（正式版）DB13∕T 1100-2009 《出口肉鸡药物残留控制技术规程》

ICS65.020.30B422009-06-17发布2009-06-17发布I1下列文件通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可GB/T20764—2006可食动物肌肉中土霉素、四环素、金霉素、强力霉素残留量的测定液相色h)安普霉素；j)红霉素；2p)微生态制剂。4禁止使用的药品b)二氯二甲吡啶酚(克球粉);d)莫仑太尔、拉沙洛西，乙酰胺、尼卡巴嗪、卡巴多司、氯丙嗪、冬眠灵、所有激素类及有激化激素；具有雌激素样作用的物质(己烯雌酚、玉米赤霉醇)、催眠镇静片(安定、安眠酮)、肾上腺素(异丙肾上腺素、沙丁胺醇、多巴胺及β-肾上腺素激动剂)、强的松、氟美松、地塞米松等；f)四环素、土霉素、强力霉素、金霉素；h)硝基呋喃类：呋喃唑酮、呋喃他酮、呋喃西林、呋喃妥因；i)其它类：敌菌丹、卡巴氧、二甲硝咪唑、氟嘧消、甲硝唑/灭滴灵、洛硝达唑、甲硝咪唑、罗j)金刚烷胺、金刚乙胺、利巴韦林、吗啉胍(病毒灵)、等及其单、复方制剂、头孢类、罗红霉a)企业法人证书、营业执照、税务登记证；d)兽药(注册)批准文号；e)进口兽药登记许可证。肉鸡出口企业购入的所有药品均应由有资质的机构检验，合格后方可投入使用。检验项目包括：6.2检验方法6.2.1硝基呋喃类按照附录A的规定执行。6.2.3喹诺酮类按照附录C的规定执行。6.2.4四环素族按照附录D的规定执行。37.2肉鸡饲养备案场凭企业兽医的处方到兽药供应站购药，兽药供应站按照企业兽医的处方向肉鸡饲养场提供药品。8.3出口肉鸡所用饲料分三种：8.4饲料的使用本着先进先出的原则。9.1肉鸡出栏前采样只，1万只或1万只以上每栋采12只。9.1.4宰前兽医负责将样品鸡脱毛，而后放在准备好的塑料筐内，逐户取腿肉样不少于5品装入包装袋内，在包装袋外用橡皮膏做好样品编号。编号的内容包括：肉鸡养殖户的地址、姓名、9.2肉鸡屠宰厂采样10.4磺胺类410.5四环素族：四环素、土霉素、金霉素、强力霉素按照GB/T20764—2006的规定执行。5(规范性附录)兽药中四种呋喃类药物残留高效液相色谱—紫外检测法本标准适用于兽药中呋喃它酮、呋喃唑酮、呋喃妥因、呋喃西林残A.3原理样品中呋喃它酮、呋喃唑酮、呋喃妥因、呋喃西林用二甲基甲酰胺溶液溶解，用正己烷净化，用所用试剂除另有指定外，均为色谱纯。试验用水应符合GB/T6682中二级水的规定。A.4.5呋喃它酮、呋喃唑酮、呋喃妥因、呋喃西林标准品：纯度≥95.0%。A.4.6呋喃它酮、呋喃唑酮、呋喃妥因、呋喃西林标准储备溶液：分别称取呋喃它酮、呋喃唑酮、呋喃妥因、呋喃西林标准品100.0mg(按实际含量折算),用甲醇溶解定容于100mL棕色容量瓶中，此溶液浓度为1000μg/mL。各标准储备溶液置于2℃~8℃冰箱中冷藏保存，保存期为六个月。标准使用A.5.1高效液相色谱仪，配有紫外检测器。A.5.3离心机。A.5.4涡旋混合器。A.5.5精密分析天平(感量0.00001g);天平(感量0.01g)。A.6色谱条件6A.6.2流动相：乙腈十甲醇十水+冰醋酸=(138+138+724+5,V/V)。准确称取兽药样品1.0g于50mL聚丙烯离心管中，加入10mL二甲基甲酰胺溶液，用超声波超声10min后在振荡器上振荡20min,3800r/min离心10min,上清液转入另一个离心管中，残渣再用10mL二甲基甲酰胺溶液溶解，振荡10min,3800r/min离心10min,合并两次上清液用20mL正己烷去杂质，振荡3800r/min离心8min后，下层二甲基甲酰胺溶液转入100mL鸡心瓶中，待浓缩。