2026版临床微生物标本采集规范

2026版临床微生物标本采集规范1标本采集通用要求1.1基本原则所有临床微生物标本采集应遵循“及时、规范、足量、防污染”的核心原则，优先在抗菌药物、抗病毒药物使用前采集，对已用药患者应尽量选择下次用药前的谷浓度时段采集，以提高病原菌检出率。标本应从感染部位采集，避免正常菌群污染，无菌部位标本采集需严格执行无菌操作。1.2人员要求标本采集人员应为具备执业资质的医护人员，需经过临床微生物标本采集规范、生物安全操作培训并考核合格。特殊部位标本（如脑脊液、心包积液、肺穿刺组织）应由具备相应操作资质的医师采集。1.3容器要求标本采集容器需符合国家医药行业标准，无菌、无渗漏、无抑菌成分，不同类型标本对应专用容器：①普通细菌培养标本使用无菌螺旋盖塑料/玻璃容器；②血培养使用符合YY/T0656标准的一次性血培养瓶，含树脂或活性炭的中和抗菌药物瓶适用于已使用抗菌药物的患者；③病毒检测标本使用专用病毒保存液运送管；④厌氧菌标本使用厌氧运送管或厌氧血培养瓶。禁止使用含EDTA、甲醛、重金属防腐剂的容器采集普通细菌培养标本，避免抑制病原菌生长。1.4标识要求所有标本需粘贴唯一识别条码，标识信息至少包含：患者姓名、住院号/门诊号、标本类型、采集部位、采集日期与时间（精确到分钟）、采集人姓名。标识应粘贴于容器侧壁，禁止粘贴于容器盖，避免开盖后标识脱落。标本信息需与检验申请单完全一致，无标识或标识不清的标本视为不合格标本。1.5无菌操作要求标本采集前需严格执行手卫生，卫生手消毒后菌落数应≤10CFU/cm²，外科手消毒后菌落数应≤5CFU/cm²，符合GB15982规定的手卫生标准。无菌部位标本采集时需佩戴无菌手套，皮肤消毒范围直径≥8cm，消毒后待干再进行穿刺操作，禁止触摸已消毒区域。开放性创面标本采集前需用无菌生理盐水冲洗表面污染菌，再采集深部病变组织分泌物。1.6采集时机通用要求感染急性期、症状初发时采集标本阳性率最高：①发热患者尽量在寒战发作后30分钟内或体温升至≥38.5℃时采集；②腹泻患者在发病急性期（发病3天内）、未使用止泻药前采集；③呼吸道感染患者在发病初期（发病72小时内）、未使用抗病毒/抗菌药物前采集。2常见临床标本采集规范2.1血液标本（血培养）2.1.1采集指征符合以下任意一项即可采集血培养：①不明原因发热（体温≥38.5℃或≤36℃）伴寒战；②外周血白细胞计数异常：WBC>10×10^9/L（中性粒细胞占比>80%）或WBC<4×10^9/L；③降钙素原（PCT）≥0.5ng/ml、C反应蛋白（CRP）≥50mg/L且无明确非感染性因素解释；④感染性休克、多器官功能障碍综合征；⑤疑似菌血症、脓毒症；⑥血管内植入物（中心静脉导管、人工瓣膜、起搏器等）患者出现不明原因发热；⑦发热待查且无法明确感染部位。2.1.2采集前准备根据患者体重、是否使用抗菌药物选择合适的血培养瓶，皮肤消毒采用三步法：首先用75%乙醇棉球擦拭穿刺部位皮肤，作用30秒待干；再用1%~2%碘酊棉球以穿刺点为中心螺旋式消毒，作用30秒；最后用75%乙醇棉球脱碘，待干60秒后穿刺。血培养瓶塞用75%乙醇棉球擦拭消毒，作用60秒待干，禁止使用碘酊消毒瓶塞，避免橡胶塞腐蚀及抑菌成分进入培养基。2.1.3采集方法与采集量成人每次采集2套血培养，每套包含1瓶需氧瓶+1瓶厌氧瓶，分别从2个不同的外周静脉穿刺点采集，两个穿刺点间距≥10cm，禁止从同一静脉穿刺点分抽血液注入不同培养瓶。每套血培养总采血量为16~20ml，每瓶注入8~10ml，采血量每增加1ml，成人血培养阳性率可提升3%~5%，采血量不足5ml/套时，阳性率较标准采血量下降22%~30%。