生物制品镁盐测定指南（试行）

生物制品镁盐测定指南（试行）一、适用范围

本指南适用于疫苗类、抗毒素/抗血清类、血液制品类、重组蛋白/多肽类、细胞与基因治疗类、体外诊断试剂类生物制品的原辅材料、中间品、成品中镁盐（以Mg²+计）的定性检查与定量测定。本指南涵盖络合滴定法、火焰原子吸收分光光度法（FAAS）、电感耦合等离子体发射光谱法（ICP-OES）、石墨炉原子吸收分光光度法（GFAAS）4种检测方法，各方法适用场景如下：

1.络合滴定法：适用于镁含量≥10mg/L的样品，多用于无机盐原辅材料、含镁佐剂半成品、高含量镁添加剂的常量检测；

2.火焰原子吸收分光光度法：适用于镁含量1mg/L~10mg/L的样品，多用于常规成品、中间品的微量检测；

3.电感耦合等离子体发射光谱法：适用于镁含量0.1mg/L~10mg/L的样品，可同时检测多元素，多用于多元素同步筛查场景；

4.石墨炉原子吸收分光光度法：适用于镁含量<0.1mg/L的样品，多用于细胞治疗产品、核酸类产品等痕量镁检测场景。

二、规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件；凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

1.《中华人民共和国药典》2025年版三部通则0406原子吸收分光光度法、通则0411电感耦合等离子体发射光谱法、通则0412电感耦合等离子体质谱法、通则3101镁盐检查法；

2.GB/T601-2016化学试剂标准滴定溶液的制备；

3.GB/T27417-2017合格评定化学分析方法确认和验证指南；

4.GB5009.242-2017食品安全国家标准食品中镁的测定。

三、术语和定义

1.镁盐：本指南中镁盐指样品中以游离态、络合态存在的所有镁元素折算为Mg²+的总量；

2.检出限（LOD）：指特定方法可定性检出样品中镁的最低浓度，对应3倍空白样品测定值的标准偏差；

3.定量限（LOQ）：指定量测定样品中镁的最低浓度，对应10倍空白样品测定值的标准偏差，且回收率、精密度符合方法学要求；

4.基质干扰：指样品中除镁以外的其他组分对测定结果产生的正向或负向偏差。

四、方法选择原则

1.含量优先原则：按样品预期镁含量选择对应灵敏度的方法，优先选择操作简便、成本较低的方法，常量样品优先选择络合滴定法，痕量样品优先选择GFAAS；

2.基质适配原则：高基质复杂度样品（如高蛋白、高盐、含佐剂样品）优先选择抗干扰能力强的方法，避免基质干扰导致结果偏差；

3.效率优先原则：需同时测定钙、钾、钠等其他元素的样品，优先选择ICP-OES类多元素检测方法。

五、检测方法及操作流程

（一）络合滴定法

1.原理

在pH9.8~10.2的氨-氯化铵缓冲体系中，乙二胺四乙酸二钠（EDTA-2Na）可与镁离子形成稳定的1:1型络合物，络合稳定常数为8.69；以铬黑T为指示剂，铬黑T可与镁离子形成酒红色络合物，其稳定常数低于EDTA-镁络合物，滴定终点时EDTA置换出络合态铬黑T，溶液由酒红色变为纯蓝色，根据EDTA-2Na标准滴定溶液的消耗量计算镁离子含量。

2.试剂与材料

除非另有说明，所有试剂均为分析纯，水为符合GB/T6682规定的三级水。

（1）0.05mol/LEDTA-2Na标准滴定溶液：按GB/T601规定制备与标定，标定相对偏差≤0.2%；若样品镁含量较低，可稀释为0.01mol/L标准滴定溶液，现用现标。

（2）氨-氯化铵缓冲液（pH10.0）：称取54g氯化铵，加200mL水溶解，加350mL浓氨水，用水稀释至1000mL，pH计校准值为9.8~10.2。

（3）铬黑T指示剂：称取0.1g铬黑T，加10g氯化钠研磨均匀，密封保存；或配制10g/L铬黑T乙醇溶液，现用现配。

（4）三乙醇胺溶液（1+2）：量取1体积三乙醇胺，加2体积水混匀，用于掩蔽Fe³+、Al³+干扰。

（5）硫化钠溶液（20g/L）：称取20g硫化钠，加水溶解并定容至1000mL，用于掩蔽Cu²+、Pb²+、Zn²+等重金属干扰。

（6）盐酸羟胺溶液（10g/L）：称取10g盐酸羟胺，加水溶解并定容至1000mL，用于还原高价金属离子，避免指示剂被氧化失效。

（7）草酸铵溶液（40g/L）：用于沉淀去除高钙样品中的Ca²+，避免钙离子消耗滴定液。

3.仪器设备

（1）分析天平：分度值0.1mg；

（2）酸式滴定管：50mL或10mL，精度A级；

（3）pH计：精度±0.02；

（4）马弗炉：温度精度±50℃；

（5）恒温水浴锅：温度控制精度±2℃。

4.供试品前处理

（1）低基质水溶性样品：如氯化钠、蔗糖、注射用水等原辅材料，准确称取适量样品（折算镁含量0.5~5mg），加水溶解并定容至50mL，直接待测。

（2）高蛋白样品：如血清、免疫球蛋白原液、白蛋白制品等，准确称取15g样品，加入等体积10%三氯乙酸溶液，涡旋混匀后静置10min，12000r/min离心10min，取全部上清液待测；若蛋白沉淀不完全，可采用干法消解：将样品置于瓷坩埚中，水浴蒸干后于马弗炉550℃灰化46h，冷却后加入2mL1mol/L盐酸溶解残渣，转移至50mL容量瓶定容待测，灰化温度不得超过600℃，避免镁挥发损失。