10mL二甲基甲酰胺溶液溶解，振荡10min,3800r/min离心10min,合并两次上清液用20mL正己A.8测定动相稀释成浓度分别为0.10μg/mL,0.20μg/mL,0.50μg/mL,1.0μg/mL,2.0μg/mL,5.0μg/mL,四种呋喃类药物的出峰顺序和参考保留时间如下：呋喃它酮4.091minA.8.3空白试验与空白添加回收试验每个试验批次的样品中至少必须同时做空白样品和空白添加样品(实际加入值为已知)。空白鸡肉添加样品的实际加入值水平可选在等于方法检测限0.5mg/kg或略高的实际加入值水平上操作；空白样品和空白添加样品的测定按步骤7操作。本试验用于计算试验的回收率Rc,试验的回收率用于对阳性的残留结果进行残留量的校正。回收率Rc按公式(1)计算。……试样中呋喃它酮、呋喃唑酮、呋喃妥因、呋喃西林残留量(待校正值)按公式(2)计算。As——标准工作溶液中呋喃它酮、呋喃唑酮、呋喃妥因、呋喃西林的峰面积；C₅——标准工作溶液中呋喃它酮、呋喃唑酮、呋喃妥因、呋喃西林的浓度，μg/mL;结果报告值按公式(3)计算。C,——经过回收校正的样品中呋喃它酮、呋喃唑酮、呋喃妥因、呋喃西林残留量，μg/kg;C——未校正的样品中呋喃它酮、呋喃唑酮、呋喃它酮、呋喃唑酮、呋喃妥因、呋喃西林在0.10μg/g～10.0μg/g范围内呈良好的线性关系，相关系数均大于0.9995。8呋喃它酮、呋喃唑酮、呋喃妥因、呋喃西林的检测限为0.50mg/kg。古图A.1四种呋喃类检测色谱图9(规范性附录)兽药中氯霉素残留检测B.3原理兽药中氯霉素用乙腈提取，正己烷净化，高效液相色谱—紫外检测法测定，外标法定量。所用试剂除另有指定外，均为色谱纯。试验用水应符合GB/T6682中二级水的规定。棕色容量瓶中，此溶液浓度为1000μg/mL,于2℃~8℃冰箱中冷藏保存，保存期为六个月。标准使用B.5.5精密分析天平(感量0.00001g);天平(感量0.01g)。B.5.6振荡器。B.6色谱条件B.6.1色谱柱：AglientC183.9×250mm,5μm或相当者。B.6.2流动相：乙腈十甲醇十水+冰醋酸=(138+138+724+5,V/V)。准确称取兽药样品1.0g于50mL聚丙烯离心管中，加入10mL乙腈，用超声波超声10min后在振荡器上振荡20min,3800r/min离心10min,上清液转入另一个离心管中，残渣再用10mL乙腈溶解，振荡10min,3800r/min离心10min,合并两次上清液用20mL正己烷去杂质，振荡3800r/min离心8min后，下层乙腈层转入100mL鸡心瓶中，待浓缩。准确称取兽药样品1.0g于50mL聚丙烯离心管中，加入10mL乙腈，用超声波超声10min后在振荡器上振荡20min,3800r/min离心10min,上清液转入另一个离心管中，残渣再用10mL乙腈溶解，振荡10min,3800r/min离心10min,合并两次上清液用20mL正己烷去杂质，振荡3800r/min离心8min后，下层乙腈层再次加入正己烷20mL净化一次，去除正己烷相转移至100mL鸡心瓶中待于上述待浓缩液中加入正丙醇10mL,50℃下减压干燥，残留物用95%乙腈3mL溶解超声5min,过Sep-Pak氧化铝柱，再取5mL95%乙腈溶解鸡心瓶中的残留物后加入Sep-Pak氧化铝柱中，待液体流净后用70%乙腈10mL洗脱并收集到鸡心瓶中。