儿童血培养采血量根据体重调整：体重<1kg者每瓶0.5~1ml，1~10kg者每瓶1~2ml，10~20kg者每瓶2~5ml，>20kg者每瓶5~8ml。儿童无厌氧菌感染高危因素（腹腔感染、盆腔感染、动物咬伤、坏死性筋膜炎、脓毒症伴休克等）时，可仅采集需氧瓶。若使用注射器采集血液，应先将血液注入厌氧瓶，再注入需氧瓶，避免空气进入厌氧瓶；若使用真空采血系统采集，应先采集需氧瓶，再采集厌氧瓶，防止真空压力不足导致采血量误差。2.1.4注意事项禁止从静脉留置针、输液管内采集血培养标本，避免导管定植菌污染及输液成分影响病原菌生长；怀疑导管相关血流感染时需同时采集外周血与导管内血，具体要求见特殊病原体采集规范。血培养采集后禁止注入任何药物或抗凝剂，避免影响培养基营养成分。2.2呼吸道标本2.2.1上呼吸道标本采集指征包括：急性咽炎、扁桃体炎、鼻窦炎、百日咳、呼吸道病毒感染等。鼻咽拭子为上呼吸道病毒检测首选标本，阳性率较口咽拭子高20%~30%。采集方法：①口咽拭子：嘱患者张口发“啊”音，用无菌聚酯纤维拭子擦拭双侧腭弓、咽后壁及扁桃体隐窝，避免触碰舌头、口腔黏膜及唾液，采集后将拭子头浸入病毒保存液或无菌生理盐水中；②鼻咽拭子：将拭子沿下鼻道底部缓慢向后插入，深度为鼻尖至耳垂距离的1/2（成人约5~7cm，儿童约2~3cm），到达鼻咽部后停留1~3秒，旋转3~5圈后取出，浸入保存液中。2.2.2下呼吸道标本采集指征包括：肺炎、支气管扩张合并感染、肺脓肿、慢性阻塞性肺疾病急性加重等下呼吸道感染。①痰标本：首选晨痰，嘱患者晨起用清水漱口3次，用力深咳嗽，咳出深部痰液，弃去第一口咽喉部分泌物，留取第二口及以后的深部痰，采集量≥1ml，最佳为2~5ml，装入无菌痰杯。痰标本质量需符合以下标准：鳞状上皮细胞（SEC）<10个/低倍镜视野（LPF）、白细胞（WBC）>25个/LPF，或SEC/WBC<1:2.5；若SEC>25个/LPF，提示为唾液污染的不合格标本，应重新留取。②支气管肺泡灌洗液（BALF）：由呼吸科医师在支气管镜检查时采集，将支气管镜嵌入病变肺段支气管，注入无菌生理盐水30~50ml，负压吸引回收灌洗液，采集量≥5ml，最佳为10~20ml，装入无菌容器。BALF定量培养菌落数≥10^4CFU/ml时，可作为下呼吸道感染的诊断依据。③防污染毛刷（PSB）标本：使用双套管防污染毛刷采集，采集量约0.5~1ml，定量培养菌落数≥10^3CFU/ml时有诊断价值，适用于免疫低下患者、重症肺炎的病原菌诊断。2.3尿液标本2.3.1采集指征疑似尿路感染（尿频、尿急、尿痛、肾区叩痛）、尿常规白细胞阳性、不明原因发热、留置导尿管患者发热等。2.3.2采集方法①清洁中段尿：女性患者先用肥皂水或0.5%碘伏清洗外阴，分开大阴唇，弃去前段尿液，留取中段尿10~20ml于无菌尿杯；男性患者翻转包皮清洗尿道口，弃去前段尿，留取中段尿。②导尿管尿：长期留置导尿管患者采集标本时，禁止从集尿袋中留取，应先消毒导尿管侧壁的采样口，用无菌注射器抽取5~10ml尿液注入无菌容器。③耻骨上膀胱穿刺尿：为尿路感染诊断的金标准，适用于新生儿、重症患者、疑难感染病例，由医师在无菌操作下穿刺膀胱抽取尿液，采集量≥5ml。2.3.3诊断阈值清洁中段尿定量培养：革兰阴性菌菌落数≥10^5CFU/ml、革兰阳性菌≥10^4CFU/ml，结合临床症状可诊断尿路感染；有典型尿路刺激征的女性患者，革兰阴性菌菌落数≥10^3CFU/ml即可考虑感染；耻骨上膀胱穿刺尿标本，只要检出有临床意义的致病菌（排除皮肤污染菌），无论菌落数多少均有诊断价值。