CN119464103A 高效表达β-乳球蛋白的菌株及其构建方法和应用 （上海昌进生物科技有限公司）

高效表达β-乳球蛋白的菌株及其构建方法种高效表达β乳球蛋白的菌株及其构建方法和通过基因组整合多拷贝表达框及共表达参与蛋达的β乳球蛋白氨基端和羧基端不含有冗余的21.一种巴斯德毕赤酵母菌（Komagataellaphaffii其保藏在位于武汉大学的中国典3.根据权利要求2所述的方法，其还包括从所述培养物的上清液中分离纯化所述β_乳7.根据权利要求2_6任一项所述的方法，其中，所述培养为在生长培养基中培养16_34方法，相对于单拷贝基因工程菌而言，本公开的基因工程菌株在摇瓶发酵表达量提高了菌保藏在位于武汉大学的中国典型培养物保藏中心（简称为CCTCC保藏编号为CCTCCM[0015]图3为使用高效液相色谱法检测重组菌株发酵液上清[0018]本公开中提及的所有出版物和专利在此通过引用以它们的全部内容纳入本公如果通过引用纳入的任何出版物和专利中使用的用途或术语与本公开中使用的用途或术[0019]本文所用的章节标题仅用于组织文章的目的，而不应被解释为对所述主题的限5的范围。酸和氨基酸类似物的其它实例已由Roberts和Vellaccio给出（ThePepti6维持在异源宿主细胞中的重组多核苷酸或在溶液中从其他多核苷酸纯化（部分地或基本列比对软件包的一部分的ALIGN程序中。在为了比较氨基酸序列而利用ALIGN程序的情况修饰的变体是指编码相同或保守修饰的氨基酸序列变体的那些核酸。由于遗传密码的简7取代，例如替换为具有类似侧链的氨基酸，由此肽化学领域的技术人员预期多肽的二构和亲水性质实质未改变。具有类似侧链的氨基酸残基的家族是本领域中已有定义的。这母属（Candida例如，白色假丝酵母（Candidaalbicans）、埃切假丝酵母（Candidahumilis）、解脂假丝酵母（Candidalipolytica）、拟平滑假丝酵母（Candida8酵母属（Debaryomyces例如，汉逊德巴利酵母（Debaryomyceshansenii、内孢霉属物种、乳酸克鲁维酵母（Kluyveromyceslactis）、马克斯克鲁维酵母乳酸变种（Kluyveromycesmarxianusvar.lactis）、马克斯克鲁维酵母（Kluyveromycesmarxianus）、耐热克鲁维酵母（Kluyveromycesthermotolerans、油脂酵母属pastoris）、芬兰毕赤酵母（Pichiafinlandica）、喜海藻糖毕赤酵母（Pichiatrehalophila）、科克拉马毕赤酵母（Pichiakoclamae）、膜醭毕赤酵母（Pichia（Rhodotorulaglutinis）、禾本红酵母（Rhodotorulagraminis、酵母属（Saccharomyces例如，酵母属物种、贝酵母（Saccharomycesbayanus）、啤酒酵母（Saccharomycesbeticus）、酿酒酵母（Saccharomycescerevisiae）、薛瓦酵母（Saccharomycesflorentinus）、脆壁酵母（Saccharomycespastorianus）、粟酒酵母（Saccharomycespombe）、清酒酵母（Saccharomycessake）、葡萄汁酵母（Saccharomycesuvarum、掷孢酵母属（Sporobolomyces例如，粉红掷孢酵母（Sporobolomycesroseus、锁掷酵母属（Trichosporoncacaoliposimilis）、油脂丝孢酵母新种（Trichosporonolea9母属（Yarrowia（例如，解脂耶氏酵母（Yarrowialipolytica、和接合酵母属[0041]②甲醇营养型酵母表达系统：甲醇酵母表达系统是应用最广泛的酵母表达系区，是指核酸分子的基因或编码区中反映宿主生物的典型密码子使用而不改变DNA编码的LIVTQTMKGLDIQKVAGTWYSLAMAASDISLLDAQSAPLRVYVEELKPTPEGDLEILLQKWENGECAQKKIIAEKTKIPAVFKIDALNENKVLVLDTDYKKYLLFCMENSAEPEQSLACQCLVRTPEVDDEALEKFDKALKALPMRFPSIFTAVLFAASSALAAPVNTTTEDETAQIPAEAVIGYSDLEGDFDVAVLPFSNSTNNGLLFINTATGAGATTTCCTTCAATTTTTACTGCCGTCCTATTTGCTGCCTCCTCTGCTCTAGCCGCTCCCGTTAACACTACTACCGAAGATGAGACAGCTCAAATTCCAGCCGAGGCTGTAATAGGTTACTCCGACCTAGAAGGTGACTTTGACGTGGCTGTTCTACCTTTCTCTAACTCTACCAACAACGGACTGCTATTCATAAACACCACCATCGCCAGTATTGCAGCTAAGGAAGAGGGCGTCTCTTTGGAGAAGAGATTAATCGTTACTCAGACCATGAAGGGTCTTGATATTCAAAAGGTTGCTGGAACCTGGTATTCCTTGGCTATGGCTGCCAGCGACATCTCGCTCCTGGATGCACAGTCTGCGCCATTGAGGGTCTACGTGGAGGAATTGAAGCCAACACCCGAAGGCGACCTTGAGATCCTCTTGCAGAAATGGGAAAACGGTGAATGTGCCCAGAAGAAGATCATCGCGGAGAAGACCAAGATTCCTGCCGTTTTCAAAATTGATGCTTTGAATGAGAACAAGGTCCTTGTGCTCGACACAGACTACAAGAAATACCTCCTGTTCTGCATGGAGAATTCAGCAGAGCCTGAGCAGTCACTTGCCTGCCAATGTTTAGTCCGGACACCGGAGGTAGATGATGAGGCCCTGGAGAAGTTCGATAAGGCTCTGAAGGCTCTCCCCATGCATATTCGACTTAGCTTCAACCCCACCCAGCTTGAAGAGCAATGCCATATCTGA（SEQIDATGGGTAAATCAATTGGAATTGATTTGGGTACCACATACTCTTGTGTGGCACATTTTGCTAATGATCGTGTTGAGATCATAGCTAACGACCAAGGTAACAGGACGACTCCATCGTTCGTCGCCTTTACCGACACTGAAAGATTGATTGGTGATGCTGCAAAGAACCAAGCTGCCATGAATCCAGCTAACACTGTTTTCGATGCCAAACGTTTAATCGGTAGAAAATTCGACGACCCGGAAACTCAGGCCGATATTAAGCACTTCCCTTTCAAAGTTATCAACAAGGGGGGAAAGCCTAATATCCAAGTCGAATTTAAGGGTGAGACTAAGGTTTTCAGCCCCGAAGAGATTTCCTCCATGGTTCTAACAAAAATGAAGGATACTGCTGAGCAGTATTTGGGTGAGAAAATCAACGATGCAGTTGTCACTGTTCCTGCTTACTTCAATGACTCTCAAAGACAAGCCACCAAGGATGCTGGTTTGATTGCTGGTTTGAACGTTCAAAGAATCATTAATGAGCCCACCGCTGCCGCAATTGCTTACGGGTTGGACAAGAAGGATGCAGGCCACGGTGAGCACAACATTCTAATCTTCGATCTAGGTGGAGGAACTTTCGATGTTTCTCTACTATCTATTGATGAGGGTATTTTCGAAGTCAAGGCCACCGCAGGTGACACCCACTTGGGTGGTGAGGACTTCGATAACAGATTAGTCAACCACTTTATCGCCGAGTTCAAGAGAAAGACCAAGAAAGATCTTTCTACAAACCAGAGATCCCTTAGAAGACTAAGAACCGCTTGTGAGCGTGCAAAGAGAACTTTGTCTTCTTCTGCTCAGACCTCCATCGAGATTGATTCTTTGTTCGAGGGTATCGACTTCTACACCTCGATCACTAGAGCTAGATTCGAGGAGCTCTGTGCCGACTTGTTCAGATCCACCATCGAGCCTGTTGAGAGAGTCTTGAAAGACTCCAAGTTGGACAAATCTCAAGTTCATGAGATTGTTTTGGTTGGTGGTTCTACCAGAATTCCAAAGGTTCAGAAATTAGTTTCTGACTTTTTCAATGGTAAGGAGCCAAACAAGTCCATCAACCCAGACGAAGCCGTTGCATATGGTGCTGCTGTCCAAGCAGCTATTTTGTCTGGAGATACTTCTTCCAAGACACAAGACTTGTTATTGCTGGATGTTGCTCCTCTATCTTTGGGTATTGAAACCGCTGGTGGTATCATGACCAAGCTGATCCCAAGAAACTCCACAATCCCAGCCAAAAAGTCAGAAATCTTTTCGACATATGCTGACAACCAACCAGGTGTTTTGATTCAAGTCTTTGAAGGTGAGAGAACTAGAACCAAGGACAACAACCTGTTGGGTAAGTTTGAACTTTCTGGTATTCCTCCTGCTCCAAGAGGTGTTCCTCAAATTGAGGTCACCTTCGATATGGATGCCAACGGTATTTTGAATGTATCTGCTGTTGAGAAGGGTACCGGTAAGACTCAAAAGATTACTATTACCAACGATAAGGGAAGATTGTCCAAGGAAGACATCGAGAGAATGGTTTCTGAAGCTGAAAAATTCAAGGATGAAGACGAGAAGGAAGCCGAGAGAGTTGCTGCCAAGAATGGCTTGGAATCATATGCTTACTCTCTGAAGAACTCTGCAGCTGAATCTGGATTCAAGGACAAGGTTGGAGAGGATGATCTTGCCAAGTTGAACAAGTCAGTTGAAGAGACAATATCTTGGTTAGATGAGTCACAATCTGCTTCCACAGACGAGTACAAGGACAGGCAAAAGGAATTGGAAGAAGTTGCTAACCCAATAATGAGCAAGTTCTATGGAGCTGCTGGTGGAGCTCCTGGTGGAGCTCCTGGTGGCTTCCCTGGAGGTTTCCCTGGCGGAGCTGGCGCAGCTGGCGGTGCCCCAGGTGGTGCTGCCCCAGGCGGAGACAGCGGACCAACCGTGGAAGAAGTC所述真核细胞为真菌细胞。在一些实施方案中，所述真菌细胞选自黑曲霉（Aspergillusoryzae）、吉利蒙念珠菌（Candidaguilliermondii）、解脂假丝酵母（Candidalipolytica）、热带假丝酵母（Candidapseudotropicalis）、产朊假丝酵母（Candida母（Kluyveromycesmarxianus）、Morteirellavinaceae变种raffinoseutilizer娄地青霉（Penicilliumroquefortii）、毕赤酵母（Pichiapastoris）、雪白根霉和Chrysosporiumlucknowense。（Komagataellaphaffii，又名Pichiapastoris更优选巴斯德毕赤酵母X33、GS115、（Pichia所述毕赤酵母菌的保藏编号为CCTCCM20242480；所述培养物的上清液中含有[0074]下