CN119431574A 靶向多物种血清白蛋白的鲨鱼单域抗体及其制备方法和应用 （青岛科技大学）

靶向多物种血清白蛋白的鲨鱼单域抗体及种血清白蛋白的鲨鱼单域抗体及其制备方法和IDNO.1～SEQIDNO.6所示的氨基酸序列的核苷酸序列分别为SEQIDNO.7～SEQIDNO.1的单域抗体比传统的单克隆抗体更小,稳定性在pH6.0和pH7.4条件下表现出跨物种的血清23.根据权利要求2所述的靶向多物种血清白蛋白的鲨鱼单域抗体，其特征在于，所述CDR3的氨基酸序列为SEQIDNO.13～SEQID蛋白的鲨鱼单域抗体的编码基因或权利要求5所述的含有靶向多物种血清白蛋白的鲨鱼单7.权利要求1所述的靶向多物种血清白蛋白的鲨鱼单域抗体在制备血清白蛋白靶向制8.权利要求1所述的靶向多物种血清白蛋白的鲨鱼单域抗体在制备辅助延长半衰期制9.权利要求1所述的靶向多物种血清白蛋白的鲨鱼单域抗体或权利要求4所述的靶向多物种血清白蛋白的鲨鱼单域抗体的编码基因在制备免疫检测试剂盒和血浆蛋白检测试3靶向多物种血清白蛋白的鲨鱼单域抗体及其制备方法和应用肽等小分子治疗药物的半衰期，对于解决临床上的给药频率和长效治疗难题具有重大意[0004]本发明的目的是提供了一种靶向多物种血清白蛋白的鲨鱼单域抗体及其制备方4[0010]本发明还保护所述的鲨鱼单域抗体在制备辅助延长半衰期制品和长效药物中的[0011]本发明还保护所述的鲨鱼单域抗体在制备免疫检测试剂盒和血浆蛋白检测试剂盒中的应用。图10为检测VNAR_4A12与不同物种血图11为纯化后的sfGFP和4A12_sf51.鲨鱼免疫CAATTTGATTGGGCCCAGGCGGCCGCCSMACGGSTTGACAATTTGATTGGGCCCAGGCGGCCGCCGCACGGGTTGACTTAATCGACTGGCCGGCCTGGCCCACAGTCAS6CTTAATCGACTGGCCGGCCTGGCCCACAGTCAGAGGGGT用电转法将连接好的pComb3Xss‑VNAR载体转入大肠杆菌TG1中，菌液涂于氨苄抗[0032]菌液PCR鉴定插入的核酸电泳结果如图3所示，随机测序的序列比对结果如图4所采用固相淘选的方法，第一轮淘选将10µg/ml的HSA和封闭液分别加入96孔酶标7QWVEQTPTTTTKEAGESLTINCVLKGSSCALGSTYWYFTKKGATKKASLSTGGRYSDTKNTASKSFSLRISDLRVEDSGTYHCEAFYSWQWVEQTPTTTTKEAGESLTINCVLRDSSCALASTYWYFTKKGATKKESLSNGGRYAETVNKASKSFSLRARVEQTPTTTTKEAGESLTINCALRDSSCVLGRTYWYFTKKGAPKKESLSNGGRYAETVNKASKSFSLRARVEQTPTTTTKEAGESLTINCVLRDSSCALGKTYWYFTKKGATKKASLSTGGRYTETVNKASKSFSLRARVEQTPTTTTKEAGESLTINCVLRDSSCPLPSASTYWFFTKKGATKKESLSNGGRYAETMNKTSKSFSLRISDLRVEDSGTYHCKAYPGGYCDGIYYYEGARVEQTPTTTTKEAGESLTINCVLRDSSCALYSTYWYFTKKGATKKETLSNGGRYAETVNKASKSFSLRCAATGGGTTGAACAAACACCGACAACGACAACAAAGGAGGCAGGCGAATCACTGACCATCAATTGCGTCCTAAAAGGTTCCAGCTGTGCATTGGGTAGCACGTACTGGTATTTCACAAAAAAGGGCGCAACAAAGAAGGCGAGCTTATCAACTGGCGGACGATACTCGGACACAAAGAATACGGCATCAAAGTCCTTTTCCTTGCGAATTAGTGACCTAAGAGTTGAAGACAGTGGTACATATCACTGTGAAGCGTTTTACAGCTGGGATGAGGGAGACGTCTGCCGTAGCTGGGATTCT8CTCTCTTATGAAGGAGGCGGCACCATTCTGACTCAATGGGTTGAACAAACACCGACAACGACAACAAAGGAGGCAGGCGAATCACTGACCATCAATTGCGTCCTAAGAGATTCCAGCTGTGCATTGGCTAGCACGTACTGGTATTTCACAAAAAAGGGCGCAACAAAGAAGGAGAGCTTATCAAATGGCGGACGATACGCGGAAACAGTGAACAAGGCATCAAAGTCCTTTTCTTTGCGAATTAGTGACCTAAGAGTTGAAGACAGTGGTACATATCACTGTAAAGCGTATCCACAGCTGGATGAAGGGGACTGTGTAGGCTGGTATCCGTCTGAAGGAGGCGGCACCATTCTGAGTGTAAAGCACGGGTTGAACAAACACCGACAACGACAACAAAGGAGGCAGGCGAATCACTGACCATCAATTGCGCCCTAAGAGACTCCAGCTGTGTATTGGGTAGGACGTACTGGTATTTCACAAAAAAGGGCGCGCCAAAGAAGGAGAGCTTATCGAATGGCGGACGATACGCGGAAACAGTGAACAAGGCATCAAAGTCCTTTTCTTTGCGAATTAGTGACCTAAGAGTTGAAGACAGTGGTACATATTACTGTAAAGCGTATCCCCTGGAGTTCTGTGATACCCATAGTTGGACTGAAGGAGGCGGCACCATTCTGACTGTGAAGCACGGGTTGAACAAACACCGACAACGACAACAAAGGAGGCAGGCGAATCACTGACCATCAATTGCGTCCTAAGAGATTCCAGCTGTGCATTGGGTAAAACGTACTGGTATTTCACAAAAAAGGGCGCAACAAAGAAGGCGAGCTTATCAACTGGCGGACGATACACGGAAACAGTGAACAAGGCATCAAAGTCCTTTTCTTTGCGAATTAGTGACCTAAGAGTTGAAGACAGTGGTACATATCACTGTAAAGCGTATCCGCTACAGCTCTGTTCCGGCCATAGCTGGGTTGAAGGAGGCGCACGGGTTGAACAAACACCGACAACGACAACAAAGGAGGCAGGCGAATCACTGACCATCAATTGCGTCCTAAGAGATTCCAGCTGTCCATTGCCTAGCGCTAGCACGTACTGGTTTTTCACAAAAAAGGGCGCAACAAAGAAGGAGAGCTTATCAAATGGCGGACGATACGCGGAAACAATGAACAAGACATCAAAGTCCTTTTCTTTGCGAATTAGTGACCTAAGAGTTGAAGACAGTGGTACATATCACTGTAAAGCGTACCCTGGGGGTTACTGTGATGGAATTTACTATTATGAAGGAGGCGGCACCATTCTGACTGTGGCACGGGTTGAACAAACACCGACAACGACAACAAAGGAGGCAGGCGAATCACTGACCATCAATTGCGTCCTAAGAGATTCCAGCTGTGCATTGTATAGCACGTACTGGTATTTCACAAAAAAGGGCGCAACAAAGAAGGAAACCTTATCAAATGGCGGACGATACGCGGAAACAGTGAACAAGGCATCAAAGTCCTTTTCTTTGCGAATTAGTGACCTAAGAGTTGAAGACAGTGGTACATATCACTGTAAAGCGTATCCTCAGCTGGATGAAGACTGTGTTAGCTGGAAGTATTATGAAGGAGGCGGCACCATTGTGAC9养至对数期后在100μg/ml氨苄霉素压力下用0.1mM异丙基硫代半乳糖苷（IPTG，使用OctetRED96e系统检测目的蛋白与HSA的亲和情况。将纯化后的蛋白溶液稀释为5μg/mL，使用anti_His探针进行检测，先将探针在含0.02%Tween_20的PBSSEQIDNO.5所示序列对于不同物种血清白蛋白的结合力结果共10只雌性8周龄BALB/c小鼠被分为2组（n=5每组分别被单次尾静脉注射100过荧光强度计算血药浓度，直至低于定量下限。将