上述洗脱液中加入5mL正丙醇，50℃下减压干燥后残留物用2.0mL流动相定容，转移至离心管中，加入等量的正己烷，3800r/min离心10min。对于中药成分的兽药等量正己烷去杂质3次；对于西药粉剂的兽药等量正己烷去杂质2次；对于液体状的兽药等量正己烷去杂质2次，至下层液体澄清。吸取下层液体用尼龙微孔过滤膜过滤，滤液待测。B.8测定B.8.1标准工作曲线的制作配制氯霉素标准溶液，用流动相稀释成浓度分别为0.0根据兽药中氯霉素的残留量情况，选定峰面积相近的标准工作溶液。标准工作溶液和样品溶液中氯霉素的响应值均应在仪器检测线性范围内。对标准工作溶液和样品溶液等体积穿插进样进行测定。每个试验批次的样品中至少必须同时做空白样品和空白添加样品(实际加入值为已知)。空白兽药添加样品的实际加入值水平可选在方法检测限0.20μg/g或略高的实空白添加样品的测定按步骤7操作。本试验用于计算试验的回收率Rc,试验的回收率用于对阳性的残留结果进行残留量的校正。回收率Rc按公式(1)计算。式中：…试样中氯霉素的残留量(待校正值)按公式(2)计算。A——样品溶液中氯霉素的峰面积；Ao——空白试验被测物的峰面积；As——标准工作溶液中氯霉素的峰面积；C——未校正的样品中氯霉素残留量，μg/kg;R——回收率，%。氯霉素在0.050μg/g~5.0μg/g范围内呈良好的线性关系，相关系数均大于0.9995。兽药中氯霉素的检测限为：0.20μg/g。(规范性附录)兽药中氟喹诺酮类检测—高效液相色谱法本标准适用于兽药中恩诺沙星、环丙沙星、兽药中恩诺沙星、环丙沙星、诺氟沙星、氧氟沙星用乙腈提取，用正己烷净化，用高效液相色谱-氟沙星、氧氟沙星标准品10.0mg(按实际含量折算),用0.03mol/LNaOH溶液10mL溶解，再用乙腈稀释定容于100mL棕色容量瓶中，此溶液浓度为100μg/mL。各标准储备溶液置于2℃~8℃冰箱中冷藏保存，保存期为六个月。标准使用液用流动相稀释至适当浓度，现配现用。C.5.5精密分析天平(感量0.00001g);天平(感量0.01g)。荡器上振荡20min,3800r/min离心10min,上清液转入另一个离心管中，残渣再用10mL乙腈溶解，于上述待浓缩液中加入正丙醇10mL,50℃下减压干燥，残留物用2.0mL流动相定容，转移至离心管中，加入等量的正己烷，3800r/min离心10min。对于中药成分的兽药等量正己烷去杂质3次；对于西药粉剂的兽药等量正己烷去杂质2次；对于液体状的兽药等量正己烷去杂质2次，至下层液体1000μL,用流动相稀释成浓度分别为0.010μg/mL,0.020μg/mL,0.050μg/mL,0.50μg/mL,见图C.1。四种氟喹诺酮的出峰顺序和参考保留时间如下：的残留结果进行残留量的校正。回收率Rc按公式……试样中恩诺沙星、环丙沙星、诺氟沙星、氧氟沙星残留量(待校正值)按公式(2)计算。…结果报告值按公式(3)计算。C.11检测限B图C.1四种氟喹诺酮类检测色谱图(规范性附录)兽药中土霉素、四环素、金霉素、强力霉素残留检测本标准规定了兽药中土霉素、四环素、金霉素、强力霉素残留检测的原理、仪器、提取和净化。本标准适用于兽药中土霉素、四环素、金霉素、强力霉素残留的测定。下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法D.3原理兽药中土霉素、四环素、金霉素、强力霉素用甲醇提取，正己烷净化，高效液相色谱一紫外检测所用试剂除另有指定外，均为色谱纯。