CN119470934A 一种基于电融合技术的杂交瘤细胞制备方法及其应用 （上海方源标品生物科技有限公司）

202410555506.22024.05.07一种基于电融合技术的杂交瘤细胞制备方本发明涉及一种基于电融合技术的杂交瘤发明通过电融合方式获得能够产生血清淀粉样蛋白A抗体的杂交瘤细胞，提高了杂交瘤细胞的21.包被抗体和/或标记抗体在制备检测血清淀粉样蛋白A的荧光免疫层析试纸条中的SEQIDNO.5、SEQIDNO.6和SEQIDNO.7所示的序列，所所述标记抗体的重链可变区的CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列分别包括SEQID列。所示的序列。3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征NO.4所示的序列。4.根据权利要求1～3任一项所述的应用，其特征在于，术的杂交瘤细胞制备方法制备得到的杂交瘤细胞中纯化得到；优选地，所述标记抗体由基于电融合技术的杂交瘤细胞免疫层析试纸条筛选的步骤包括：将所述待筛选包被抗体滴加至所述空白硝酸纤维素膜上，烘干后将荧光微球标记的所述待筛选标记抗体与抗原的混合液滴加至所述样品垫上，优选地，所述单克隆化杂交瘤细胞的方法包括：流式细胞分3所述标记抗体的重链可变区的CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列分别包括SEQID列。4[0001]本申请是申请号为202410555506.2专利申请的分案申请(原申请的申请日为2024[0003]血清淀粉样蛋白A(SAA)是一种主要来自肝脏细胞的非特抗原的定性或定量检测。利用荧光免疫层析技术测量血清中SAA蛋白含量是快速诊断机体[0005]实现该方法的关键步骤之一是获得具有高亲和力和高灵敏度的荧光微球标记抗[0007]CN117106728A公开了一种杂交瘤细胞的制备方法，所述制备方法包括采用重组S1401-769蛋白免疫小鼠，取免疫脾5膜上，烘干后将荧光微球标记的所述待筛选标记抗体与抗原的混合液滴加至所述样品垫法在制备用于荧光免疫层析技术的包被抗体和标记抗融合技术的杂交瘤细胞制备方法制备得到的杂交瘤细胞中所述包被抗体的轻链可变区氨基酸序列包括SEQIDNO.2所示的序列。6[0032]SEQIDNO.1：EVQLQQSGAELVKPGASVKLSCTASGFNIKDTYMHWVGNTKYDPKFQGKATITADTSSNTAYLQLSSLTSEDTAVYYCARHDGYYWFAYWGQGTL[0033]SEQIDNO.2：DIVLTQSPASLAVSLGQRATISCRASQSVSTSSYSYMHWSNLESGVPARFSGSGSGTDFTLNIHPVEEEDTATYYCQHSWEI融合技术的杂交瘤细胞制备方法制备得到的杂交瘤细胞中述标记抗体的轻链可变区氨基酸序列包括SEQIDNO.4所示的序列。[0044]SEQIDNO.3：QVQLKESGPGLVAPSQSLSITCTVSGFSLTGYGVNWSTDYNSALKSRLSISKDNSKSQVFLKMNSLQTDDTARYYCARGLGRRYFDYW[0045]SEQIDNO.4：ENVLTQSPAIMSASPGEKVTMTCRASSSVSSSYLHWYASGVPARFSGSGSGTSYSLTISSVEAEDAATYYCQQYSGYPLTFGAGTK在制备检测血清淀粉样蛋白A的荧光免疫层析试纸条[0051](2)本发明通过多次筛选获得了单克隆化的杂交瘤细胞，解决了多克隆抗体批次7[0057]实施例中未注明具体技术或条件者，按照本领域内的文[0061]高通量磁珠纯化系统：购自上海伯杰医疗科技股份有限公司，产品货号为BG_[0062]高通量抗体纯化试剂盒：购自上海伯杰医疗科技股份有限公司，产品货号为BG_×107扩增培养SP/20细胞至T75方瓶备用。融合前保持细胞活力大于95并用无血清89[0093]本实施例将实施例10筛选出来的能表达包被抗体和标记抗体的杂交瘤细胞进行聚丙烯薄膜进行过滤，再使用AKTAPure纯化仪和proteinA亲和纯化柱对细胞上清进行纯[0110]本测试例使用实施例1_7提供的制备杂交瘤细胞的方法制备得到了杂交瘤细胞，9.32.02.53.45.16.44.80.070.824.52.600.20.793.263.5403.853.333.830.034.483.33.822.513.8944.44[0122]本测试例对测试例3获得的杂交瘤细胞中分