GBT 26350-2026 蝇类抗药性检测方法 家蝇生物测定法标准立项发展报告

StandardizationDevelopmentReport:BioassayMethodsforInsecticideResistanceDetectioninFlies-HouseflyBioassayMethod蝇类抗药性检测方法家蝇生物测定法标准立项发展报告摘要家蝇（*Muscadomestica*）是传播多种人类和动物传染病的重要媒介昆虫，其化学防治长期依赖拟除虫菊酯类、有机磷类等杀虫剂。然而，由于杀虫剂的长期大量使用，家蝇对各类杀虫剂的抗药性问题日益突出，已成为制约媒介生物有效控制和公共卫生安全的重要瓶颈。为科学监测和评估家蝇抗药性水平，规范统一检测技术方法，国家标准化管理委员会批准发布了国家标准GB/T26350-2026《蝇类抗药性检测方法家蝇生物测定法》。该标准由全国卫生有害生物防制标准化技术委员会组织制修订，将于2027年2月1日正式实施。本标准规定了家蝇对有机磷类、拟除虫菊酯类、氨基甲酸酯类等杀虫剂抗药性检测的生物测定方法和评价标准，适用于家蝇对常用杀虫剂抗药性的实验室检测与监测。本文从标准立项背景、编制原则、核心技术内容及其与国内外相关标准的对比等方面进行了系统阐述和分析。本标准的发布实施将为我国家蝇抗药性监测提供统一的技术依据，对于指导杀虫剂合理使用、延缓抗药性发展、保障公共卫生安全具有重要的现实意义和应用价值。关键词：家蝇；抗药性检测；生物测定法；国家标准；媒介生物控制；杀虫剂管理Keywords:housefly(Muscadomestica);insecticideresistancedetection;bioassaymethod;nationalstandard;vectorcontrol;insecticidemanagement1引言家蝇（*Muscadomestica*）隶属于双翅目（Diptera）蝇科（Muscidae），是分布最广泛、与人类生活关系最为密切的卫生害虫之一。家蝇具有极强的繁殖能力和活动能力，可机械性传播痢疾、霍乱、伤寒、副伤寒、脊髓灰质炎等多种消化道传染病病原体，也可传播结核病和某些寄生虫病，对人类健康构成严重威胁[1]。长期以来，化学防治一直是控制家蝇种群密度、预防蝇媒传染病暴发流行的主要手段之一。然而，化学杀虫剂的大规模持久应用不可避免地导致了家蝇抗药性的产生和发展。早在20世纪40年代，DDT的大量使用就曾导致家蝇在多个地区出现抗药性报道。时至今日，家蝇已对包括有机氯类、有机磷类、氨基甲酸酯类、拟除虫菊酯类在内的几乎所有主要杀虫剂类型产生了不同程度的抗药性[2-3]。家蝇抗药性问题不仅削弱了化学防治的效果，增加了防治成本，还可能导致杀虫剂使用量不断增大，进而加剧环境污染和食品残留风险。因此，建立科学、规范、统一的家蝇抗药性检测方法标准，对于指导杀虫剂的合理使用和轮换替代、有效延缓和管理抗药性发展具有重要的基础性支撑作用。生物测定法（bioassay）是目前国际通用的抗药性检测基本方法，其原理是通过测定杀虫剂对靶标生物的毒力或效力，以判别生物种群对药剂敏感性的变化程度。常用的生物测定法包括LD50（半数致死剂量）或LC50（半数致死浓度）测定法、诊断剂量法等。其中，诊断剂量法以敏感品系的LD50或LC50为基础制定区分剂量，能够在短时间内反映靶标种群的抗性状况，特别适用于基层疾控机构和虫媒防制机构的常规监测工作。GB/T26350-2026《蝇类抗药性检测方法家蝇生物测定法》正是在这一技术逻辑基础之上，结合我国媒介生物防制工作实际需求而制定的一项重要国家标准。