生物制品干燥失重测定指南（试行）

生物制品干燥失重测定指南（试行）1适用范围本指南适用于中国境内上市的疫苗类、抗血清/抗毒素类、重组蛋白/多肽类、血液制品类、诊断用生物制品类、基因/细胞治疗类生物制品的原料、辅料、中间品、成品的干燥失重测定，不适用于含有大量放射性组分的生物制品（相关产品可参照本指南制定专属测定方案并报备监管部门）。2规范性引用文件《中华人民共和国药典》2025年版三部通则0831干燥失重测定法、GB/T6682-2008分析实验室用水规格和试验方法、GB/T8170-2008数值修约规则与极限数值的表示和判定、JJG1036-2022电子天平检定规程、JJF1101-2019环境试验设备温度、湿度校准规范、《生物制品生产检定用菌毒种管理规程》《药品生产质量管理规范（2010年修订）》生化药品附录。3术语和定义3.1干燥失重：指待测样品在规定的温度、压力、干燥时间条件下干燥至恒重后，所减失的重量占供试品初始重量的百分比，减失组分包括游离水、结合水、挥发性有机溶剂及常压/规定条件下可挥发的小分子降解产物。3.2恒重：指供试品连续两次干燥或炽灼后称重的差异在0.3mg及以下的重量，对取样量小于0.5g的热敏性生物制品、微量制剂，恒重差异可放宽至0.2mg，需在检验记录中明确标注。3.3空白试验：指在不加供试品的情况下，按照与样品测定完全相同的操作步骤、参数开展的平行试验，用于校正干燥设备、称量容器、环境因素带来的系统误差。4测定原理供试品中的可挥发性组分在规定条件下受热升华或汽化逸出，通过测定干燥前后供试品的重量差，计算减失重量的占比；生物制品干燥失重测定过程中需控制条件避免供试品发生不可逆降解产生额外挥发性组分，保证测定结果的准确性。5设备与材料5.1分析天平：分度值≤0.1mg（十万分之一级），最大称量值不小于200g，需按照JJG1036-2022要求每年检定至少1次，日常使用前需用10mg、100mg、10g三级标准砝码校准，示值误差≤±0.1mg方可使用，天平放置于恒温恒湿实验室（温度20℃±2℃，相对湿度45%~60%），水平放置，预热时间不少于30min。5.2干燥设备5.2.1常压电热恒温鼓风干燥箱：控温范围40℃~200℃，温度波动度≤±1℃，温度均匀度≤±2℃，带独立过温保护装置，按照JJF1101-2019要求每季度校准1次，箱内配备经校准的铂金电阻温度探头，实时监测箱内温度。5.2.2减压干燥箱（真空干燥箱）：控温范围室温~150℃，温度波动度≤±2℃，真空度可调范围0Pa~101kPa，极限真空度≤133Pa（1mmHg），配备真空度校准接口，每季度校准1次真空度，误差≤±10Pa，箱门密封胶圈无老化破损。5.2.3冷冻干燥机：冷阱极限温度≤-55℃，极限真空度≤10Pa，板层温度可调范围-50℃~50℃，冷阱有效容积不小于4L，每半年校准1次冷阱温度、真空度、板层温度。5.3干燥器具5.3.1称量瓶：分为低硼硅玻璃称量瓶（适用于105℃常压干燥、减压干燥）、铝制称量瓶（适用于冷冻干燥、干燥剂干燥），规格为30mm×15mm（微量样品用）、50mm×30mm（常规样品用），瓶身与瓶盖配套编号，编号采用耐高温、耐磨损的蚀刻标记，不得使用油性记号笔、标签纸标记。5.3.2干燥器：玻璃真空干燥器或普通干燥器，规格根据样品量选择，内置有效干燥剂，干燥器密封胶圈涂抹真空硅脂保证密封性，每季度检查密封性，真空干燥器抽真空至≤133Pa后静置24h，真空度上升≤10Pa为合格。5.3.3其他器具：平头不锈钢玻璃棒（无毛刺，经105℃干燥备用）、不锈钢坩埚钳（前端包裹聚四氟乙烯避免刮伤称量瓶）、一次性无粉乳胶手套、生物安全柜（适用于处理含致病性微生物的样品）、高压灭菌器（适用于污染器具的灭菌处理）。5.4试剂与耗材5.4.1干燥剂：五氧化二磷（分析纯，游离酸含量≤0.01%，无挥发性杂质），适用于所有干燥场景；变色硅胶（钴指示型，120℃干燥2h至完全蓝色后方可使用），仅适用于样品冷却过程的干燥；无水氯化钙（分析纯），仅适用于不与氯化钙发生反应的中性样品干燥。5.4.2吸收剂：氢氧化钠颗粒（分析纯），用于吸收含酸性挥发性组分样品的挥发物；硼酸颗粒（分析纯），用于吸收含碱性挥发性组分样品的挥发物；分子筛（4A型），用于吸收干燥用惰性气体中的水分。