土壤和沉积物 醛、酮类化合物的测定 高效液相色谱法（HJ 997-2018）

土壤和沉积物醛、酮类化合物的测定高效液相色谱法（HJ997-2018）发布日期：2018年12月26日实施日期：2019年06月01日发布单位：中华人民共和国生态环境部标准状态：首次发布、现行有效解释单位：生态环境部出版单位：中国环境出版集团前言为贯彻《中华人民共和国环境保护法》《中华人民共和国土壤污染防治法》，保护生态环境，保障人体健康，规范土壤和沉积物中醛、酮类羰基化合物的监测分析方法，统一样品前处理、仪器分析、结果计算及质量控制要求，制定本标准。本标准规定了土壤和沉积物中13种醛、酮类化合物的高效液相色谱测定方法，为土壤环境调查、污染溯源、风险评估、环境监管及沉积物环境质量评价提供标准化检测依据。本标准附录A为规范性附录，附录B、附录C为资料性附录。安全警示：实验所用乙腈、二氯甲烷、2,4-二硝基苯肼等试剂具有毒性、刺激性与易燃性，所有前处理、试剂配制、仪器操作必须在通风橱内进行，佩戴防护手套、护目镜及口罩，杜绝明火，做好废液废渣分类收集处置。1适用范围本标准规定了土壤和沉积物中甲醛、乙醛、丙烯醛、丙酮、丙醛、丁烯醛、丁醛、苯甲醛、戊醛、间甲基苯甲醛、对甲基苯甲醛、己醛、2,5-二甲基苯甲醛共13种醛、酮类化合物的高效液相色谱测定方法。本标准适用于土壤和沉积物中上述13种醛、酮类化合物的定性、定量检测。当取样量为10.0g、定容体积为1.0mL时，本方法各目标物检出限为0.02mg/kg～0.05mg/kg，测定下限为0.08mg/kg～0.20mg/kg（详细参数见附录A）。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用必不可少。凡是注日期的引用文件，仅注日期版本适用；未注日期引用文件的最新有效版本适用于本标准。HJ/T166土壤环境监测技术规范HJ834土壤和沉积物半挥发性有机物的测定气相色谱-质谱法HJ1019土壤和沉积物有机物分析样品采集、保存和运输技术规范3方法原理土壤、沉积物样品采用醋酸-醋酸钠缓冲溶液振荡提取，提取液中的醛、酮类羰基化合物在适宜温度、pH条件下与衍生剂2,4-二硝基苯肼（DNPH）发生专属衍生反应，生成稳定的醛、酮-DNPH腙类衍生物；衍生物经二氯甲烷萃取、浓缩、定容后，采用高效液相色谱分离，紫外检测器检测，依据色谱保留时间定性，外标法峰面积定量，计算样品中目标化合物含量。4干扰和消除土壤基质中大量有机酸、金属离子、腐殖质会影响衍生效率并产生基质干扰，通过醋酸-醋酸钠缓冲体系稳定pH值，控制恒温衍生条件，可有效消除pH波动带来的衍生不完全问题；样品经液液萃取净化、浓缩处理，可大幅降低腐殖质、极性杂质基质干扰；色谱条件优化梯度洗脱，可实现13种目标衍生物完全分离，规避共流出干扰。5试剂和材料除特殊说明外，均使用分析纯及以上试剂，实验用水为超纯水（25℃电阻率≥18.2MΩ·cm），有机溶剂为色谱纯。5.1基础试剂冰乙酸、无水乙酸钠、二氯甲烷、乙腈（色谱纯）、盐酸、无水硫酸钠（400℃烘烤4h，冷却干燥保存）。5.2缓冲溶液醋酸-醋酸钠缓冲液（pH≈5.0）：准确配制乙酸-乙酸钠混合缓冲体系，用于稳定样品提取及衍生反应pH环境，保障衍生反应充分稳定。5.3衍生试剂2,4-二硝基苯肼（DNPH）酸性溶液：称取适量DNPH，经盐酸溶解定容，现配现用，避光保存，严禁久置氧化失效。5.4标准溶液13种醛、酮类-DNPH混合标准储备溶液（市售有证标准溶液），4℃避光冷藏保存；按需用乙腈稀释配制系列标准工作液。5.5辅助材料0.45μm有机系滤膜、氮吹浓缩专用管、棕色避光样品瓶、无水硫酸钠脱水柱等。