（3）高钙样品：如含钙佐剂疫苗、钙补充剂类生物制品，按上述前处理得到溶液后，加入10mL草酸铵溶液，搅拌均匀后静置30min，过滤弃去沉淀，收集滤液待测。

5.测定步骤

准确移取处理后的供试品溶液至锥形瓶中，加水稀释至50mL，依次加入5mL三乙醇胺溶液、2mL盐酸羟胺溶液、5mL氨-氯化铵缓冲液、2滴硫化钠溶液，摇匀后加入3滴铬黑T指示剂（或0.1g固体铬黑T指示剂），用EDTA-2Na标准滴定溶液滴定至溶液由酒红色变为纯蓝色，30s不褪色即为终点，同时做空白试验。

若样品颜色较深干扰终点判定，可采用电位滴定法替代目视滴定，采用铂电极-甘汞电极对，滴定至电位突跃点即为终点。

6.结果计算

式中：

-ω(Mg2+)为镁离子质量分数，单位为%；若为液体样品，单位为g/100mL，m替换为取样体积；

-V1为供试品消耗EDTA-2Na标准滴定溶液的体积，单位为L；

-V0为空白试验消耗EDTA-2Na标准滴定溶液的体积，单位为L；

-c为EDTA-2Na标准滴定溶液的浓度，单位为mol/L；

-24.305为镁的摩尔质量，单位为g/mol；

-F为供试品稀释倍数；

-m为供试品取样量，单位为g。

7.注意事项

（1）严格控制体系pH值，pH<9.8时铬黑T指示剂变色不敏锐，pH>10.2时易生成氢氧化镁沉淀导致结果偏低；

（2）滴定温度需控制在20℃以上，温度过低时络合反应速率慢，易导致滴定过量；

（3）平行样测定相对偏差≤2%，加标回收率应在95%~105%范围内。

（二）火焰原子吸收分光光度法（FAAS）

1.原理

供试品经消解处理后导入空气-乙炔火焰原子化器，镁原子吸收其特征共振线285.2nm，吸光度值与镁离子浓度呈线性相关，与标准系列比较定量。

2.试剂与材料

所有试剂均为优级纯，水为符合GB/T6682规定的一级水，所有玻璃器皿均经10%硝酸浸泡24h后冲洗烘干使用。

（1）镁标准储备液（1000mg/L）：精确称取0.1658g经800℃灼烧至恒重的基准氧化镁，加入10mL1mol/L盐酸溶解，转移至100mL容量瓶定容，或使用有证标准物质。

（2）镁标准工作液：精密量取镁标准储备液，用0.2%硝酸逐级稀释为浓度0、0.1、0.2、0.5、1.0、2.0mg/L的标准系列，现用现配。

（3）氯化镧溶液（50g/L）：称取50g氯化镧（LaCl₃·7H₂O），加0.2%硝酸溶解并定容至1000mL，作为释放剂消除磷酸根、硫酸根、硅酸根的干扰。

（4）硝酸、高氯酸均为优级纯。

3.仪器设备

（1）原子吸收分光光度计，带镁空心阴极灯；

（2）微波消解仪或湿法消解装置；

（3）十万分之一分析天平；

（4）超纯水仪。

4.前处理

（1）湿法消解：准确称取0.1~1g样品至三角烧瓶，加入10mL硝酸+高氯酸（4+1）混合液，冷消化过夜，次日置于电热板上150℃加热消解，至冒高氯酸白烟、溶液澄清无色，冷却后加超纯水定容至25mL，同时做空白试验。

（2）微波消解：准确称取0.1~0.5g样品至消解罐，加入5mL硝酸、2mL30%过氧化氢，密封后按程序升温：120℃保持5min，150℃保持5min，180℃保持15min，冷却后开罐，150℃赶酸至剩余体积约1mL，超纯水定容至25mL待测。

