CN119403562A Ptx3表达调控剂；类风湿性关节炎、自身免疫疾病所伴随的血管炎或皮肤硬化的预防药或治疗药或它们的改善方法 （Dexon制药株式会社）

2024.12.12PCT/JP2023/0216412023.06.12WO2023/248845JA2023.12.28疫疾病所伴随的血管炎或皮肤硬化的预防药或因作为靶基因的miRNA，PTX3的表达调控剂可使用来自微粒的miRNA进行PTX3的表达调控；类风身免疫疾病所伴随的血管炎或皮肤硬化的改善2所述微粒包含以与PTX3的表达相关的基因作为靶基因的mi3.根据权利要求1所述的PTX3，其包含hsa_miR_224_5p、has_m655_3p中的至少1种作为所述以与PTX3的表达相关的基因4.根据权利要求1所述的PTX3表达调控剂，其中所述以与PTX3的表达相关的基因作为靶基因的miRNA至少包含hsa_miR_25.根据权利要求1所述的PTX3表达调控剂，其中所述以与PTX3的表达相关的基因作为靶基因的miRNA包含hsa_miR_224_5p和hsa_miR_66.根据权利要求1所述的PTX3表达调控剂，其中所述微粒以高于来自牙髓的干细胞的培养上清的浓度包含所述以与PTX3的表达相关的基因作为靶基因的m7.根据权利要求1所述的PTX3表达调控剂，其中所述微粒为由来自牙髓的干细胞的培所述微粒不含从所述来自牙髓的干细胞的培养上清中去除了所述外泌体后的9.根据权利要求8所述的类风湿性关节炎、自身免疫疾病所伴随的血管炎或皮肤硬化免疫疾病所伴随的血管炎或皮肤硬化的预防药3[0012]本发明所要解决的课题在于提供新型的PTX3表达调控剂，其可使用来自微粒的4[0019][3]根据[1]所述的PTX3，其包含hsa_miR_224_5p、h655_3p中的至少1种作为以与PTX3的表达相关的基因的miRNA包含hsa_miR_224_5p[0025][8]类风湿性关节炎、自身免疫疾病所伴随的血管炎或皮肤硬化的预防药或治疗[0030][图1]图1是显示以与PTX3的表达相关的基因为靶且在由来自牙髓的干细胞的培[0031][图2]图2是显示以与TSP1的表达相关的基因为靶且在由来自牙髓的干细胞的培5TSP_1表达调控剂的优选方案的情况下，本发明的PTX3表达调控剂的优选方案的说明也适[0042]血管炎有时根据产生主要炎症的血管的直径来分类。在6[0052]显微镜下多血管炎(MPA)是以小血管为主体的坏死性血管炎，几乎没有免疫复合[0054]将显示含有冷球蛋白血症性血管炎(CG)的免疫复合物性血管炎综合征的患者组7[0070]皮肤的纤维化是指在皮肤或内脏中胶原纤维(胶原蛋白)等被称为细胞外基质的[0074]本发明的PTX3表达调控剂即使在这些皮肤硬化中也优选至少用于改善真皮的硬病和局限性硬皮病。[0079]来源于来自牙髓的干细胞等的培养上清的微粒可以以包含在培养上清中的状态8[0085]需要说明的是，hsa_miR_224_5p等的本说明书中记载的miRNA的序列与登录号相多核苷酸，其为由与各miRNA(例如hsa_miR_224_5p)的碱基序列具有同一性的碱基序列构序列彼此适当地比对时的同一的程度，意指上述序列间的氨基酸的正确的一致的出现率[0092]因此，以与PTX3的表达相关的基因作为靶基因的miRNA(已知有hsa_miR_224_5p、[0093]需要说明的是，miR_224的表达降低经由TGF_β/Smad通路的激活促进急性冠状动9[0094]在研究lncRNAAK087124和miR_224_5p在动脉硬化病态中的作用时，与正常小鼠制PTEN，以抑制凋亡和炎症反应(ArchivesofBiochemistryandBiophysics,(2021)miRNA的情况下，优选作为与PTX3的表达相关的基因的表达调控剂发挥功能。微粒优选为PTX3表达抑制剂。[0097]微粒优选以使用IMOTA分析得到的读取计数的Log选以4.0以上包含、特别优选以6.0以上包含以与PTX3的表达相关的基因作为靶基因的miRNA中的至少1种。微粒优选以使用IMOTA分析得到的读取计数的Log2Ratio计均为4.0以[0098]微粒与由来自脂肪的干细胞的培养上清得到的外泌体或由来自脐带的干细胞的[0101]血小板反应蛋白1作为血管新生抑制因子而广为人知。miR_18和miR_19调节年龄[0102]血小板反应蛋白1(TSP1)是miR_221的靶标。miR_221显著抑制心脏的TSP1和p_[0103]因此，以与血小板反应蛋白1的表达相关的基因作为靶基因的miRNA(下述TSP1相[0106]hsa_let_7f_5p、hsa_let_7g_5p、hsa_let_7i_5p、hsa_miR_101_3p、hsa_miR_miR_143_3p、[0121]若使let_7a和let_7b过度表达，则会抑制由oxLDL引起的内皮细胞的凋亡、NO缺7b对由氧化低密度脂蛋白引起的内皮细胞损伤具有保护作用(Plosone(2014)9,(9):含经由let_7/Argonaute1(AGO1)/VEGF信号传导通路而有助于血管新生的低氧hADSC_EV[0126]miR_143_3p模拟物进一步改善冠状动脉性心脏病(CHD)兔的血液中的TC、TG和成员)等转录因子的网络为协同靶标，促进平滑肌的分化，抑制增殖(Nature(2009)460,[0130]miR_221显示显著的心肌保护和抗凋亡特性，提高心肌细胞移植和心脏再生的效以高水平表达miR_221/222，这一事实提示该miRNA簇在内皮(病态)生理中的重要作用[0133]经MiR_30a_5p_ago处理的ApoE_/_小鼠使大动脉和大动脉基部的病变面积显著[0134]HPostC经由DNMT3b依赖性miR_30a的激活针对H/R损伤保护衰老心肌细胞的存[0135]本发明中，在微粒包含以与血小板反应蛋白1的表达相关的基因(优选TSP1基因)miR_30a_3p和hsa_miR_30a_5p中的至少1种，更优选至少包含hsa_miR_19a_3p、hsa_miR_[0137]微粒优选以使用IMOTA分析得到的读取计数的Log因作为靶基因的miRNA中的至少1种。