6仪器和设备高效液相色谱仪：配备紫外检测器（UV）或二极管阵列检测器（DAD）色谱柱：C18液相色谱柱（4.6mm×250mm，5μm），等效通用色谱柱可替代恒温振荡水浴装置、氮吹浓缩仪、高速离心机、分析天平（0.0001g）常规实验室玻璃器皿、棕色避光储存容器7分析步骤7.1样品采集与保存按照HJ1019、HJ/T166规范采集土壤和沉积物样品，样品采集后立即装入棕色避光密封容器，4℃避光冷藏保存，7d内完成前处理，30d内完成检测；全程避光、减少常温暴露，防止醛酮类化合物挥发、降解。7.2样品前处理准确称取风干、过筛均质土壤/沉积物样品10.0g置于锥形瓶中，加入醋酸-醋酸钠缓冲溶液，恒温振荡提取；提取液离心分离，取上清液加入DNPH衍生试剂，恒温避光衍生反应；反应完成后用二氯甲烷分次萃取，合并有机相，经无水硫酸钠脱水、氮吹浓缩，乙腈定容、过膜待测。7.3空白试样制备用超纯水代替样品，全程同步执行提取、衍生、萃取、浓缩、定容全过程前处理，制备实验室空白样品。7.4仪器参考色谱条件流动相：乙腈+水=60+40（体积比），等度洗脱；流速：1.0mL/min；检测波长：360nm；柱温：30℃；进样量：10μL；洗脱时长30min，可根据色谱柱型号微调洗脱参数，保证13种目标物完全分离。7.5标准曲线绘制将混合标准储备液用乙腈稀释为至少5个浓度梯度的标准工作液（含空白零点），由低浓度至高浓度依次进样，以目标化合物质量浓度为横坐标，对应峰面积为纵坐标绘制标准曲线，相关系数需≥0.999。7.6样品测定与标准曲线相同色谱条件下测定待测样品，根据保留时间定性、峰面积外标法定量；若样品浓度超出曲线线性范围，需用乙腈稀释后重新测定并记录稀释倍数。8结果计算与表示8.1计算公式w=式中：w——样品中目标醛、酮类化合物含量（mg/kg）；ρ——试样中目标物测定浓度（mg/L）；ρ₀——实验室空白试样测定浓度（mg/L）；V——样品定容体积（mL）；D——样品稀释倍数；m——取样质量（g）；f——样品含水率换算系数（干样校正）。8.2结果校正最终结果以干重含量报出，需扣除样品含水率进行校正。8.3结果表示结果保留三位有效数字，低于测定下限时报“ND”，同时标注检出限。9精密度和准确度9.1精密度6家实验室对低、中、高三种浓度土壤和沉积物实际样品进行测试：13种目标化合物实验室内相对标准偏差为1.2%～12.5%；实验室间相对标准偏差为2.5%～15.8%；重复性限、再现性限满足规范考核要求。9.2准确度土壤、沉积物基质加标回收率范围为78.0%～118%，满足土壤有机物监测质控要求。10质量保证与质量控制空白控制：每批次样品（≤20个）至少设置1个实验室空白，空白值不得超过方法检出限，否则排查污染、重做批次。标准曲线：不少于5个浓度点，相关系数r≥0.999，每批次样品需做曲线核查点，偏差≤10%。平行样：每批次样品随机抽取10%做平行双样，平行样相对偏差≤20%。加标回收：每批次至少1组基质加标，回收率控制在75%～120%。全程避光：前处理、储存、上机全过程避光操作，防止醛酮类目标物光解降解。11废物处理实验产生的有机废液、衍生废液、废滤膜、废弃试剂等属于危险废物，需分类收集、规范标识，按照实验室危废管理规定统一交由资质单位处置，严禁随意倾倒、丢弃。附录A（规范性附录）目标物检出限、测定下限明确13种醛、酮类化合物对应检出限、测定下限、保留时间参考值，为结果判定、数据上报、方法验证提供法定依据。附录B（资料性附录）标准色谱图提供13种醛、酮-DNPH衍生物标准液相色谱出峰图谱、峰序对应表，用于样品定性比对、峰识别判定。附录C（资料性附录）方法验