2.3.4注意事项尿液标本禁止添加防腐剂，避免抑制细菌生长；采集后2小时内送检，不能及时送检的置于2~8℃冷藏，保存时间不超过24小时，避免细菌过度繁殖影响定量结果。2.4粪便标本2.4.1采集指征急性腹泻（每日排便≥3次稀便/水样便）、腹痛、呕吐、疑似肠道感染、发热伴消化道症状、抗菌药物相关性腹泻等。2.4.2采集方法嘱患者留取新鲜粪便，用无菌竹签挑取含有脓血、黏液、稀软的病变部分，避免挑取成型便或粪水，采集量为1~2g（约黄豆大小），稀便采集5~10ml，装入无菌粪便盒。若患者无法自主排便，可用无菌直肠拭子插入肛门2~3cm，旋转一圈沾取粪便后取出，放入Cary-Blair运送培养基中。2.4.3注意事项粪便标本不能混有尿液、消毒剂、污水，避免病原菌死亡；采集后2小时内送检，2~8℃冷藏保存不超过24小时。怀疑霍乱弧菌感染时，标本需置于碱性胨水运送培养基中，35~37℃保温运送；怀疑难辨梭菌感染时，需留取稀便，2~8℃保存且24小时内完成毒素检测，避免毒素降解。2.5脓液与创面标本2.5.1采集指征皮肤软组织感染、手术部位感染、脓肿、压疮感染、烧伤创面感染等。2.5.2采集方法①开放性创面：采集前先用无菌生理盐水冲洗创面表面的渗出液及坏死组织，去除表面污染菌，再用无菌拭子深入创面基底部或肉芽组织边缘，旋转沾取分泌物，避免采集表面的脓液或坏死组织。②闭合性脓肿：皮肤常规消毒后，用无菌注射器穿刺脓肿深部，抽取脓液1~5ml，若怀疑厌氧菌感染，应排尽注射器内空气，将针头插入橡皮塞密封，或直接注入厌氧运送管/厌氧血培养瓶中送检。③引流液：腹腔、胸腔、伤口引流液标本需从引流管的采样口消毒后抽取，禁止从引流袋中留取，采集量≥5ml，最佳为10~20ml。2.5.3注意事项怀疑放线菌感染时，需仔细寻找脓液中的硫磺样颗粒，将颗粒一同送检，提高阳性率；创面拭子培养仅适用于浅表感染的初筛，深部感染建议采集组织标本或穿刺脓液。2.6脑脊液标本2.6.1采集指征头痛、呕吐、颈项强直、发热伴神经系统症状、脑脊液常规异常、疑似颅内感染（细菌性脑膜炎、病毒性脑炎、真菌性脑膜炎、结核性脑膜炎等）。2.6.2采集方法由临床医师行腰椎穿刺采集，留取3~5管脑脊液，每管1~2ml，第1管用于生化、免疫检测，第2管用于微生物涂片、培养及分子检测，第3管用于常规、细胞学检测。若标本量不足（<1ml），应优先满足微生物检测需求。怀疑结核或真菌感染时，采集量应≥5ml，提高检出率。2.6.3注意事项脑脊液标本采集后需在1小时内送检，室温保存不超过2小时，禁止冷藏。脑膜炎奈瑟菌、肺炎链球菌、流感嗜血杆菌等苛养菌对低温敏感，4℃保存2小时以上存活率可下降40%~60%，因此需室温运送，避免低温损伤。2.7生殖道标本2.7.1采集指征疑似生殖道感染（尿道炎、阴道炎、宫颈炎、盆腔炎）、性传播疾病（淋病、衣原体感染、支原体感染、梅毒等）。2.7.2采集方法①男性尿道分泌物：嘱患者排尿后2~3小时采集，用无菌拭子插入尿道2~3cm，旋转3~5圈，停留2秒后取出，避免沾染尿道口细菌。②女性宫颈分泌物：先用无菌拭子擦去宫颈表面的黏液及分泌物，更换无菌拭子插入宫颈管1~2cm，旋转5~10圈，停留10秒后取出，避免触碰阴道壁及外阴。③阴道分泌物：用无菌拭子采集阴道后穹窿分泌物，适用于阴道炎的病原菌检测。2.7.3注意事项怀疑淋病奈瑟菌感染时，标本需置于巧克力琼脂平板或专用淋球菌运送培养基中，35~37℃保温运送，避免低温及干燥导致细菌死亡；衣原体、支原体检测标本需置于专用运送培养基中，2~8℃保存，24小时内送检。月经期不建议采集生殖道标本，避免血液干扰检测结果。2.8浆膜腔穿刺液标本2.8.1采集指征疑似感染性浆膜腔积液（胸腔积液、腹腔积液、关节积液、心包积液等）、发热伴浆膜腔积液、积液常规提示白细胞升高。