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文档简介
本发明公开了一种牛蛙皮源肽LGPQR及其纯化方法和应用,牛蛙皮源肽LGPQR的分子量为的牛蛙皮源肽LGPQR。本发明的一种牛蛙皮源肽LGPQR及其纯化方法和应用同时拥有较好降血糖和抗氧化功能,具有II型糖尿病药物的应用潜2多肽筛选,应用质谱仪对目标酶解粗提物中所含肽段进行8.根据权利要求2_6任意一项所述的纯化方法,9.一种如权利要求1所述的牛蛙皮源肽LGPQR的应用3物活性肽的重要潜在来源,而脯氨酸或丙氨酸在活性肽N端倒数第二位的位置对抑制DPP_示出DPP_IV抑制作用。羊皮胶原蛋白水解物中分离出胶原9肽GPAGPIGPV和胶原10肽有较好的ABTS自由基清除率活性和FRAP抗氧化活性的牛蛙皮源肽LGPQR及其纯化方法和应4选优,从筛选出的肽段中选择最高亲和力的两条肽段利用pymol软件进行位点分[0009]具体的所述建立多肽库步骤中,所述计算机辅助软件包括AutodockVina软件、5[0018]图3为本发明实施例中INTPVK多肽在DPP_IV酶口袋中的构象、在DPP_IV酶活性位骤并不排斥在所述组合步骤前后还存在其他方法步骤或在这些明确提到的步骤之间还可[0020]本发明中,所述DPP_IV酶抑制活性的验证通过DPP_IV酶在96孔微孔板中加入30μL的合成肽溶液,然后用移液器快速地加入264μLFRAP工作液,62*2cm的小块,将切块后的牛蛙皮放置到95℃的水中进行水浴处理4h,处理完后进行过蛙皮明胶后所得的牛蛙皮肽DPP_IV抑制率存在显著性的差异(P<0.05抑制率为19.86_7越高。基于此从筛选出的6条肽段中选择最高亲和力的2条肽段LGPQR和INTPVK利用AutodockVina进行分子对接分析,多肽的空间结构由ChemDraw20.0(CambridgeSoftCorporation,Cambridge,Massachusetts,USA)软件绘制。使用OpenBabelGUI将多肽子化状态和氢取向的优化,并保存为pdbqt文件作为配体文件。采用Lamarkiangenetic8合。具体为125Arg、662Tyr分别与LGPQR肽段N端4位的Gln氨基酸上的C1位O形成氢键,支链O形成氢键,630Ser与LGPQR肽段N端3位的Pro氨基酸上的C1位O形成氢键;357Phe、肽段N端3位的Thr氨基酸上的C1位O形成氢键,545Asp分别与INTPVK肽段C端1位的Lys氨基别与INTPVK肽段N端2位的Asn氨基酸的支链H形成氢键;357Phe与INTPVK肽段N端1位的Ile此,LGPQR和INTPVK多肽与受体蛋白DPP_IV酶结合紧密,达到DPP_IV酶的活性抑制效果。LGPQR和INTPVK肽段的序列信息及物理化学性质预测如表2成肽为纯度>95%
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