5.4.3试验用水：符合GB/T6682-2008要求的一级水，电导率≤0.01mS/m（25℃），总有机碳≤50μg/L。5.4.4惰性气体：高纯氮气（纯度≥99.999%），经4A分子筛干燥后使用。6人员要求6.1检验人员需持有生物制品检验岗位资质证书，经过干燥失重测定专项操作培训并考核合格，熟悉本指南要求、《中华人民共和国药典》相关规定及所检样品的生物安全风险等级。6.2处理含致病性微生物的样品时，检验人员需符合对应级别生物安全实验室的操作资质要求，严格执行生物安全操作规范。6.3检验人员需每年参加至少1次干燥失重测定比对试验，测定结果与参考值偏差≤5%方可继续从事相关检验工作。7测定方法选择需根据供试品的热稳定性、组分特性选择合适的测定方法，具体如下：7.1常压恒温干燥法：适用于热稳定性良好、熔点≥110℃、不含挥发性有机溶剂、105℃条件下不发生降解的生物制品，包括人血白蛋白、静注人免疫球蛋白、多糖类疫苗原料、灭活疫苗辅料、重组单抗原料等，干燥温度为105℃±2℃，特殊含糖样品（如含糖冻干疫苗）可调整为80℃±2℃。7.2减压干燥法：适用于热稳定性较差、105℃条件下易降解、含有易挥发性有机溶剂、熔点<110℃的生物制品，包括减毒活疫苗冻干中间品、重组多肽制品、酶类生物制品、含乙醇/丙酮残留的样品，干燥温度一般为60℃±2℃，特殊热敏样品可调整为40℃±2℃，真空度控制为≤133Pa。7.3干燥剂干燥法：适用于受热极易分解、易升华、加热条件下易发生聚合反应的生物制品，包括部分基因治疗载体制品、含有挥发性活性成分的外用生物制品，采用五氧化二磷作为干燥剂，常温常压下干燥。7.4冷冻干燥法：适用于热敏性极强、常压/减压加热条件下均会发生不可逆降解或组分损失的生物制品，包括mRNA疫苗、CAR-T细胞制剂冻存液、活病毒载体疫苗等，采用冷冻升华方式去除挥发性组分。8操作步骤8.1通用操作步骤8.1.1称量瓶恒重：将清洗干净的称量瓶置于对应测定方法的干燥条件下预干燥，取出后置于装有五氧化二磷的干燥器中冷却30min，精密称重；重复干燥1h（干燥剂法为4h、冷冻干燥法为2h）、冷却、称重，直至连续两次重量差≤0.3mg（微量样品≤0.2mg），记录恒重后的称量瓶重量为M0，单位为g，保留至小数点后6位。8.1.2取样：根据供试品的预计干燥失重调整取样量，预计干燥失重<1%时，取样量为1.0~2.0g；预计干燥失重为1%~10%时，取样量为0.5~1.0g；预计干燥失重>10%时，取样量为0.2~0.5g。取样时需保证样品均匀：冻干样品需去除铝盖、胶塞后快速捣碎混匀，避免吸湿；液体制剂需摇匀后精密移取，置于预恒重的称量瓶中先经80℃水浴蒸干后再进行干燥；半固体制剂需均匀铺于称量瓶底部，厚度≤5mm；含致病性微生物的样品需先经灭活验证合格后再取样。将样品置于恒重的称量瓶中，精密称重，记录总重量为M1，单位为g，保留至小数点后6位，计算供试品初始重量S=M1-M0。8.1.3干燥：将盛有供试品的称量瓶瓶盖斜置于瓶口，保证气体流通，置于选定的干燥设备中按照规定参数干燥。8.1.4冷却与称重：干燥完成后，用坩埚钳快速取出称量瓶，立即盖紧瓶盖，置于装有五氧化二磷的干燥器中冷却至室温（20℃±2℃），冷却时间固定为30min（冷冻干燥法为15min），精密称重，记录总重量为M2，单位为g，保留至小数点后6位。8.1.5恒重确认：重复干燥1h（减压干燥法为2h、干燥剂法为4h、冷冻干燥法为2h）、冷却、称重，直至连续两次重量差≤0.3mg（微量样品≤0.2mg），取两次称重中较小的数值作为最终M2。8.1.6空白试验：每批次测定需同步开展2份空白平行试验，取预恒重的空称量瓶按照完全相同的步骤操作，计算空白减失重量B，取2份空白的平均值参与计算，若空白减失重量>0.2mg或两份空白偏差>0.1mg，判定本次试验系统误差不合格，需排查设备、干燥剂问题后重新测定。8.2各方法专属操作步骤8.2.1常压恒温干燥法：提前开启干燥箱，待温度升至规定温度并稳定30min后，将称量瓶置于干燥箱中层网格架上，样品放置量不得超过干燥箱容积的1/2，从温度恢复至规定值时开始计时，干燥时间2~4h（80℃干燥时延长至6h）。若干燥过程中样品出现焦化、变色、融化现象，需立即停止试验，更换为更低温度的干燥方法重新测定。