试验用水应符合GB/T6682中二级水的规定。D.4.1甲醇。D.4.3无水硫酸钠：分析纯，经640℃灼烧4h后，贮于密闭容器中备用。D.5.5精密分析天平(感量0.00001g);天平(感量0.01g)。D.6.2流动相：乙腈十甲醇+0.01molL草酸溶液(2+1+7)。D.6.3流速：0.7mL/min。准确称取兽药样品1.0g于50mL聚丙烯离心管中，加入10mL甲醇，用超声波超声10min后在振荡器上振荡20min,3800r/min离心10min,上清液转入另一个离心管中，残渣再用10mL甲醇溶解，振荡10min,3800r/min离心10min,合并两次上清液用20mL正己烷去杂质，充分振荡，3800r/min离心8min后，下层甲醇层再次加入正己烷20mL净化一次，去除正己烷相转移至100mL鸡心瓶中待液体状的兽药吸取1mL于50mL聚丙烯离心管中，加5g的无水硫酸钠，以下同中药或粉状西药于上述待浓缩液中加入正丙醇10mL,50℃下减压干燥，残留物用2.0mL流动相定容，转移至离心管中，加入等量的正己烷，3800r/min离心10min。对于中药成分的兽药等量正已烷去杂质3次；对于西药粉剂的兽药等量正己烷去杂质2次；对于液体状的兽药等量正己烷去杂质2次，至下层液体对标准工作溶液和样品溶液等体积穿插进样进行测定。四种四环素族检测色谱图见D.1。四环素金霉素D.8.3空白试验与空白添加回收试验每个试验批次的样品中至少必须同时做空白样品和空白添加样品(实际加入值为已知)。空白兽药添加样品的实际加入值水平可选在方法检测限0.50μg/g或略高的实际加入值水平上操作；空白样品和空白添加样品的测定按步骤7操作。本试验用于计算试验的回收率Rc,试验的回收率用于对阳性的残留结果进行残留量的校正。回收率Rc按公式(1)计算。……A₀——空白样品中四种四环素族残留量测定值，μg/g;An—空白样品中添加四种四环素族药物含量，μg/mL;As——标准工作溶液中四种四环素族的峰面积；Cs——标准工作溶液中四种四环素族的浓度，μg/mL;m——样品的克重，g。结果报告值按公式(3)计算。C,——经过回收校正的样品中四种四环素族残留量，μg/kg;C——未校正的样品中四种四环素族残留量，μg/kg;土霉素、四环素在0.10μg/g～10.0μg/g范围内呈良好的线性关系，金霉素、强力霉素在0.30μg/g～30.0μg/g范围内呈良好的线性关系，相关系数均大于0.9995。固体兽药或液体兽药中的土霉素、四环素的检测限为：0.50μg/g;金霉素、强力霉素的检测限为：图D.1四种四环素族检测色谱图见D.1兽药中磺胺二甲嘧啶、磺胺甲恶唑、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺二甲氧嘧啶、磺胺喹恶啉残留检测E.5.1高效液相色谱仪，配有紫外检测器。E.5.5精密分析天平(感量0.00001g);天平(感量0.01g)。E.5.8尼龙微孔过滤膜：0.2μm。E.6色谱条件E.6.2流动相：乙腈十甲醇十水+冰醋酸=(138+138+724+5,VV)。准确称取兽药样品1.0g于50mL聚丙烯离心管中，加入10mL乙腈，用超声波超声10min后在振荡器上振荡20min,3800r/min离心10min,上清液转入另一个离心管中，残渣再用10mL乙腈溶解，振荡10mi