CN119486995A 组合物和构建共轭物的方法 （香港大学）

2025.01.03PCT/CN2023/1142132023.08.22WO2024/041521EN2024.02.29供了一个高效实用构建生物活性模块化基元的2在添加剂存在的情况下，使第一反应物、第二反应物和4.根据权利要求1至3中任一项的方法，其中第一反应物与第二反35.根据权利要求1至4中任一项的方法，其中第二6.根据权利要求1至5中任一项的方法，其中第二反应物和第三反应物独立地是治疗7.根据权利要求1至6中任一项的方法，其中第二反应物和第三反应物独立地是线性8.根据权利要求1至7中任一项的方法，其中第9.根据权利要求1至8中任一项的方法，其中第二10.根据权利要求1至9中任一项的方法，其中第三反应物包含一个与第一反应物反应的反应形成包含取代的1_硫代异吲哚结构或420.根据权利要求1至19中任一项的方法，包括在添22.根据权利要求1至21中任一项的方法，其中反应在室25.根据权利要求24的方法，其中步骤(iii)的5631.根据权利要求26至30中任一项的共轭物，其中R6和R7独立地是未取代的C1_C10烷32.根据权利要求26至31中任一项的共轭物，其中R6和R7独立地包含一个刺激响应性33.根据权利要求26至32中任一项的共轭物，其中R8和R9独立地是未取代的C1_C10烷7[0002]本申请声称享有并优先于美国序列号63/401,30[0006]邻苯二甲醛(OPA)在蛋白质生物共轭和肽环化中重新获得了关注。Roth首次发现与Roth使用的单个氨基酸不同，肽在当时由于不明原因显示出大大减少的荧光。随后，Benson在1975年修改了Roth的方法(Benson&Hare,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.1975,72,胺基团反应形成酞酰亚胺(异吲哚一1一酮)，这已经在文献中被报道(Tung,etal.,Org.Lett.2016,18,2569–2578)。与之前研究中涉及有机溶剂的条件不同(Thiele&8Schneider,LiebigsAnnalen1909,369,287一299；Takahashi&Hatanaka,Heterocycles1997,45,24752499；PérardViret,etal.,Tetrahedron2002,58,5103含胺的DNA和4叔丁基苯硫醇之间的反应生成了两组分和三组分产物的混合物。值得注意子内OPA一胺硫醇反应(Zhang,etal.,J.Am.Chem.Soc.2019,141,12274–12279；亲核体的第二反应物和(ii)含有胺亲核体的第三反应物在添加剂的存在下反应以形成共9[0013]优选地，该添加剂抑制仅由第一反应物和第三反应物之间反应形成的产品的生用与OPA反应的空间位阻硫醇基团和/或在1一巯基异吲哚核心的杂芳香族基团上引入取代R9独立地是未取代的C1_C10烷基或取代的C1_[0035]公开的方法和组合物的额外优点将在后续的描述中部分阐述，部分从描述中理[0038]图2A至2D是OPA基反应的示意图。图2A展示了Roth(Roth,Anal.Chem.1971,43,880–882)、Benson(Benson&Hare,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.1975,72,619–622)和Weidekamm(Weidekamm,Anal.Biochem.1973,54,102_114)报道的OPA_胺_硫醇分子间三组展示了Li(Zhang,etal.,J.Am.Chem.Soc.2019,141,12274–12279)和Perin(Todorovic,et16处理的U87MG细胞的CCK8实验结果。图5C展示了用PDCs16处理的HEK293T细胞的没有添加剂的情况下涉及相同反应物的反应条件。抑制12,13,14,15,16,17,18,19,20,21,22,23,24,25,26,27,28,29,30,31,32,33,34,35,36,37,38,39,40,41,42,43,44,45,46,47,48,49,50,51,52,53,54,55,56,57,58,59,60,61,62,63,64,65,66,67,68,69,70,71,72,73,74,75,76,77,78,79,80,81,82,83,84,85,86,87,88,89,90,91,92,93例如含有3至30个碳原子、3至20个碳原子或3至10个碳原子的非芳香族单环或非芳香族多[0049]“取代烷基”指的是在碳氢骨架的一个或多个碳原子上有一个或多个取代基取代一个碳碳双键的非芳香族单环或非芳香族多环环结构，3至20个碳原子且至少有一个碳[0054]“取代烯基”指的是烯基部分有一个或多个取代基取代了碳氢骨架中一个或多个[0057]“取代烷炔基”指的是烷炔基团中有一个或多个取代基取代烃骨架中的一个或多[0069]“取代烷氧基”指的是烷氧基的一个或多个取代基取代了烷氧主链上一个或多个[0074]“苯氧基”是业界公认的术语，指的是公式为ORv的化合物，其中Rv是C6H5(即或O杂芳香基，其芳香基和杂芳香基上的一个或多个环原子上的一个或多个氢原子被一个[0111]所披露的化合物和取代基团可以独立地拥有上述列出的两个或更多的基团。