【《烟曲霉次生代谢产物的化学筛选概述》1500字】

烟曲霉次生代谢产物的化学筛选概述目录TOC\o"1-3"\h\u3086烟曲霉次生代谢产物的化学筛选概述 1227231.1前言 1138501.2实验部分 2239051.1.1实验仪器 2196081.1.2实验材料 299821.3菌株发酵培养的筛选 2230661.3.1培养基 227041.3.2种子液培养 3106851.3.3单菌固体发酵筛选 3206641.3.4单菌液体发酵筛选 3193811.4结果与讨论 41.1前言药用植物内生真菌对宿主植物有较强的专一性，可调节宿主植物体内的激素水平并促进宿主植物体内次生代谢产物的积累，此外对其他生物没有直接的影响。一些内生真菌可以通过产生各种代谢产物来保护宿主免免受掠食性害虫或病原微生物的侵害，或刺激生长。紫杉醇是近年来研究发现有效治疗肿瘤的重要药物[36]。自从红豆杉(Taxus)属植物中发现了产紫杉醇的内生真菌，人们对药用植物内生真菌的次生代谢产物的研究产生了浓厚的兴趣，并发现新的生物碱和其他框架为潜在的药物发现。但到目前为止，关于利用药用植物内生真菌的次生代谢产物在生物防治方面的报道较少[37。乌头属植物是我国一种传统的药用植物，目前中国约有36种[10]可用于医药用途。作为传统药材，乌头属植物中含生物碱等各种丰富的化学成分，具有祛除风湿，解热，温经止血等作用。由于药物资源的日益匮乏，当务之急是通过研究药用植物内生真菌的次生代谢产物寻找替代药品，而乌头属作为一种重要的药用植物，研究其内生真菌是很有意义的。基于此本实验对川鄂乌头内生真菌进行化学筛选。1.2实验部分1.1.1实验仪器超净工作台(上海一恒科技有限公司)；超低温冰箱（海尔中国）；WFH-204B手提式紫外分析仪；上海BoxunLS-220N恒温摇床；苏泊尔电磁炉；YP601N电子天平。1.1.2实验材料川鄂乌头，短距乌头GF254薄层层析硅胶板(青岛黄海)1.3菌株发酵培养的筛选从川鄂乌头的根、茎、叶中分离得到53株植物内生真菌，经ITS测序鉴定为曲霉菌属、青霉属、镰刀菌属等共12个属，共22个参考物种，从短距乌头中分离得到13株内生真菌，未测序，将这些菌种接到PDA斜面培养基上保存，放至4℃冰箱中存放。1.3.1培养基1.PDA斜面培养每1L水中，加入马铃薯(200g)，煮沸过滤后，趁热加入琼脂(15g)和葡萄糖(20g)，冷却凝固前分装到试管中，胶塞封口，置于121℃灭菌30min，然后摆放成斜面，待其凝固收起备用。种子培养基每1L水中，加入马铃薯(200g)，煮沸过滤后，趁热加入葡萄糖(20g)，每个锥形瓶(500ml)200ml。1.3.2种子液培养将植物内生真菌接入PDA斜面培养基，置于恒温箱(28℃)中培养5天。将种子培养基(200ml)置于锥形瓶(500ml)中，再将已经活化的菌种接入种子培养基，放在160r/min，恒温28℃摇床培养3天，备用。1.3.3单菌固体发酵筛选挑选川鄂乌头内生真菌22株，将土豆切成约1cm的小块，每个发酵罐装入50g，121℃灭菌30min，冷却至室温，用灭菌后的竹签在经过酒精和紫外灯灭菌后的干净工作台上将PDA斜面上活化好的植物病原真菌菌丝在无菌环境下挑拨到发酵罐中，放置在恒温箱中30天，每株菌设置三组对照实验，并设置不接菌的空白对照实验。30天后甲醇提取并超声，氯仿甲醇9:1点板，观察TLC情况。1.3.4单菌液体发酵筛选挑选川鄂乌头内生真菌22株，短距乌头内生菌13株，按照每400g土豆2L水的比例，将土豆加入锅中煮至软烂，趁热过滤，加入40g葡萄糖，搅拌均匀，每瓶150ml培养液，121℃灭菌30min，用灭菌后的竹签在进过酒精和紫外灯灭菌的干净工作台上，将试管中的菌丝挑拨到锥形瓶中，放置到160r/min摇床上，28℃恒温培养7天，每株菌设置三组对照实验，并设置不接菌的空白对照实验。7天后乙酸乙酯萃取，氯仿甲醇9:1点板，观察TLC情况。筛选处理流程图乌头内生真菌PDA培养基发酵培养基乙酸乙酯萃取水相乙酸乙酯相氯仿-甲醇9:1点板观察TLC 1.4结果与讨论图1.固体筛选点板情况DJG-13DJG-13DJG-13DJG-13图1.液体筛选点板情况通过对所有筛选菌株发酵提取物的TLC板的情况进行观察，固体筛选中未找到合适的菌株进行扩大发酵。液体筛选中，编号DJG-1,DJG-12,DJG-13,DJY-14四株菌的初提物的点相对较多而且成点性较好，均为短距乌头