2标准编制背景与立项必要性2.1标准信息概述本标准编号为GB/T26350-2026，名称为《蝇类抗药性检测方法家蝇生物测定法》，由中国国家标准管理机构于2026年7月2日发布，标准状态为未生效，将于2027年2月1日起正式实施[4]。该标准的分类号为医学科学和保健装置综合，由中国标准出版社出版发行（电子版/纸质版），采用中文编写。标准性质为推荐性国家标准（GB/T）。值得注意的是，本标准系对原GB/T26350-2010《蝇类抗药性检测方法家蝇生物测定法》的修订版本。原版标准自2011年首次实施以来，已应用十余年，在指导全国病媒生物监测网络开展家蝇抗药性监测工作中发挥了重要作用[5]。2.2立项背景本标准的修订立项主要基于以下几个方面的背景需求：第一，媒介生物防制工作形势变化的需要。近年来，随着全球气候变化、城市化进程加快和国际贸易与人员往来日益频繁，家蝇等媒介生物的分布格局、种群动态和传病风险发生了显著变化。2021年，国家卫生健康委印发《全国病媒生物监测方案（2021年修订版）》，对包括蝇类在内的病媒生物监测工作提出了更加细化和科学化的要求[6]。抗药性监测作为病媒生物监测体系的重要组成部分，亟需更加完善和先进的技术标准予以支撑。第二，抗药性治理策略不断深化的需要。世界卫生组织（WHO）于2012年正式发布《全球媒介生物控防策略（2012—2020）》及后续更新的《2021—2030年全球媒介生物防制路线图》，明确将媒介生物抗药性管理和监测列为全球虫媒传染病防控的优先行动领域[7]。在此框架下，推动抗药性监测方法标准化、数据可比化、经验共享化已成为国际共识。我国作为全球人口大国和公共卫生体系建设的重要参与者，有必要对接国际先进技术规范，持续优化国内标准体系。第三，杀虫剂产品结构和应用场景变化的需要。随着国家对于高毒、高风险农药的禁用限用政策不断推进，以及城乡卫生创建和爱国卫生运动对病媒生物防制质量要求的提高，当前卫生杀虫剂的产品结构、有效成分、剂型种类和应用场景已发生了明显变化。新烟碱类、苯基吡唑类、昆虫生长调节剂等新型杀虫剂品种日益增多，原有的抗药性检测标准在药剂种类覆盖面和检测方法细节上出现了更新需求。第四，标准技术内容亟待更新完善的需要。原GB/T26350-2010实施十余年来，在实验室操作规范、试虫品系选育、药剂配制精度、数据处理方法等方面积累了丰富的实践经验，一些方法学上的新进展和新认识也应当在标准中得到体现。同时，为保持标准与现行有效的相关国家标准、行业标准的协调性，部分技术用语和引用文件也需要加以更新。2.3编制原则本标准的编制遵循以下基本原则：1.科学性原则：以昆虫毒理学和抗药性遗传学理论为基础，充分吸收国内外最新研究成果和检测技术经验，确保检测方法的科学严谨和结果的可重复性。2.实用性原则：充分考虑各级疾病预防控制中心、虫媒防制研究机构和有害生物防制服务企业的实际检测条件和能力水平，在保证方法科学性的前提下，力求操作简便、成本合理、易于推广。3.协调性原则：注重与我国现行病媒生物抗药性检测相关国家标准、行业标准的技术衔接与内容协调，避免标准之间的交叉矛盾。4.规范性原则：严格按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》[8]的要求，确保标准文本的规范性和可操作性。3标准主要技术内容3.1范围与适用领域本标准规定了蝇类（特指家蝇）抗药性检测的生物测定方法，适用于家蝇对有机磷类、拟除虫菊酯类、氨基甲酸酯类等杀虫剂的抗药性检测与监测。同时也适用于以家蝇为模式试虫开展的杀虫剂药效评价与敏感基线测定工作。3.2规范性引用文件标准规范性引用了包括但不限于以下文件和标准的技术内容：GB/T26348《蚊虫抗药性检测方法生物测定法》（或最新相应版本）中的通用术语和检测原则；NY/T1154《农药室内生物测定试验准则杀虫剂》中有关的试虫饲养和药剂配制要求；以及《中华人民共和国药典》中有关药用杀虫剂质量标准的相应要求。