（3）低基质澄清样品：如注射液、透析液等，可直接加入0.2%硝酸和10%体积的氯化镧溶液后直接进样测定。

5.测定步骤

（1）仪器参数设置：波长285.2nm，灯电流3~5mA，狭缝宽度0.5nm，空气流量6L/min，乙炔流量1.2L/min，燃烧器高度6mm，氘灯背景校正。

（2）标准曲线测定：将标准系列溶液分别加入10%体积的氯化镧溶液，依次进样测定吸光度，以浓度为横坐标、吸光度为纵坐标绘制标准曲线，线性相关系数应≥0.999。

（3）供试品测定：供试品溶液与空白溶液按相同比例加入氯化镧溶液，进样测定吸光度，代入标准曲线计算浓度；若供试品浓度超出线性范围，用

式中：

-ρ(Mg2+)为供试品中镁离子含量，固体样品单位为mg/kg，液体样品单位为mg/L；

-ρ1为供试品溶液中镁浓度，单位为mg/L；

-ρ0为空白溶液中镁浓度，单位为mg/L；

-V为供试品定容体积，单位为L；

-F为稀释倍数；

-m为供试品取样量，单位为kg或L。

7.注意事项

（1）每20个样品插入1个质控样和1个空白样，质控样测定值与标示值偏差≤10%，否则重新校准仪器；

（2）平行样相对标准偏差≤3%，加标回收率应在90%~105%范围内。

（三）电感耦合等离子体发射光谱法（ICP-OES）

1.原理

供试品经消解后进入电感耦合等离子体源，镁原子被激发后发射特征谱线，谱线强度与镁离子浓度呈线性相关，通过与标准系列比较定量。镁特征谱线选择主灵敏线285.213nm，次灵敏线279.553nm、280.270nm作为干扰校正备选谱线。

2.试剂与材料

同FAAS法，镁标准系列可配制为0、0.05、0.1、0.5、2.0、10.0mg/L，无需加入氯化镧溶液。

3.仪器设备

ICP-OES仪，氩气纯度≥99.999%，其余同FAAS法。

4.前处理

同FAAS法。

5.测定步骤

（1）仪器参数设置：射频功率1150W，雾化器流量0.8L/min，辅助气流量0.2L/min，等离子气流量15L/min，泵速1.5mL/min，积分时间10s。

（2）仪器调谐：导入1mg/L镁标准溶液，调整仪器参数使谱线强度稳定、背景值低、信背比≥500。

（3）标准曲线测定：依次进样测定标准系列，以浓度为横坐标、特征谱线强度为纵坐标绘制标准曲线，线性相关系数≥0.9995。

（4）供试品测定：进样测定空白与供试品溶液，若存在光谱干扰，采用干扰系数校正法或切换次灵敏线重新测定。

6.结果计算

同FAAS法，平行样相对标准偏差≤2%，加标回收率应在90%~108%范围内。

（四）石墨炉原子吸收分光光度法（GFAAS）

1.原理

供试品消解后注入石墨管，经程序升温干燥、灰化、原子化，镁原子吸收特征共振线285.2nm，吸光度与镁浓度呈线性相关，适用于痕量镁的测定。

2.试剂与材料

同FAAS法，镁标准工作液配制为0、0.5、1.0、2.0、5.0、10.0μg/L，基体改进剂为10g/L磷酸二氢铵溶液（优级纯配制）。

3.仪器设备

石墨炉原子吸收分光光度计，带热解涂层石墨管、自动进样器，其余同FAAS法。

4.前处理

同FAAS法，严格控制试剂空白与容器污染，所有容器经20%硝酸浸泡48h后使用。

5.测定步骤

（1）石墨炉升温程序：干燥阶段110℃保持30s、130℃保持20s；灰化阶段1000℃保持15s；原子化阶段2300℃保持3s（停气）；净化阶段2500℃保持3s。

（2）进样设置：进样量20μL，加入5μL基体改进剂，塞曼背景校正。

（3）标准曲线与供试品测定同FAAS法，线性相关系数≥0.995。

6.结果计算

同FAAS法，平行样相对标准偏差≤5%，加标回收率应在85%~110%范围内。

六、方法学验证要求

1.专属性：取不含镁的空白基质样品，加入相当于限度值80%、100%、120%的镁标准品，测定回收率应符合各方法要求，空白基质无特征响应，证明无基质干扰。

2.线性与范围：标准曲线线性相关系数符合各方法要求，线性范围覆盖供试品镁含量的70%~130%。

3.检出限与定量限：各方法检出限应低于限度值的1/10，定量限低于限度值的1/5，且定量限水平下回收率、精密度符合要求；其中络合滴定法LOD≤1mg/L，FAASLOD≤0.01mg/L，ICP-OESLOD≤0.005mg/L，GFAASLOD≤0.05μg/L。

4.精密度：重复性要求6份平行样测定值的相对标准偏差≤5%；中间精密度要求不同人员、不同日期、不同仪器测定的6份样品相对标准偏差≤10%。

5.准确度：采用加标回收法验证，各方法回收率符合对应要求；采用有证标准物质验证的，测定值应在标准物质的不确定度范围内。

6.耐用性：参数微小变动（如pH±0.2、消解时间±30min、仪器参数±10%波动）时，测定结果偏差≤10%，证明方法耐用性符合要求。

七、质量控制要求

1.每批次测定需同时做空白试验，空白值不得超过定量限，否则排查污染原因并重新处理样品。

2.每批次需带入至少1个质控样，质控样测定值与标示值偏差≤10%，否则重新校准仪器并复测该批次样品。

3.所有样品需做平行样，平行样相对偏差符合各方法