2.8.2采集方法由临床医师行无菌穿刺采集，留取标本量≥10ml，最佳为20~30ml。为提高病原菌检出率，可将10~15ml积液直接注入需氧+厌氧血培养瓶中培养，剩余标本注入无菌试管用于涂片及其他检测。若积液易凝固，可添加低浓度肝素抗凝（终浓度≤10U/ml），禁止使用EDTA、柠檬酸钠等抗凝剂，避免抑制革兰阴性菌生长。2.8.3注意事项标本采集后1小时内送检，室温保存，禁止冷藏。关节积液怀疑化脓性关节炎时，即使外观清亮也需进行培养，因为部分病例细菌浓度较低。2.9组织标本2.9.1采集指征手术部位感染、疑似感染性病变组织、活检组织、不明原因组织坏死、免疫低下患者深部感染等。2.9.2采集方法无菌操作下切取病变组织，优先选取病变与正常组织交界处的标本，避免仅采集坏死中心组织，采集量≥0.5g，或大小≥1cm×1cm×0.5cm，内镜活检小标本需全部送检。标本置于无菌生理盐水浸湿的无菌纱布上，避免直接浸泡于生理盐水中导致细菌渗透压损伤。2.9.3注意事项怀疑厌氧菌感染时，标本需置于厌氧运送罐或厌氧袋中，1小时内送检；怀疑结核分枝杆菌感染时，标本需置于无菌容器中，禁止添加福尔马林等固定液，避免病原菌死亡影响培养结果。3特殊病原体标本采集规范3.1结核分枝杆菌标本3.1.1采集指征疑似肺结核、肺外结核、结核性脑膜炎等。3.1.2采集方法①痰标本：首选晨痰，连续采集3天，每天1份，每份≥5ml，嘱患者深咳嗽咳出深部痰液，避免唾液污染。无法自主咳痰的患者可行诱导痰采集。②尿液标本：留取晨尿中段尿，或24小时尿液的沉渣部分，采集量≥10ml，连续留取3天。③脑脊液标本：采集量≥5ml，最佳为10ml，离心后取沉渣做涂片及培养。④组织标本：取病变组织，无需固定，直接装入无菌容器送检。3.1.3注意事项标本采集后2小时内送检，2~8℃冷藏保存不超过72小时；禁止添加福尔马林等固定液，避免破坏分枝杆菌细胞壁影响检测。3.2真菌标本3.2.1采集指征疑似真菌感染（念珠菌病、曲霉菌病、隐球菌病、皮肤癣菌病等）、免疫低下患者发热、抗生素治疗无效的感染。3.2.2采集方法①隐球菌检测：脑脊液标本≥2ml，离心后取沉渣做墨汁染色、抗原检测及培养；血清标本用于隐球菌荚膜多糖抗原检测。②曲霉菌检测：首选BALF标本，做半乳甘露聚糖（GM）试验及培养，BALF-GM试验诊断阈值为≥1.0，血清GM试验阈值为≥0.5。③皮肤癣菌标本：用75%乙醇消毒皮损部位，刮取皮损边缘的鳞屑或甲屑，置于无菌纸片或试管中送检。④血真菌培养：疑似念珠菌血症时，采集2套血培养，每瓶采血量与细菌培养一致，含中和抗菌药物的培养瓶可提高阳性率。3.3厌氧菌标本3.3.1采集指征疑似厌氧菌感染：脑脓肿、肺脓肿、肝脓肿、腹腔感染、盆腔感染、坏死性筋膜炎、牙周脓肿、咬伤感染、分泌物有恶臭味等。3.3.2采集方法优先采集封闭部位的标本，如脓肿穿刺液、组织标本、无菌体液，避免采集有正常厌氧菌定植的标本（如咽拭子、痰、粪便、阴道分泌物，除非特殊需求）。采集后立即置于厌氧运送装置中，排尽空气，避免病原菌接触氧气死亡。3.3.3注意事项厌氧菌标本采集后需在1小时内送检，室温保存，禁止冷藏或冷冻；不能及时送检的标本需置于厌氧罐中，保存时间不超过24小时。3.4导管相关血流感染（CRBSI）标本3.4.1采集指征留置中心静脉导管超过48小时的患者出现不明原因发热、寒战，疑似导管相关感染。3.4.2采集方法同时采集2套外周静脉血培养（不同穿刺点）和1套导管内血培养，两套标本采集时间差≤5分钟，均注入需氧+厌氧血培养瓶，采血量符合标准要求。