TACSS 001-2025 抗病大粒型水稻两系不育系选育技术规程

65.160CCSx87T/ACSS团体标准T/ACSS001-2025--4-1发布T/ACSS001-2025前言本文件按照1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由安徽省农业科学院水稻研究所提出并归口。市农业技术推广中心。罗志祥。本文件为首次发布。1T/ACSS001-2025优质抗病大粒型水稻两系不育系选育技术规程1范围子标记辅助选择、选育技术等要求。本文件适用于长江中下游优质抗病大粒型水稻两系不育系早代分子标记辅助选育及后代大田选择。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文(包括所有的修改单适用于本文件。GB/T19557.7植物品种特异性、一致性和稳定性测试指南水稻NY/T1300农作物品种试验与信息化技术规程水稻NY/T593食用稻品种品质NY/T1215水稻光、温敏雄性核不育系育性鉴定规程DB52/T1501.1农作物抗病性鉴定技术规范第1DB32/T1122水稻品种（系）抗白叶枯病鉴定方法与抗性评价技术规程3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1长日高温光照时间≥，日平均温度≥23.5℃3.2短日低温光照时间≤，日平均温度≤23.5℃3.3大粒型两系不育系千粒重≥25g3.3一般配合力（）一个亲本（纯系、自交系或品种）在多种杂交组合中所表现出来的平均效应。4仪器设备及试剂4.1仪器设备2T/ACSS001-2025水浴锅、台式高速冷冻离心机，电泳槽和电泳仪，振荡器，电子天平，凝胶成像仪，-20℃冰箱，水平摇床，移液器、仪、微波炉、高压灭菌锅。4.2试剂EDTA-NaH₂O5000bpDNAMarker50bpDNAMarkerNaOHNaCl175%SDS2TaqMasterMixPlus)6×LoadingBufferNN-₃纯水，尿素，溴化乙锭，TEMED，，过硫酸铵，甲醛。5溶液配制溶液配制方法参考《分子克隆实验指南（第四版）》。6引物序列1GW8Xa39、Pita、等部分基因的引物序列。表1各基因对应的分子标记引物序列基因GW8GW8-FGW8-RXa39-FXa39-RPita-F5‘-TTTCAGTGTCCTCCTGTCTG-3’5‘’5‘’5‘’5‘GCA-3’5‘’5‘’5‘’Xa39Pita-RALK7目标基因分子标记辅助选择7.1基因组提取基因组提取等技术均参照《分子克隆试验指南（第四版）》。7.2扩增利用仪进行扩增，反应体系为μ20·模板DNA1μ，25·0.6μ2·uL-1引物0.7μ2.5·L-10.2μ10×缓冲液1μ5·μTaqDNA0.1μ，6.4μ。反应在（MJResearch，）等PCR仪上进3T/ACSS001-202595℃预变性594℃30s55℃退火30s72℃延伸45s35个循环；72延伸7，最后15℃7.3基因检测扩增产物在聚丙烯酰胺凝胶或琼脂糖上进行电泳。例如，图1是、Pita、Xa39、GW8等基因电泳图。图1A图1B图1C图1D图、、Xa39、等基因电泳图图1为基因扩增结果MDNAP1P21~41为Pita基因扩增结果MDNAP1：阳性对照，P2：阴性对照，1~61为Xa39基因扩增结果M：DNA，P1：阳性对照，：阴性对照，1~4：单株；图1D为GW8增结果MDNA，P1：阳性对照，P2：阴性对照，：单株；7.4标记辅助选择根据基因检测的结果，确定选留个体。8选育技术8.1亲本选择的原则互补原则双亲都具有较多的优点，没有突出的缺点，母本还应具有优质特点（如含ALK基因），父本还应PitaXa39GW8补。4T/ACSS001-2025适应性原则亲本之一最好是能适应当地条件、综合性状较好的推广品种。遗传差异原则注意亲本间的遗传差异，选用生态类型差异较大，亲缘关系较远的亲本材料相互杂交。配合力原则杂交亲本应具有较好的配合力，选择一般配合力高的亲本。8.2栽培管理栽培管理参照NY/T1300中要求执行8.3亲本选配PitaXa21Xa23Xa39GW8等基因）水稻亲本为父本杂交，获得杂交种（F18.4病区试验点选择病区试验点应基本满足稻瘟病或和白叶枯病发病条件，具有多年稻瘟病或/和白叶枯病高发情况。8.5杂交后代优良单株筛选8.5.1初选11F220000株，取各单株叶片，提取叶片，进行目标基因分子标记辅助选择等。8.5.2复选8.5.2.15F3秧苗3-4叶期进行稻瘟病接种鉴定，在剑叶抽出时进行白叶枯病接种鉴定，鉴定方法分别参照DB52/T1501.1、DB32/T1122。抽穗期后对农艺性状优良的不育单株进行割茬，并最大量分株移栽，在水稻孕穗期进行稻瘟病接种鉴定，鉴定方法参照DB52/T1501.1。8.5.2.2结合F3代糙米外观品质筛选结果，成熟期收获中抗及以上白叶枯病和稻瘟病单株种子F48.5.2.3称重F4代单株种子，并标记千粒重≥大粒型两系不育系单株。8.5.2.4NY/T593,选择品质指标达二级及以上优选单株。8.5.2.5在短日低温条件下种植F4GB/T19557.7，并标记优选株系。未稳定的株系，标记优选单株，重复复选步骤。5T/ACSS001-20258.5.3决选8.5.3.1在复选的基础上，在长日、高温条件下单株种植F5代株系，继续观察田间农艺性状，检测白叶2表2选育目标表选育目标指标白叶枯稻瘟病