ISO 11290-12017Amd 12026 食物链的微生物学 单核细胞增生李斯特菌和李斯特菌的水平检测和计数方法 -第1部分检测方法-修改1包括分析前样品的储存和培养基和试剂性能试验对照菌株的变化标准立项发展报告

StandardizationDevelopmentReport:Microbiologyofthefoodchain—Horizontalmethodforthedetectionandenumerationof*Listeriamonocytogenes*andof*Listeria*spp.—Part1:Detectionmethod—Amendment1:Inclusionofstorageofthesamplesbeforeanalysisandchangesinthecontrolstrainforperformancetestingofculturemediaandreagents摘要随着全球食品贸易规模的持续扩大和消费者对食品安全关注度的不断提高，食源性致病菌的精准检测已成为国际食品安全管理体系的核心技术支撑。单核细胞增生李斯特菌（*Listeriamonocytogenes*）作为一种高致死率的人畜共患食源性病原菌，其对冷链食品、即食食品及乳制品等造成的安全威胁尤为突出。ISO11290-1:2017是国际公认的食品链中单核细胞增生李斯特菌和李斯特菌水平检测方法标准，在世界各国食品安全监管和生产企业自控中被广泛采用。2026年7月，国际标准化组织正式发布ISO11290-1:2017/Amd1:2026修正案，针对分析前样品储存条件及培养基和试剂性能试验的对照菌株选择作出技术修订。本报告系统梳理该修正案的修订背景、核心技术内容、验证依据及预期影响，深入分析其对实验室检测准确性、样品完整性和培养基质量控制的优化作用。报告指出，该修正案的发布实施将进一步强化国际食品微生物检测方法的科学性和一致性，对完善我国食品安全标准体系具有重要参考价值，也为后续标准修订工作提供了明确的技术方向。关键词：食品微生物学；单核细胞增生李斯特菌；检测方法；样品储存；对照菌株；培养基性能试验；标准修订Keywords:Foodmicrobiology;*Listeriamonocytogenes*;Detectionmethod;Samplestorage;Controlstrain;Culturemediaperformancetesting;Standardamendment1引言1.1研究背景单核细胞增生李斯特菌是引起人畜共患李斯特菌病的致病菌，其感染后可导致脑膜炎、败血症等严重疾病，对孕妇、新生儿、老年人及免疫功能低下人群的致死率可高达20%至30%。该菌具有耐低温、耐酸、耐高盐等特性，可在4℃以下的冷藏环境中缓慢生长，对食品冷链安全构成特殊威胁。近年来，全球范围内因即食食品、未经巴氏消毒的乳制品、水产品等污染单核细胞增生李斯特菌而引发的食品安全事件时有发生，各国食品安全监管部门均将其列为重点监控的食源性致病菌。国际标准化组织（InternationalOrganizationforStandardization,ISO）下设的ISO/TC34/SC9（农产食品技术委员会/微生物学分技术委员会）负责食品微生物检测方法国际标准的制定与维护工作。ISO11290-1标准首次发布于1996年，后经多次修订，现行版本为ISO11290-1:2017。该标准规定了食品链中单核细胞增生李斯特菌和李斯特菌的检测方法，采用增菌培养结合选择性分离的方法原理，适用于人类消费和动物饲料用产品的检测。作为国际公认的水平检测方法，该标准已被世界各国广泛采用，也是我国食品安全国家标准GB4789.30-2016的重要技术参考。1.2修订必要性ISO标准体系建立了系统的周期性复审机制（systematicreview），以确保标准的科学性和适用性持续符合技术发展需求。