（正式版）DB13∕T 1238-2010 《速冻机削(切)牛、羊肉片》

河北省地速冻机削(切)牛、羊肉片I1速冻机削(切)牛、羊肉片GB2707鲜(冻)畜肉卫生标准《定量包装商品计量监督管理办法》国家质检总局(2005)第75号令2煮沸后肉汤澄清透明，脂肪团聚集于表面，具有该品种肉眼可见异物无脆骨、硬骨及血管、脏器、淋巴、毛、绒。其他杂挥发性盐基氮/(mg/100g)≤应符合GB2707的规定总汞(以Hg计)/(mg/kg)≤铅(以Pb计)/(mg/kg)≤无机砷(以As计)/(mg/kg)≤镉(以Cd计)/(mg/kg)≤铬(以Cr计)/(mg/kg)≤应符合GB2762的规定亚硝酸盐(以NaNO₂计)/(mg/kg)≤3M₁一解冻前样品质量(g);4567.4.2码垛要求：不高于5层。7聚合酶链反应(polymerasechainreaction,PCR)方法及即时聚合酶链反应(real-timepolymeraseA.1.1.6微量冷冻离心机：可达20,000×g,并注1:本方法所使用或提及的产品品牌不代表为同类产品中最好者；反的，未使用或提及的产品品牌亦不代表为同类产品中较差者。注2:确认试验用。A.1.2.1DNA抽取用：RNase、乙醇(96-100%)均采分子生物分析级试剂，DNeasyTissue套组。8A.1.2.2.2动物类(标的基因：16SribosomalRNA)引子F:SF,5'-AAGACGAGAAGACCCT(A/G)TGGA(A/G)CTTTA-3'A.1.2.2.3哺乳类及家禽类(标的基因：myostatin)PCR增幅产物大小97bp引子F:MYF,5'-TTGTGCAAATCCTGAGA引子F:FSF,5'-CGCAAGGGAAAGCTGAAA注3:合成的引子，拆封后，以无菌纯水稀释成适当浓度，分装后置于-20℃贮存备用。9A.1.3.8塑料离心管：50mL。称取琼脂2g,加入0.5倍TBE缓10倍PCR缓冲溶液(含15mMMgCl₂) 4.0μL 模版DNA溶液(总量100ng)5.0μL总体积25.0μL5μM引子F1.25μL3.3μM探针P1.7μL模版DNA溶液(总量100ng)5.0μL5μM引子F1.5μL3.3μM探针P1.5μL25mMMgCl₂溶液2.4μL模版DNA溶液(总量100ng)5.0μL注7:PCR溶液应置于冰浴中配制。A.1.5检体DNA的制备A.1.5.2DNA的抽取(DNeasyspincolumn)、收集管、AW1、AW2与AE试剂),亦可采用其他市售套组。A.1.5.2.6加入乙醇(9A.1.5.2.7取混合液注入离心管柱，以≥6,000×g(8,注8:抽取脾脏等含细胞数量衆多的组织DNA,称取量不可超过10mg。抽取肝脏或肾脏等含丰富RNA的组织DNA,A.1.5.3.2取适当量的DNA溶液以无菌纯水做适当倍数的稀释，分别测定260nm及280nm的吸光值 以无菌纯水适当稀释DNA溶液、引子备用。取PCR反应管，并依照2.5.5温度时間1.最初变性测试动物类基因测试哺乳类及家禽类基因测试魚类基因5.最终延展步骤2至步骤4,共进行40个循环反应。取适量的6倍载入胶片缓冲溶液，分别与无菌纯水(空白组)及PCR增幅产物混合均匀，注入A.1.6.4鉴别物质估算PCR增幅产物大小介于234-265bp者(10),即判定该检体注9:PCR鉴别试验结果的判读系以PCR增幅产物大小判定，当测试结果判读困难时，建议进行确认试验。本PCRA.1.7.1.1RT-PCR-ABIPRISM7700Se再各别加入稀释过的检体DNA溶液5μL,最后将PCR反应管置于离心机中，以200×g(1,500rpm)温度时間1.热活化测试动物类基因测试哺乳类及家禽类基因测试鱼类基因5.冷却步骤3至步骤4,共进行45个循环反应。A.1.7.1.2RT-PCR-RocheLi