若导管需拔除，将导管尖端5cm剪下，置于无菌试管中送检，做半定量培养。3.4.3诊断标准符合以下任意一项即可诊断CRBSI：①时间差法：导管内血培养阳性时间较外周血培养早≥120分钟，且为同一病原菌；②定量培养法：导管内血培养菌落数是外周血培养的5倍及以上；③导管尖端半定量培养：导管尖端菌落数≥15CFU/平板，且外周血培养阳性为同一病原菌。3.5呼吸道病毒标本3.5.1采集指征疑似呼吸道病毒感染（流感、新冠病毒感染、呼吸道合胞病毒感染、腺病毒感染等）、发热伴呼吸道症状。3.5.2采集方法首选鼻咽拭子标本，也可采集口咽拭子、BALF、痰标本，采集后将拭子头浸入病毒保存液中，避免干燥。核酸检测标本采集后2小时内送检，2~8℃保存不超过72小时，-20℃保存不超过7天，-70℃可长期保存，反复冻融≥3次时核酸降解率可超过30%，应避免反复冻融。3.5.3注意事项病毒核酸检测的血标本需使用EDTA或枸橼酸钠抗凝管，禁止使用肝素抗凝，肝素可与核酸结合并抑制PCR扩增酶，导致检测结果假阴性。4标本运送与保存规范4.1运送时限要求根据标本类型及病原菌特性，分为三个等级：①紧急运送标本：脑脊液、心包积液、关节积液、厌氧菌标本、未接种的苛养菌标本，采集后1小时内送检，室温保存，禁止冷藏。②常规运送标本：痰、尿、粪便、咽拭子、生殖道拭子、普通脓液，采集后2小时内送检，无法及时送检的置于2~8℃冷藏，保存时间不超过24小时。③特殊标本：血培养标本采集后2小时内送检验科进行孵育，室温保存不超过12小时，禁止冷藏或冷冻；病毒核酸检测标本2~8℃保存不超过72小时，需长途运输的应置于干冰中，保持-20℃以下环境。4.2运送条件要求标本运送需符合生物安全要求，采用三层包装：第一层为带密封盖的标本容器，置于第二层密封袋中，袋内放置吸水材料，防止渗漏；第三层为硬质运输箱，具备防压、防漏功能。疑似高致病性病原微生物标本需按照国家生物安全相关规定，由专人专车运送。运送过程中避免剧烈震荡，防止标本容器破损；禁止将标本与食物、药品、生活用品混装运送；运送人员需经过生物安全培训，掌握标本泄漏应急处理方法。4.3保存要求①已接种的培养基（如血培养瓶）需置于35~37℃孵箱中保存，避免温度波动影响细菌生长。②待检测的细菌培养标本2~8℃冷藏保存时间不超过24小时，禁止冷冻。③病毒分离标本需置于病毒保存液中，2~8℃保存不超过48小时，长期保存需置于-70℃冰箱。④血清学检测标本2~8℃保存不超过7天，-20℃可保存3个月。4.4生物安全防护标本采集与运送人员需根据操作风险等级配备个人防护装备：①常规操作：穿戴工作服、医用外科口罩、一次性手套，操作前后严格执行手卫生。②呼吸道传染病标本采集：穿戴N95及以上医用防护口罩、护目镜/防护面屏、隔离衣、双层手套，在负压操作间或通风良好的室外区域操作，避免气溶胶传播。③接触传播病原体标本采集：穿戴一次性隔离衣、双层手套，操作后及时消毒接触部位，防护用品用后按医疗废物处置。发生标本泄漏时，立即用吸水材料覆盖，倒上1000mg/L含氯消毒剂，作用30分钟后清理，避免直接接触污染材料；发生职业暴露时，立即执行局部处理（挤血、流动水冲洗、碘伏消毒），并按院感管理要求上报及随访。5标本接收与质量评估5.1接收核对流程检验科标本接收人员需核对以下内容：①标本标识是否清晰，信息是否与申请单一致；②标本容器是否完整，有无破损、渗漏；③标本类型与申请项目是否匹配；④标本量是否符合要求；⑤运送时间、保存温度是否符合规范。核对无误后签收，录入实验室信息系统。5.2不合格标本判定标准符合以下任意一项即为不合格标本：①标识问题：无唯一标识、标识信息与申请单不符、标