ISO11290-1:2017在实施过程中，国际实验室间的验证研究表明两个关键技术环节存在优化空间：第一，分析前样品储存条件不明确。食品微生物检测中，样品从采集到分析的时间间隔和储存条件直接影响目标菌的存活率和检出率。原标准虽对实验室收到样品后的处理时限有所规定，但对运输过程中的温度控制、储存时限的具体参数缺乏统一的技术规范。不同实验室在样品储存环节的操作不一致导致检测结果的可比性受到影响。第二，对照菌株的使用存在交叉耐药和辨识度问题。原标准中用于培养基和试剂性能试验的对照菌株在部分选择性培养基上呈现的典型特征不够明显，且某些对照菌株对选择性添加剂的耐受性偏高，可能造成培养基选择性评价的偏差。随着菌株资源库的更新和溯源技术的进步，采用特征更典型、稳定性更优异的替代菌株成为必要。基于上述技术需求，ISO/TC34/SC9启动了对ISO11290-1:2017的修订程序，最终形成并发布了修正案ISO11290-1:2017/Amd1:2026。1.3标准的国际地位与应用现状ISO11290-1标准在全球食品安全检测领域具有基础性地位。世界卫生组织（WHO）和联合国粮食及农业组织（FAO）联合成立的食品法典委员会（CAC）在其相关操作规范中推荐该方法为李斯特菌检测的参考方法。欧盟、美国、日本等主要经济体均将该方法和其前序版本等同采用为国家或区域性标准。我国现行食品安全国家标准GB4789.30-2016《食品安全国家标准食品微生物学检验单核细胞增生李斯特氏菌检验》在技术原理和方法流程上与ISO11290-1保持一致性。2标准修订的核心技术内容2.1分析前样品储存要求的补充2.1.1修订内容概述修正案在ISO11290-1:2017第5章中新增了对分析前样品储存条件的明确规定。该补充内容要求：样品在采集后应尽快送往实验室，在运输和储存过程中应保持低温（建议2℃至8℃），并避免温度波动；样品从采集到开始分析的间隔时间应尽可能缩短，在冷藏条件下一般不应超过24小时；对于易腐食品或高污染风险的样品，应优先安排检测。同时，修正案要求实验室对接收样品时的状态进行记录，包括样品温度、包装完整性、运输时间等信息，以确保分析结果的可靠性。2.1.2科学依据食品微生物检测的分析结果受样品中目标菌初始载量以及储存过程中微生物群落变化的影响，因而分析前样品储存条件直接关系到检测的准确性。研究表明，单核细胞增生李斯特菌在低温条件下虽可存活，但长时间冷藏可能导致亚致死损伤（sublethalinjury），影响其在选择性增菌液中的复苏效率。同时，背景微生物群落的增殖可能抑制目标菌的生长，导致假阴性结果。因此，明确统一的储存要求是确保不同实验室间检测结果可比性的前提条件。2.1.3实施要点修正案对样品储存的具体实施提出了以下技术要求：（1）运输过程应采用保温箱或冷藏设备维持样品处于低温状态，避免温度超过10℃；（2）实验室接收样品后应立即进行登记和处理，若无法立即检测，应将样品置于2℃至8℃条件下保存；（3）对冷冻样品应在2℃至8℃条件下解冻，解冻后不应重新冷冻；（4）实验室应在检测记录中完整标注样品的储存条件和时间信息，以便结果追溯和质量评估。上述要求有助于减少样品处理环节的差异，提高检测结果的准确性和可比性。2.2对照菌株的变更2.2.1修订内容概述修正案对ISO11290-1:2017中培养基和试剂性能试验所用对照菌株进行了变更。原标准中用于阳性对照的菌株被替换为一株经过全面表征（fullycharacterized）的替代菌株。新选用的对照菌株在选择性培养基上具有更典型和稳定的菌落形态特征，生化反应结果更明确，且在不同批次的培养基上表现出更好的一致性，有利于实验室对培养基质量的准确评价。2.2.2变更原因分析原对照菌株在实际使用中存在以下问题：（1）部分菌株在长期传代保存过程中出现了特征退化的现象，影响了性能试验结果的稳定性；（2）某些对照菌株在特定选择性培养基上的生长特征与野生菌株存在差异，不能充分反映培养基对目标菌的实际检出能力；（3）菌株在系统发育分类上的更新导致部分原有编号的菌株命名发生变化，需要与国际菌株保藏中心的最新信息保持一致。