此外还参考了WHO《昆虫抗药性检测技术导则》中关于诊断剂量法和生物测定法的操作规范[9]。3.3术语和定义标准对以下关键术语作了明确定义：-敏感品系（susceptiblestrain）：在实验室条件下长期饲养、未接触任何杀虫剂、对各类杀虫剂均表现正常的家蝇品系，用于确定杀虫剂对家蝇的敏感基线（baselinesusceptibility）。-诊断剂量（diagnosticdose）：依据敏感品系生物测定结果确定的，能够区分敏感个体和抗性个体的杀虫剂最低剂量（或浓度）。一般取敏感品系LC99的2倍剂量作为诊断剂量。-抗性倍数（resistanceratio,RR）：野外种群或待测种群的LD50（或LC50）与同一试验条件下敏感品系LD50（或LC50）的比值，用于量化抗药性水平。-抗性频率（resistancefrequency）：在诊断剂量下存活个体数占测试个体总数的百分比，用于描述种群中抗性个体的比例。3.4家蝇饲养与试虫准备标准明确规定了试虫的品系来源和饲养规程。检测用敏感品系家蝇应当来源于有资质的研究机构或国家认可的虫媒防制标准品系保藏机构，并要求定期用标准参考药剂进行敏感性核查，确保品系稳定性。家蝇饲养条件方面，标准要求饲养室温度控制在（25±2）℃区间，相对湿度保持（60±10）%，光照周期设定为光照∶黑暗=12小时∶12小时[10]。成虫需供应水和糖源（如蔗糖溶液），幼虫培养基质采用麦麸∶奶粉（或酵母粉）∶水按一定比例配制的混合物。试虫应选用羽化后3～5日龄的成虫，其生理状态一致，雌雄比例无明显偏倚，以排除龄期和性别差异对检测结果的影响。3.5生物测定方法与操作程序本标准规定的核心方法是点滴法（topicalapplicationmethod）。该方法属国际上媒介昆虫抗药性生物测定中通用的标准化方法之一，具有结果准确、重复性好、药剂用量少等优点。具体操作程序为：采用微量点滴器（如Burkard微量点滴仪或Hamilton微量进样器），将一定体积（通常为0.2～1.0μL）的杀虫剂丙酮溶液准确滴加于家蝇成虫的前胸背板（或腹部腹板，视药剂种类而定）上。每药设5～7个浓度梯度，每个浓度处理20～30只试虫，并设溶剂对照组（仅滴加等体积丙酮）。处理后的试虫放入清洁恢复容器中供给10%蔗糖水，在标准饲养条件下饲养24小时（或根据药剂特性设定为48小时）后检查记录死亡数（以不能协调运动为死亡判定标准）[11]。试验数据采用Probit分析法或机率值分析法计算LD50、LD95及对应的95%置信区间。标准同时推荐了药膜接触法（residualfilmmethod）作为补充方法，适用于对液体药剂和可湿性粉剂的抗性评价。其做法是在玻璃瓶或滤纸表面均匀涂覆一定量的药剂稀释液，待溶剂挥发后形成均匀药膜，引入家蝇成虫并使其接触药膜一定时间后转移至清洁容器，24小时后记录死亡率。对于部分难以通过触杀作用准确评价的药剂（如昆虫生长调节剂类），标准允许采用经口毒杀法或浸渍法等，但需在试验记录中明确说明。3.6结果计算与抗性评价标准标准对生物测定数据的统计处理作出了明确规定。每组试验应至少重复3次，每次试验的条件应保持一致。所得数据先行校正自然死亡率（Abbott公式），即：校正死亡率（%）=（处理组死亡率−对照组死亡率）/（100−对照组死亡率）×100%，然后以剂量对数值为自变量、死亡机率值为因变量，进行Probit回归分析，计算LD50、LD95及其95%置信区间[12]。抗药性程度的评价依据抗性倍数（RR）或抗性频率加以判断。标准建议的标准如下：抗性倍数RR<5时判定为敏感或低水平抗性；RR＝5～10时判定为中等水平抗性；RR>10时判定为高水平抗性。