术是一种高通量、稳定且高效的HTS技术，已广泛用于激酶抑制剂筛选、蛋白互作研究及抗体开发领域。义翘神州开发了一系列即用型TR-FRET激酶检测试剂盒，具有简单快速、特异性高、灵敏度高、重复性好等优势，可用于多种激酶检测，支持研究人员快速、稳定地开展高通量药物筛选工作。一、TR-FRET的优势时间分辨荧光共振能量转移（TR-FRET）属于荧光检测技术，结合了时间分辨荧光（TRF）与荧光共振能量转移（FRET）。其原理是供体和受体荧光分子在空间上足够接近（通常在10纳米内），且供体的发射光谱与受体的吸收光谱间存在充分重叠。当供体被脉冲光源激发后，若目标分子发生结合，供体将能量转移给受体，产生665nm的受体荧光信号。通过微孔读板仪在激发一段时间后，分别采集620nm（供体）和665nm（受体）处的荧光信号，其比值（665nm/620nm）可定量反应分子的结合程度。TR-FRET的供体通常为镧系元素：铕（Eu）或铽（Tb），它们以螯合物或穴状化合物的形式存在，具有较长的荧光寿命（毫秒级），可有效消除短寿命的背景干扰。在光谱上，受体染料必须与供体匹配，常用的受体是发红光的染料，如XL665、别藻蓝蛋白（APC）、CyDye™、AlexaFluor647和d2。铽（Tb）有多个发射峰，也可与绿色荧光受体配对，如绿色荧光蛋白GFP。TR-FRET通过延迟检测长寿命的荧光信号，降低了背景干扰和信噪比，适用于高通量筛选。其均相“免洗”模式无需多次孵育和洗涤步骤，大幅简化了实验流程，缩短检测时间及样本和试剂的使用量。我们从检测模式、灵敏度、背景信号、通量等维度，对TR-FRET、ELISA、MSD电化学发光技术、AlphaLISA均相发光分析进行了对比，详见下表。技术方法TR-FRETELISAMSDAlphaLISA检测模式均相非均相（需洗涤）非均相（需洗涤）均相灵敏度动态范围宽（3-5个数量级）动态范围通常2-3个数量级，易受基质干扰动态范围宽（4-5个数量级）动态范围宽（3-5个数量级）背景信号低高中等低通量高通量，96/384/1536孔96孔，步骤多可做384孔，高通量受限高通量，但微珠成本高样本细胞裂解液、血清、培养上清等细胞裂解液、血清、培养上清等细胞裂解液、血清、培养上清等细胞裂解液、血清、培养上清等配套设备酶标仪（带有TR-FRET模块）酶标仪MSD成像仪酶标仪（带有AlphaLISA模块）二、TR-FRET的应用案例TR-FRET因操作简便及通量高，广泛应用于小分子抑制剂筛选、激酶活性检测、蛋白相互作用、抗体筛选等多种研究场景。单克隆抗体药物开发高度依赖于抗体-抗原的结合特性的快速、准确评估，如亲和力、表位特异性、竞争关系等。TR-FRET具有均相、免洗、高灵敏度优势，正在成为抗体筛选与功能验证的高通量技术平台。Greenway等人建立了基于竞争TR-FRET的抗体筛选方法：供体是Tb标记的抗体，受体是AF488标记的Fab片段，两者靠近时形成稳定的FRET信号。当体系中加入待测抗体并竞争结合抗原时，FRET信号随之下降，从而定量评估抗体结合能力与亲和力。小分子抑制剂是靶向治疗和癌症药物开发的重要组成部分。Aromokeye等人成功建立了以TR-FRET为基础的高通量筛选体系，用于鉴定抑制粘着斑激酶（FAK）和黏着斑衔接蛋白Paxillin之间相互作用的小分子化合物。该研究以Tb标记的抗体识别FAK蛋白的FAT结构域，并以biotin-PEG-1907肽模拟Paxillin，通过SA-XL665桥接产生FRET信号。当竞争性小分子结合FAT结构域并抑制其与肽段互作时，FRET信号相应减弱。该体系经优化后适用于384孔板筛选，表现出良好的稳定性和可靠性。研究人员对31,636个化合物进行了初筛，获得240个hits，随后通过反筛（counterscreen）和SPR等实验进一步验证，发现4个小分子可有效抑制FAK与Paxillin的相互作用。TR-FRET通过夹心免疫法用于激酶活性检测，主要包括两个操作步骤：首先激酶在ATP存在下对特异性底物进行磷酸化，随后加入含有EDTA（用于终止反应）的检测混合液。当供体和受体分别结合到磷酸化底物及其末端的生物素上时，两者被拉近至足够近的距离，从而在激发后发生荧光共振能量转移，产生TR-FRET信号。TR-FRET适合高通量药物筛选（HTS），是开展大规模激酶抑制剂发现项目的理想平台。义翘神州提供多种用于激酶检测的TR-FRET试剂盒，覆盖酪氨酸激酶（TKs）、丝氨酸/苏氨酸激酶（STKs）、细胞周期蛋白依赖性激酶（CDKs）等多个激酶家族。这些试剂盒具有操作简单快速、特异性高、灵敏度好及重复性强的特点，支持研究人员快速、稳定地开展高通量药物筛选工作。此外，我们还提供高活性高纯度的重组激酶及其他必要的工具，以支持您的激酶研究工作。SwiftFluo®TR-FRET系列激酶检测试剂盒货号名称适用范围价格（1000Tests）SFKA001TKsKinaseKit60+TK9280元SFKA002STKKinaseKit150+STK10780元SFKA003STKKinaseKit-S1Substrate50+STK9280元SFKA004STKKinaseKit-S2Substrate30+STK9280元SFKA005STKKinaseKit-S2Substrate50+STK9280元SFKA006CDKKinaseKit-Rb（s780）SubstrateCDK19280元SFKA007CDKKinaseKit-ATF2（T71）SubstrateCDK1