因此，采用经过严格筛选验证的替代菌株是提升培养基质量控制科学性和有效性的必要措施。2.2.3验证要求为确保更换对照菌株后的培养基性能试验仍然可靠，修正案要求实验室在采用新对照菌株时应进行平行验证。验证内容包括：（1）新旧对照菌株在关键培养基上的生长率比较；（2）新菌株的选择性培养基上典型菌落形态特征的确认；（3）新菌株在增菌液中的生长动力学评估；（4）新菌株在标准规定的贮存条件下的稳定性监测。实验室应对验证过程进行完整记录，以确保从旧菌株到新菌株的平稳过渡。2.3其他技术性调整除上述两项主要内容外，修正案还对标准文本中的一些术语定义进行了更新，使其与国际微生物学命名规则保持一致；同时修正了部分标点和格式问题，以保证标准文本的严谨性和可读性。修正案的发布不影响ISO11290-1:2017中检测方法的技术原理、主要操作步骤和结果判定准则。3参与制修订的标准化技术组织3.1ISO/TC34/SC9的组织架构ISO11290-1:2017/Amd1:2026由国际标准化组织农产食品技术委员会微生物学分技术委员会（ISO/TC34/SC9）负责制定和修订。该分技术委员会的秘书处由法国标准化协会（AFNOR）承担。ISO/TC34/SC9的工作范围涵盖食品链微生物学的全部标准化领域，包括检测方法、微生物风险分析、微生物生态学等。目前，该分技术委员会下设多个工作组（WorkingGroup,WG），分别负责不同技术领域的标准制定和维护工作。ISO/TC34/SC9的成员包括来自全球60余个国家的标准化机构，同时与国际食品微生物规格委员会（ICMSF）、世界卫生组织、联合国粮食及农业组织以及国际乳品业联合会（IDF）等国际组织保持密切合作。该委员会按照ISO/IEC导则规定的程序开展标准的制定、修订和复审工作，确保标准制定的公开性、透明性和协商一致性。3.2标准修订的过程本修正案的制定遵循ISO标准修订的标准流程。2023年，ISO/TC34/SC9在周期性复审中确认了对ISO11290-1:2017进行修订的必要性，随后成立专门工作组负责起草修正案文本。工作组经过多轮讨论和专家论证，汇集了来自各国标准化机构、食品安全监管机构、科研院所和检测机构的意见，形成了工作组草案（WD），经委员会草案（CD）和国际标准草案（DIS）等阶段，最终获得各成员国投票通过，完成了全部审批流程。3.3主要参与单位——法国标准化协会（AFNOR）法国标准化协会（AssociationFrançaisedeNormalisation,AFNOR）作为ISO/TC34/SC9的秘书处承担单位，在本修正案的制定过程中发挥了核心组织作用。AFNOR成立于1926年，是法国国家标准化机构，负责协调和推动法国各领域的标准化工作，代表法国参与国际和欧洲标准化组织的活动。AFNOR在食品微生物学标准化领域具有深厚的技术积累和丰富的组织经验。作为ISO/TC34/SC9的秘书处，AFNOR承担了以下重要职责：（1）组织协调成员国之间的意见交流和技术讨论；（2）管理标准制定各阶段的工作程序和文件流转；（3）保障标准制定过程的透明性和公正性；（4）协调与其他国际标准化组织的技术联络；（5）推动标准在国际范围内的应用和推广。在ISO11290-1:2017/Amd1:2026的制定过程中，法国国家食品环境及职业健康安全署（ANSES）下属的食品安全实验室为修正案的技术内容提供了重要的实验数据和验证支持。该实验室在单核细胞增生李斯特菌检测方法的验证和标准化方面拥有数十年的研究经验，其研究成果为本修正案中对照菌株的筛选和样品储存条件的确定提供了关键技术依据。