ABNT ISOTS 22456-2026《医疗保健产品灭菌-微生物学方法-生物制品和组织基产品生物负载测定和无菌试验实施指南》标准立项发展报告

ABNTISO/TS22456-2026《医疗保健产品灭菌——微生物学方法——生物制品和组织基产品生物负载测定和无菌试验实施指南》标准立项发展报告StandardizationDevelopmentReport:Sterilizationofhealthcareproducts—Microbiologicalmethods—Guidanceonconductingbioburdendeterminationsandtestsofsterilityforbiologicsandtissue-basedproducts摘要随着再生医学、细胞治疗和组织工程技术的迅猛发展，生物制品及组织基产品在临床应用中日益广泛。此类产品因其生物活性、细胞相容性和基质结构的特殊性，无法采用传统的最终灭菌工艺，通常需在无菌条件下制备，并依赖无菌加工和微生物学监测保障其安全性。然而，现行ISO11737系列标准主要针对传统医疗器材设计，对富含蛋白、脂质及细胞成分的生物制品和组织基产品，在生物负载测定与无菌试验的方法适用性、抑菌性消除、样品处理及结果判定等方面存在显著的技术空白。在此背景下，巴西技术标准协会（ABNT）等同采用了ISO/TS22456:2026技术规范，正式发布ABNTISO/TS22456-2026。本报告系统阐述了该标准的立项背景、编制原则、核心技术内容及行业影响。该标准针对生物制品和组织基产品基质复杂、微生物回收难、抑菌活性干扰大等技术难点，提供了方法选择、验证、实施及结果解释的全流程指南。标准的发布填补了国际标准化组织在生物制品灭菌验证领域的指南空白，对于规范产品质量控制、接轨国际监管要求、促进细胞与组织治疗产业发展具有重要意义。关键词：灭菌；生物负载；无菌试验；生物制品；组织基产品；微生物学方法Keywords:Sterilization;Bioburden;SterilityTest;Biologics;Tissue-basedProducts;MicrobiologicalMethods一、立项背景与意义1.1产业技术发展驱动标准更新全球生物医药产业正经历从传统化学药向生物制品、细胞治疗和组织工程产品转型的关键时期。据国际再生医学学会（TERMIS）统计，截至2025年底，全球已有超过60种细胞与基因治疗产品获得主要监管机构批准上市，另有逾2000项临床试验正在开展。组织工程皮肤、软骨、骨修复材料、角膜基质等组织基产品已从实验室研究走向规模化生产。人源和动物源组织经过脱细胞、灭菌和再细胞化等工艺处理后制成的医疗器械或植入物，其安全性和有效性评价面临独特挑战。这一产业态势对标准化工作提出了新的需求。生物制品和组织基产品既不同于传统医疗器械，也不同于化学药品。其共同特点是：含有生物大分子或活性细胞，对热、辐射和环氧乙烷等传统灭菌方式敏感；基质成分复杂，干扰微生物学检测；通常以无菌状态供应，必须通过无菌加工结合过程控制来保证产品无菌保证水平。然而，现行检测标准和法规指南在针对性和操作性方面存在供给不足的问题。1.2现行标准的局限与技术缺口ISO11737-1:2018《医疗保健产品灭菌——微生物学方法——第1部分：产品上微生物总数的测定》和ISO11737-2:2019《第2部分：无菌试验》是医疗器械灭菌验证领域使用最广泛的基础标准。两者共同构建了生物负载监测和最终产品无菌试验的方法框架。然而，这两项标准的设计初衷针对的是表面结构相对简单、材质均匀的传统医疗器械——如注射器、手术器械、植入物等。在应用于生物制品和组织基产品时，存在一系列难以回避的技术障碍：基质复杂性：组织基产品包含细胞外基质（ECM）、胶原蛋白、糖胺聚糖等生物大分子网络结构，微生物可能嵌入基质内部，常规洗脱和震荡方法难以将微生物有效分离。生物制品（如透明质酸钠凝胶、血小板-rich血浆衍生物等）的高粘度特性也影响膜过滤法的可操作性。抑菌活性干扰：许多生物制品本身含有抗菌成分（如银离子涂层组织、抗生素处理的同种异体移植物）或天然的抑菌活性（如部分生长因子、细胞因子具有间接抑菌效应）。残留的防腐剂、抗生素或其他具有抑菌作用的物质会抑制目标微生物在培养基中的生长，导致假阴性结果。