按诊断剂量法检测时，若存活率低于10%则判定为敏感，存活率在10%～30%之间判定为抗性个体出现，存活率高于30%则判定为高抗性种群。以上阈值参考了世界卫生组织媒介昆虫抗药性评估的分级体系，同时结合了我国病媒生物抗药性监测实践中的经验参数。3.7质量控制和试验记录要求为保证检测结果的可靠性，标准设立了严格的质量控制条目。检测机构应具备相应的实验室条件，关键仪器设备（如微量点滴器、电子天平等）应定期进行校准和验证。每一批次的试验均应设敏感品系平行对照，只有对照品系的LD50值落在该品系历史参考均值的95%可信区间内，本批次数据方可视为有效。标准要求所有试验环节均应如实记录，包括试虫品系与代龄、饲养条件、环境温湿度、药剂品名与批号、配制浓度、处理时间、死亡数统计等，记录格式应统一规范，便于数据汇总与复核。4标准的技术特点和主要修订改进与GB/T26350-2010相比，本次修订在技术层面对以下方面进行了改进和完善：4.1扩大药剂覆盖范围新版标准结合近年来我国卫生杀虫剂登记和使用格局的实际情况，增补了若干新有效成分（如溴氰虫酰胺、呋虫胺等）的代表性品种作为推荐检测药剂。同时按照药剂的化学结构类别和作用机制（靶标）进行分类，以更好地服务于抗药性机制研究和治理策略的制定。4.2更新和完善技术操作细节在试虫准备与药液配制环节，新标准对溶剂选择（推荐分析纯丙酮，如药剂的溶解性有特殊要求时可使用其他溶剂但需经验证）、点滴体积和给药位点等技术要素提出了更加明确、具体的要求，以降低操作人员间系统误差，提高数据的可比性和可重复性。4.3引入室内敏感基线平台的组装推荐标准在附录（资料性）中给出了建立区域性家蝇敏感基线的推荐程序和数据处理示例，为各级疾控机构建立和完善本地化抗药性背景数据库提供了方法学路径。4.4强化数据质量与报告格式要求标准以规范性附录形式给出了抗药性检测原始数据记录表格式和检测报告编写模板，对检测报告的结论表述提出分级指导意见，使检测结果更加直接有效地服务于病媒生物防制决策。5标准的主要相关单位5.1全国卫生有害生物防制标准化技术委员会（MOH）全国卫生有害生物防制标准化技术委员会（SAC/TC335）是我国负责卫生有害生物防制领域标准制修订工作的全国性专业标准化技术组织，业务主管单位为国家卫生健康委员会，秘书处设于中国疾病预防控制中心传染病预防控制所。该委员会负责组织开展蚊、蝇、蟑螂、鼠类等重要病媒生物防制技术标准、抗药性检测标准及相关管理标准的研制、修订和技术审查工作。其组织架构中专门设立了媒介生物抗药性检测分技术工作组，吸纳了来自中国疾病预防控制中心及各省级疾控中心、科研院所、高等院校和行业企业的相关专家，共同参与标准的选题论证、起草修改、试验验证和技术审查等各环节工作。在本标准的立项论证、内容研讨和技术审定等过程中，SAC/TC335发挥了核心的组织和协调作用，确保标准在技术上的权威性和先进性，在实施层面上的实用性和可操作性[13]。5.2标准主要起草单位——中国疾病预防控制中心传染病预防控制所中国疾病预防控制中心传染病预防控制所（以下简称“传染病所”）是本标准的主要起草技术单位。传染病所作为国家级媒介生物防制研究和指导机构，长期以来承担了全国病媒生物监测、抗药性检测和防制技术指导的核心任务。研究所下设媒介生物防制室，拥有数十年来积累的家蝇及其他重要媒介生物标准品系资源库和规范的抗药性检测实验室。研究所主持或参与完成了多项国家科技重大专项、国家重点研发计划和国家自然科学基金项目，在媒介昆虫抗药性分子机制、代谢抗性与靶标抗性检测技术以及抗药性治理策略等领域拥有一批有影响力的科研成果。传染病所在本标准的修订过程中主要承担了以下技术工作：（1）开展原标准实施情况调