此外，来自德国联邦风险评估研究所（BfR）、美国食品药品监督管理局（FDA）、加拿大健康署等机构的专家也积极参与了本修正案的技术审查工作，为提升标准的国际适用性作出了积极贡献。4标准实施的预期影响4.1对实验室检测能力的影响本修正案的发布实施将对全球范围内采用ISO11290-1:2017标准的食品微生物检测实验室产生直接的技术影响。在样品储存方面，新要求将推动实验室完善样品接收、登记、储存和记录的管理流程。实验室需要配备符合要求的冷藏设施，并建立样品温度监控和记录制度。对于部分基层实验室而言，可能需要在设施设备和人员培训方面进行额外投入。但从长远来看，标准化的样品处理流程将有助于降低因操作差异导致的检测结果偏差，提升实验室的整体检测水平。在对照菌株变更方面，实验室需要及时从认可的菌株保藏中心获取新的对照菌株，并对保藏的菌株进行确认。同时，实验室应按照修正案要求开展新旧菌株的平行验证，完成培养基性能试验的有效性确认后方可正式启用新菌株。这一过程要求实验室具备相应的微生物学技术能力和质量管理水平。4.2对食品安全监管的影响本修正案的实施将进一步提升国际社会对食品中单核细胞增生李斯特菌检测结果的一致性和可信度，为各国食品安全监管机构提供更加科学可靠的技术依据。由于样品储存条件的标准化，不同国家、不同实验室之间的检测结果将具有更好的可比性，有利于国际食品贸易中食品安全问题的协调处理和争端解决。在食品生产企业的内部质量管理方面，本修正案所提供的明确技术要求将帮助企业建立更加规范的微生物检测流程。特别是对于即食食品、乳制品等高风险食品的生产企业，规范的样品处理和培养基质量控制将有助于提高产品安全水平的监控效果，降低李斯特菌污染风险。4.3对国际标准协调发展的影响ISO11290-1:2017/Amd1:2026的发布也为我国食品安全标准的制修订工作提供了重要的参考。我国现行食品安全国家标准GB4789.30-2016在技术内容上与ISO11290-1:2017保持了较高的一致性。随着本修正案的发布，我国相关标准化技术机构应密切关注其技术内容的发展变化，适时启动相应的标准比对和技术评估工作，为我国标准的后续修订做好技术准备。5结论与展望ISO11290-1:2017/Amd1:2026修正案的发布，是国际食品微生物检测标准持续改进和动态完善的具体体现，也是ISO标准体系科学性和适用性的有力证明。本修正案针对分析前样品储存条件的技术空白和对照菌株的实际使用问题进行了精准修订，体现了国际标准化工作“问题导向、需求牵引”的基本原则。从标准化方法论的角度看，本修正案的确立表明，食品微生物检测标准的完善不仅在检测方法本身的技术路线优化，还需覆盖“从样品采集到结果报告”的全流程质量控制。分析前环节的管理和技术要求，与检测方法的核心步骤同等重要，是确保检测结果准确性和可比性的基础保障。这一理念对我国食品微生物检验标准的制修订具有重要启示。展望未来，随着分子生物学技术的快速发展和数字化技术的广泛应用，食品微生物检测标准化工作将面临新的机遇和挑战。下一代测序（NGS）、数字PCR等新型检测技术的标准化需求将日益迫切，实验室信息管理系统（LIMS）与标准方法的深度融合也将成为发展趋势。同时，抗菌药物耐药性、微生物组学等新兴领域对标准化工作提出了新的需求。建议我国相关标准化技术机构继续密切跟踪ISO/TC34/SC9的工作动态，积极参与国际标准的制修订工作，加强我国在国际食品微生物标准化领域的话语权和影响力。同时，应加快推动本修正案在我国的转化应用研究，为完善我国食品安全标准体系、提升食品安全保障水平提供有力的技术支撑。参考文献[1]ISO11290-1:2017,Microbiologyofthefoodchain—Horizontalmethodforthedetectionandenumerationof*Listeriamonocytogenes*andof*Listeria*spp.—Part1:Detectionmethod.Geneva:Internati