8.2.2减压干燥法：提前将真空干燥箱预热至规定温度，稳定30min后放入称量瓶，关闭箱门，缓慢抽真空至规定真空度，从真空度达到要求时开始计时，干燥时间4~6h；干燥完成后，缓慢通入经干燥的高纯氮气至箱内压力恢复至常压，开腔取瓶，通入氮气的流速控制为1L/min以内，避免样品被气流吹散。8.2.3干燥剂干燥法：将称量瓶置于装有足量五氧化二磷的干燥器中，干燥剂用量至少占干燥器容积的1/3，干燥剂表面铺一层定性滤纸避免粉末粘附称量瓶，干燥时间不少于24h，每4h称重一次直至恒重，干燥剂出现结块、表面潮解现象时需立即更换。8.2.4冷冻干燥法：将盛有样品的称量瓶置于-40℃超低温冰箱中预冻4h，确保样品完全凝固；提前开启冷冻干燥机，待冷阱温度降至-55℃以下后，将样品置于板层上，关闭干燥腔，抽真空至≤10Pa，设置板层升温程序：-10℃维持12h，10℃维持6h，25℃维持4h，待冷阱无新增冷凝物后，通入干燥高纯氮气至常压，取出样品称重。9结果计算与判定9.1计算公式：干燥失重（%）=（M1-M2-B）/（M1-M0）×100%，其中B为空白试验平均减失重量，单位为g，若空白试验出现增重，B取负值。9.2平行样要求：每个供试品需同步测定2份平行样，平行样结果的相对偏差需符合以下要求：干燥失重<1%时，相对偏差≤10%；干燥失重1%~10%时，相对偏差≤5%；干燥失重>10%时，相对偏差≤3%。不符合偏差要求的需重新取样测定。9.3数据修约：测定结果按照GB/T8170-2008要求修约至小数点后两位，或按照对应产品质量标准的要求修约。9.4结果判定：测定结果符合对应产品质量标准中干燥失重的限度要求则判定为合格，超出限度则判定为不合格，需进行复验。10质量控制要求10.1设备质控：干燥箱温度每日测定3个点位（上层、中层、下层），点位温差≤2℃方可使用；天平每日使用前校准，示值误差≤±0.1mg方可使用；真空干燥箱真空度每周校准一次，误差≤±10Pa方可使用；干燥器干燥剂每日检查，变色硅胶变红、五氧化二磷结块需立即更换。10.2试验质控：每20批次供试品需插入1份生物制品干燥失质量控品（国家药品监督管理局认可的有证标准物质），质控品测定值与标示值的偏差≤5%时，判定该批次测定结果有效，否则所有样品需重新测定。10.3方法验证：针对全新产品建立干燥失重测定方法时，需开展方法学验证：（1）专属性：采用卡尔费休法测定供试品水分，与干燥失重结果的差值≤1%，证明无额外降解产生的挥发性组分；（2）精密度：6份平行样测定结果的相对标准偏差（RSD）≤5%；（3）准确度：加样回收率为95%~105%；（4）耐用性：温度波动±2℃、干燥时间波动±1h时，测定结果偏差≤5%，验证报告需报监管部门备案后方可采用该方法。11生物安全要求11.1涉及一类、二类病原微生物的供试品，需在对应级别的生物安全实验室中完成灭活处理，经灭活验证合格（无菌试验、活性测定均为阴性）后，方可转移至普通理化实验室开展测定。11.2处理含传染性组分的供试品时，需在二级及以上生物安全柜中操作，穿戴符合要求的防护服、手套、口罩，操作过程中避免样品洒漏，若发生样品泄漏需立即按照生物安全应急预案处理。11.3用过的称量瓶、玻璃棒、剩余样品需经121℃高压灭菌30min后再进行清洗或废弃处理，所有污染废弃物需按照医疗废物管理要求处置，不得随意丢弃。12异常情况处理12.1样品焦化、变色：原因是干燥温度过高、供试品热稳定性差，需降低干燥温度或更换为减压干燥法、冷冻干燥法，重新取样测定。12.2恒重后重量上升：原因是供试品吸湿性强、干燥剂失效、冷却过程中吸湿，需更换新的五氧化二磷干燥剂，冷却、称重过程减少供试品暴露在空气中的时间，重新测定。12.3样品喷溅、损失：原因是干燥升温过快、减压放气速度过快、冷冻干燥预冻不充分，需重新取样，控制升温速度、放气速度，保证预冻完全后再开展测定。12.4平行样偏差过大：原因是样品不均匀、操作过程洒漏、天平不稳定，需重新混匀供试品后取样，校准天平，规范操作后重新测定。13记录与报告管理13.1检验记录需包含以下内容：供试品名称、批号、规格、生产单位、取样量、测定方法、干燥温度、真空度、干燥时间、称量瓶编号、M0、M1、M2、空白值、计算结果、平行样偏差、质控品测定结果、测定人员及复核人员签名、测定日期，记录不得涂改，需修改时应划改并签名注明日期。13.2检验报告需包含以下内容：