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一种基于微流控的高通量单细胞转录组测本发明公开了一种基于微流控的高通量单分区内通过单细胞分子标签实现单个分区内单法在减少实验操作步骤的同时减少cDNA产物的2KAPAHiFiHot_StartReadyMix和5.根据权利要求1所述的方法，其中所述反转录试剂34[0001]本发明涉及一种基于微流控的快速构建高通量单细胞转[0003]高通量单细胞转录组测序技术已经非常成熟，通过基于米的小孔，一张芯片可含有几万到几十万个微孔，材料常为琼脂糖或聚二甲基硅氧烷胞的浓度以及微球的浓度，例如使用细胞移液器或激光捕获、有限稀释法等方式分离稀释单独标记。个孔中加入不同的细胞标签，然后将均分到不同孔中的细胞混合均匀后再均分到新的孔[0006]（3）分割池技术：基于分割池连接的转录组测序（SplitPoolLigation_basedTranscriptomesequencing，SPLiT_seq该技术可以分类和追踪组织样本中不同类型的细胞。该方法能够在单细胞水平上可靠地追踪组织样本中的基因活性。该技术允许本领域技术人员在不分离单个细胞的情况下进行单细胞RNA测序。使用SPLiT_seq，就可以测量单个细胞的基因活性，即使组织样本中有数千种不同的细胞。SPLiT_seq基于“分散_混合”5而常规的实验流程往往需要在液滴内完成RNA反转录后进行液滴破乳和反转录产物收集，对传统的基于微流控的高通量单细胞转录组测序建库方法中的PCR试剂的成分进行了调整[0011]本发明在第一方面提供一种基于微流控的快速构建高通量单细胞转录组文库的62。KAPAHiFiHot_StartReadyMix和所述PCR试剂中各成分的含量分别为：3~500μl2×KAPAHiFiHot_Start在一些更优选的实施方案中，所述反转录试剂中各成分的含量分别为：1.3μl271.本发明提供了一种新的PCR试剂的配方，该试剂的配方经过[0022]2.利用本发明提供的新的PCR试剂的配对小鼠PBMC细胞和人PBMC细胞污染效率的比较结果。图中一个点代表一个细胞，其中绿点污染的双物种细胞。8本发明人通过反复研究，对PCR扩增中的PCR试剂的配方和含量进行筛选和优化， 表1所示。其中，货号SPS051108和货号SPS051308分别为包含4个反应和16个反应的引物试9ReadyMix，3.3μl反转录引物(墨卓生物科技（浙江）有限公司，货号SPS051108或SPS051308)，2.4μl预扩增引物(墨卓生物科技（浙江）有限公司，货号SPS051110或0.将芯片放置在芯片支架上4.将150_170μL液滴生成油加入到标记为E的杯口中；5.将硅胶垫片压在芯片杯口上方；[0038]对液滴进行破乳纯化：向液滴中加入适量1%十三氟辛醇（perfluorooctanol，[0043]实施例4：本发明提供的基于微流控的高通量单细胞转录组测序建库方法和基于

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