样品量限制：细胞治疗产品和稀有组织来源的组织基产品往往单批次产量小、价值极高，无法提供足够数量的样品用于破坏性检验。如何在有限样本量条件下获得具有统计学意义的结果，是现行标准未能有效解决的问题。快速检测方法的需求：自体细胞治疗产品具有“床旁即时制备”的特征，传统14天无菌试验周期无法满足临床时效性要求。实时荧光定量PCR、ATP生物发光法等快速微生物学方法亟需在法规框架下获得认可。二、标准编制原则与技术路线2.1编制原则ABNTISO/TS22456-2026的编制遵循以下核心原则：协调一致性：该技术规范严格遵循ISO11737系列标准确立的总体框架和术语体系，是ISO11737在特定产品领域的应用指南和补充说明，而非替代性文件。标准在方法分类、结果计算和合格判定等方面与ISO11737-1和ISO11737-2保持充分协调。风险导向：标准引入基于风险的方法选择原则，要求制造商根据产品特性、预期用途、微生物污染风险等级等因素，论证所选择的检测方法和技术参数的合理性。风险分析结论应作为方法适用性论证文件的重要组成部分。技术中立性：标准不对特定商品化试剂盒或仪器设备进行推荐或排斥，而是以性能指标为导向，鼓励技术创新和替代方法的开发与验证。国际兼容性：标准在编写过程中参考了美国药典（USP）<71>无菌检查法、<1211>无菌加工无菌保证、欧洲药典（Ph.Eur.）2.6.1章节，以及日本药局方相关章节，力求与主要药典和国际监管要求保持一致。2.2技术路线标准编制过程中，工作组对全球范围内生物制品和组织基产品的微生物学检测现状进行了系统调研。调研对象涵盖欧洲、北美和亚太地区的主要生产企业、检测机构和监管机关。通过征集实际检测数据、组织实验室间比对研究，积累了涵盖脱细胞真皮基质、同种异体骨、软骨组织、细胞悬液、生物活性凝胶等典型产品类型的验证数据。以此为基础，对方法的灵敏度、精密度、回收率和耐用性进行统计分析，最终形成具有充分实验证据支持的技术建议。三、标准主要内容解析ABNTISO/TS22456-2026的技术内容涵盖以下几个核心模块：3.1范围界定与适用性分析标准开篇明确了其适用范围为生物制品和组织基产品的生物负载测定和无菌试验。通过附录A中的决策树和产品分类表，帮助使用者判断其产品是否属于该标准的范围，以及是否需要采用其推荐的特定处理程序。对于传统医疗器械，仍应直接应用ISO11737系列标准。3.2术语和定义除沿用ISO11139:2018《医疗保健产品灭菌——词汇》中的基础术语外，标准补充定义了“生物制品”、“组织基产品”、“抑菌活性”、“方法适用性”、“快速微生物学方法”等在该领域具有特定含义的术语，确保技术语言的准确性和一致性。3.3生物负载测定的方法选择与验证生物负载测定包括微生物的提取（洗脱）、转移和计数三个基本步骤。对于生物制品和组织基产品，每一步骤均存在方法适用性问题。标准针对不同类型产品推荐了差异化策略：对于液体类生物制品，推荐使用膜过滤法，但需考虑产品粘度对过滤效率的影响。标准建议通过适当稀释、调节pH或添加表面活性剂来改善过滤性能，并明确规定对过滤前后产品活性成分回收率的验证要求。对于固体组织类产品，推荐采用均质化处理和酶消化法相结合的微生物释放策略。标准在附录中给出了胶原酶、蛋白酶K等常用酶制剂的推荐浓度、处理时间和温度参数范围，以及酶处理对微生物活力影响的验证方法。在方法适用性验证方面，标准要求使用至少两种参考菌株（包括革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌、酵母菌和芽孢菌中具有代表性的菌株）进行人工污染回收试验。回收率低于50%时，应视为方法不适用，需重新优化参数。这一量化指标为方法开发和验收提供了明确的判断依据。3.4抑菌活性的消除与确认抑菌活性是影响生物制品和组织基产品微生物学检测结果准确性的最主要干扰因素。该标准专辟章节对抑菌活性的来源、检测方法和消除策略进行系统阐述：-来源分析：包括产品固有成分（如天然抗菌肽）、加工过程中引入的添加剂（如抗生素、防腐剂）、以及包装材料释放的抑菌物质-检测方法：推荐采用直接接种法比较产品处理液与对照培养基中指示微生物的生长情况，以量化抑菌活性强度-消除策略：包括稀释中和法（将样品稀释至抑菌活性阈值以下）、中和剂添加法（如使用聚山梨酯80、卵磷脂、组氨酸等）、以及联合处理法（稀释与中和剂组合使用）。