微粒优选以使用IMOTA分析得到的读取计数的miR_221_3p。[0138]微粒与由来自脂肪的干细胞的培养上清得到的外泌体或由来自脐带的干细胞的[0139]在微粒为血小板反应蛋白1的表达抑制剂的情况下，优选可将任意的细胞内的血胞的微粒中的含量多的miRNA的特征在于与脑神经疾病或血管炎的治疗相关的微小RNA多，[0142]微粒优选包含2种以上的可调控与血管炎相关的蛋白和/或基因的表达的微小RNA[0144]微粒优选为选自外泌体(Exosome)、微小泡、膜颗粒、膜小泡、核外颗粒体[0151]已知外泌体被用于通过从某个细胞向其它细胞运输遗传信息而进行细胞与细胞[0155]本发明的表达调控剂的优选方案通过以如此大量或高浓度包含微粒，可将以与PTX3的表达相关的基因作为靶基因的miRNA或以与TSP_1的表达相关的基因作为靶基因的miRNA的量维持在高水平。[0180]用于本发明的来自牙髓的干细胞只要可实现目标处置即可，可以是天然的干细[0190]来自牙髓的干细胞等的培养上清是培养来自牙髓的干细胞而得到的培养液。例[0191]用于得到来自牙髓的干细胞的培养上清的来自牙髓的干细胞可通过常规方法筛的牙髓细胞中作为粘附性细胞或其传代细胞来筛选。在来自牙髓的干细胞的培养上清中，方案的典型实例是不含来自牙髓的干细胞而仅由来自牙髓的干细胞的培养上清构成的组[0193]本发明中使用的来自牙髓的干细胞的培养上清可包含来自乳牙牙髓的干细胞和[0194]用于得到培养上清的来自牙髓的干细胞的培养液中可使用基础培养基或在基础培养基中添加了血清等的培养基等。需要说明的是，作为基础培养基，除Dulbecco改良自牙髓的干细胞的种类适当进行来自牙髓的干细胞的[0198]本发明中用于调制外泌体等微粒的来自牙髓的干细胞的培养上清除了来自牙髓[0199]然而，可将用于调制外泌体的各种添加剂添加至来自牙髓的干细胞的培养上清或其离心处理物或它们的过滤处理物。例如可使用采用了各种柱的高效液相色谱(HPLC)。[0208]作为微粒的纯化方法，可使用日本特表2019_5248的形态；将微粒冷冻和/或干燥进行固化以制成制剂或填充至容器而成的形态等。作为容℃。用并活用以往作为产业废弃物等废弃的干细胞的培养液，降低干细胞培养液的废弃成本等。特别是在来自牙髓的干细胞的培养上清为来自人牙髓的干细胞的培养上清的情况下，用了来自牙髓的干细胞的培养上清或来源于其的微粒的组合物，使得修复医疗变为可能。包括对血管炎发病的对象给予有效量的本发明的PTX3表达调控剂或有效量的本发明的类情况下，更优选为对皮肤涂抹。例如，优选将本[0223]在使用浓度为2.0×109个/ml的来自牙髓的干细胞的培养上清的情况下，在小鼠[0225]对其它动物的每单位体重的给药量的优选范围可使用比例关系由对模型小鼠的代培养中添加胎牛血清(FBS)进行培养，对在传代培养中使用原代培养液进行培养而得的[0235]将乳牙牙髓干细胞的培养上清(100mL品从离心管的底部回收(约100μl)。蛋白浓度通过微量BSA蛋白测定试剂盒(Pierce，[0236]将包含由来自牙髓的干细胞的培养上清纯化的外泌体的组合物作为实施例1的表[0240]另外，用公知方法对所得到的实施例1的表达调控剂的成分进行分析。其结果得因此，得知与作为间充质干细胞的培养上清的有效成分的MCP_1和Siglec_9以及它们的类[0243]除了使用来自人脐带的干细胞代替乳牙牙髓干细胞以外，依据实施例1调制来自脐带的干细胞的培养上清，调制了包含由来自脐[0245]通过下一代测序(NGS)分析对实施例1的微粒组合物中所含的小RNA进行分析。通过NGS分析，鉴定了实施例1的微粒组合物(来自牙髓的干细胞的外泌体)中所含的1787个%72.354.986.03中的miRNA或mRNA、蛋白的相互作用或表达量进行研究的对话型多组学图谱(NucleicAcidsResearch,第46卷,IssueD1,4January2018,第D770_D775页,"IMOTA:aninteractivemulti_omicstissueatlasfortheanalysisofhumanmiRNA_target中的miRNA或mRNA、蛋白的相互作用或表达量进行研究的对话型多组学图谱(NucleicAcidsResearch,第46卷,IssueD1,4January2018,第D770_D775页,"IMOTA:aninteractivemulti_omicstissueatlasfortheanalysisofhumanmiRNA_target[0252]以与PTX3的表达相关的基因为靶标且在由来自牙髓