（正式版）DB13∕T 1006-2009 《鸡肉中四种氟喹诺酮类药物残留 高效液相色谱-荧光检测法》

C532009-03-09发布2009-03-09发布I本标准由秦皇岛市质量技术监督局提出。1本标准规定了鸡肉中恩诺沙星、环丙沙星、诺氟沙星、氧氟沙星残留量检测的原理、仪器、提取本标准适用于鸡肉中恩诺沙星、环丙沙星、诺氟沙星、氧氟沙星残留量的测定；鸡肝脏、肾脏中恩诺沙星、环丙沙星、诺氟沙星、氧氟沙星残留量的测定也可参照执行。下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适3原理样品中恩诺沙星、环丙沙星、诺氟沙星、氧氟沙星用乙腈提取，用正己烷净化定容于100mL棕色容量瓶中，此溶液浓度为100μg/mL。各标准储备溶液置于2℃~8℃冰箱中冷藏保25.6精密分析天平(感量0.0001g);天平(感量0.01g)。7.1样品制备取待检胸肉(或腿肉)样品，弃去筋、皮、骨和脂肪，切成小块后，用搅肉机搅碎。准确称取绞碎鸡肉样品5g(精确至0.01g)于50mL塑料离心管，加人10g无水硫酸钠，加25mL乙腈，用高速组织均质器于15000rpm高速均质7.3净化在合并后的上清液中加入30mL饱和正己烷，置振荡器上高速振荡5min,3500rpm离心10min,去除上层正己烷相，收集下层乙腈于蒸发浓缩瓶中，然后置40℃水浴上减压蒸发浓缩至干，准确加入2.0mL流动相溶解残渣，转移至离心管，加入2mL正己烷，置振荡器上高速振荡3min,于4000rpm离心5min,吸取下层液体用尼龙微孔过滤膜过滤，滤液待测。8测定8.1标准工作曲线的制作氧氟沙星浓度为3.0μg/mL),分别移取1.0μg/mL的混合标准溶液2μL,10μL,20μL,50μL,8.2液相色谱测定根据样品溶液中恩诺沙星、环丙沙星、诺氟沙星、氧氟沙星残留量情况，选定峰面积相近的标准工作溶液。标准工作溶液和样品溶液中恩诺沙星、环丙沙星、诺氟沙星、氧氟沙星响应值均应在仪器四种氟喹诺酮的出峰顺序和参考保留时间见表1。恩诺沙星8.3空白试验与空白添加回收试验每个试验批次的样品中至少必须同时做空白样品和空白添加样品(实际加入值为已知)。空白鸡肉添加样品的实际加入值水平可选在等于最大残留限量10μg/kg,或方法检测限2μg/kg或略高的实际加入值水平上操作；空白样品和空白添加样品的测定按步骤7操作。本试验用于计算试验的回收率Rc,试验的回收率用于对阳性的残留结果进行残留量的校正。回收率Rc按公式(1)计算。R.——代表回收率；A.——空白添加样品中四种氟喹诺酮类药物残留量测定值，μg/g;Ao——空白样品中四种氟喹诺酮类药物残留量测定值，μg/g;Au——空白样品中添加四种氟喹诺酮类药物含量，μg/mL;C—样品中氧氟沙星、诺氟沙星、环丙沙星、恩诺沙星残留量，μg/g;A——样品溶液中氧氟沙星、诺氟沙星、环丙沙星、恩诺沙星的峰面积；A₀——空白实验被测物的色谱峰面积或峰高；As——标准工作溶液中氧氟沙星、诺氟沙星、环丙沙星、恩诺沙星的峰面积；Cs——标准工作溶液中氧氟沙星、诺氟沙星、环丙沙星、恩诺沙星的浓度，μg/mL;V——样品定容体积，mL;C,——经过回收校正的样品中恩诺沙星、环丙沙星、诺氟沙星、氧氟沙星残留量，μg/kg;C——未校正的样品中恩诺沙星、环丙沙星、诺氟沙星、氧氟沙星残留量，μg/kg;氧氟沙星在0.003μg/g～0.6μg/g范围内呈良好的线性关系，诺氟沙星、环丙沙星、恩诺沙星在0.001μg/g～0.2μg/g范围内呈良好的线性关系，相关系数均大于0.9998。10.1鸡肉产品的检测限：恩诺沙星为2μg/kg,环丙沙星为2μg/kg,诺氟沙星为