标准要求中和剂本身应经过验证，证明其对微生物生长无毒性且能有效中和抑菌活性3.5无菌试验的专用指南在无菌试验方面，标准针对生物制品和组织基产品提供了以下特殊考量：对于含有防腐剂或抑菌成分的产品，标准强调在方法适用性试验中必须使用产品实际生产批次的样品，而非安慰剂或模拟样品。因为防腐剂的浓度和释放动力学在真实产品中与模拟样品可能存在差异。对于采用无菌加工工艺生产的产品，标准建议结合无菌过程模拟（mediafill）结果和产品无菌试验结果进行综合判定。当过程模拟验证充分且批生产记录审核合格时，允许减少产品无菌试验的样品数量。这一灵活机制在一定程度上缓解了宝贵生物制品检测样本有限的问题。对于具有临床紧迫性的自体细胞治疗产品，标准在附录中提供了快速微生物学检测方法的验证框架，包括与药典参考方法的等效性论证要求、检测限（LOD）和阳性判断时间的设定依据等。3.6统计分析原则生物负载数据的统计处理是科学评价产品微生物状况的基础。标准规定了对生物负载数据进行分布分析的方法，推荐使用泊松分布或负二项分布对数据进行拟合优度检验，以判断生物负载的分布特征。标准同时引入生物负载的置信上限（UCL）概念，要求在计算微生物污染水平时，报告95%置信区间，以反映检测结果的不确定度。这一要求与ISO11737-1:2018附录C中推荐的统计框架保持一致。3.7快速微生物学方法的替代策略针对传统培养法周期长、无法满足即时放行需求的现实问题，标准设置了“替代快速方法”的专门章节。在此框架下，允许企业在完成充分验证的前提下，采用基于核酸扩增、免疫学检测、代谢检测等原理的快速微生物学方法，用于在线过程控制和批次放行。验证要求包括与参比方法比较的灵敏度、特异性、阳性符合率和阴性符合率指标，以及该方法检出新出现的非培养微生物（VBNC状态）的能力评估。四、标准的行业影响与应用前景4.1填补标准空白，完善标准体系该标准的发布将ISO11737系列标准延伸至生物制品和组织基产品这一快速增长的新兴领域，填补了ISO标准体系中尚无针对此类产品的微生物学检测指南的技术空白。它与ISO11737-1和ISO11737-2形成互相衔接的配套体系—通用基础标准和特定产品应用指南互为补充，构建了更加完整的医疗保健产品灭菌验证标准系统。4.2促进国际贸易和技术交流采用国际标准有助于消除贸易技术壁垒。企业按照ABNTISO/TS22456-2026进行检测和验证，有助于其产品获得更广泛的国际认可。该标准的发布也为各国标准化机构（包括中国、欧盟成员国等）在制定本国的相应技术规范或指南性文件时提供了重要的技术参考蓝本。4.3推动检测技术进步标准对方法验证提出的一系列明确的、量化的性能指标要求，将激励检测技术向更灵敏、更快速、更自动化的方向发展。特别是对快速微生物学方法和替代技术的认可框架，为新型检测技术的市场准入提供了规范化的技术路径。五、主要起草单位介绍ABNTISO/TS22456-2026由巴西技术标准协会（AssociaçãoBrasileiradeNormasTécnicas,ABNT）作为ISO/TS22456:2026的等同采用标准发布。作为该标准在巴西的归口管理和发布机构，ABNT在标准的本地化应用中发挥了关键性的推动作用。ABNT成立于1940年，是巴西国家标准化组织（nationalstandardsbody,NSB），也是国际标准化组织（ISO）的创始成员之一。作为巴西唯一的全国性标准化机构，ABNT负责协调、制定和发布巴西国家标准（NormasBrasileiras,NBR），并代表巴西参与ISO、IEC等国际标准化组织的技术活动。经过八十余年的发展，ABNT已建立起覆盖工业、农业、服务业和社会治理各领域的完善的标准体系，在医疗器械、生物技术、健康产品等领域的标准化工作尤为活跃。在ABNTISO/TS22456-2026的立项和编制过程中，ABNT组织成立了专门的研究工作组，汇集了来自巴西国家卫生监督局（ANVISA）、圣保罗大学生物医学科学研究所、奥斯瓦尔多·克鲁兹基金会（Fiocruz）以及巴西本土生物制品生产企业（如Butantan研究所）的微生物学专家和监管事务专家。该工作组对该技术规范进行了系统的技术评审和本地化适用性评估，严格遵循ISO/TMB技术工作程序，最终于2026年7月正式