例另一个例子是，给定的温度范围可能是从大约25℃到30℃,其中该范围也披露了可以从大[0131]在某些形式中，所述共轭物如结构式XA所述，只是R6和R7独立地是未取代的C1_指的是对外部刺激有反应的化学基团或键。刺激响应性化学基团可以通过pH(如pH变化)、[0132]在某些形式中，所述共轭物如结构式XA所述，只是R8和R9独立地是未取代的C1_以抑制在非选择性形成两组分和三组分产物中常见的亚胺_醛中[0156]在某些形式中，制作共轭物的方法如上所述，只是对于结构式I(包括第一反应式中，将所得溶液的pH值调整到大约7.4。这种pH值的调整可以使用1M氢氧化钠溶液[0172](ii)在步骤(i)的溶液、分散体或悬浮液中加入第一反应物和第二反应物以形成[0196]10.第1段到第9段任一项所述的方物反应形成含有取代的1_巯基异吲哚部分或未取代的1_巯基异吲[0218](ii)在步骤(i)的溶液、分散体或悬浮液中加入第一反应物和第二反应物以形成[0231]29.第26段或第27段所述的共轭物，其[0233]31.第26段至第30段任一项所述的共轭物，其[0234]32.第26段至第31段任一项所述的共轭物，[0235]33.第26段至第32段任一项所述的共轭物，其中R使用前从钙氢化物(CaH2)新鲜蒸馏。分析型HPLC在配备有光电二极管阵列检测器(Waters流速。WatersUPLCH级系统配备有ACQUITYUPLC光电二极管阵列检测器和WatersSQmin的流速。制备型HPLC在Waters系统上进行，使用Vydac218TPTMC18柱(10μm,22×250mm)以10mL/min或Vydac218TPTMC18柱(10μm,30×250mm)以20mL/min的流速。HPLC使和DIPEA(8.0当量)在DMF中于室温下进行偶联1小时。使用AcOH(8.0当量)和DIPEA(16.0当[0247]制备含胍的PBS缓冲液：将胍盐酸(1M至8M)加入PBS缓冲液(137mMNaCl，2.7mM肽_药物共轭物则按照条件[C]至[G]中列出的类向每个孔中加入90μl含10％FBS和100U/mLP/S的DMEM培养基。PDCs1验分别进行三次重复，数据使用GraphPadPrism(GraphPadSoftware,LaJolla,CA)进行[0262]U87_MG细胞以每孔2x10^5个细胞的密度接种在35mm玻璃底培养皿中以贴壁胞三次。用PBS补充细胞并进行荧光共聚焦成像(LeicaDMI3000b)。图像通过LeicaApplicationSuitX在×40油镜下(Leica)捕获[0273]有了成功的肽肽共轭物模型，假设这个反应可以进一步扩展到准备具有活性生胞表面受体，参与广泛的细胞一细胞外基质相互作用、细胞一细胞相互作用和信号转导胶质母细胞瘤和黑色素瘤中高度过表达，从而将其与生理正常细胞区分开来转移和血管生成中扮演重要角色(Desgrosellier&Cheresh,Nat.Rev.Cancer2010,10,9–列(Pierschbacher&Ruoslahti,Nature1984,309,30–33；Ruoslahti&Pierschbacher,合在αv和β3亚基之间的主要界面上，每个残基都广泛参与这一相互作用(Xiong,etal.,的结构，以进一步增强其与αvβ3整合素的结合。在研究的衍生物中，环肽c[RGDfK]和c[RGDfV]的结合亲和力比线性RGD三肽分别增加了39倍和58倍(Kapp,etal.,[0276]上述改善的肽_肽共轭物的条件首次应用于OPA_c[RGDfK]_DM1的合成，反应条件轭物逐渐降解。在酸性介质中分解速率的增加与报道的酸催化的乙烯硫醚水解一致组分副产品随着时间的推移容易受到空气氧化(Zuman,Chem.Rev.204739–4744)。因此，在条件[D](条件[C]，一点DMAC(2.0当量)，1小时)下制备了OPA_c[0280]设计中加入了一个触发式药物释放系统，目标是最大化细胞内游离DM1的水平并质中的谷胱甘肽(GSH)含量比血浆高1000倍(Meister&Anderson,Annu.Rev.Biochem.1983,52,711–760)。此外，由于缺氧，癌细胞中GSH的浓度被发现更高(Bansal&Simon,J.Cell进行。最终，观察到在5mM的浓度下3小时内可以实择性和46％的收率提供了所需的产物PDC_3(图4E)。纯化的PDC_3与PDC_1相比具有改善的素受体，并已被用作各种含有RGD的靶向药物的阳性对照细胞系，包括Cilengitide(Maurer,etal.,Neuro_Oncology2009,11,747–756；ChenandChen,Theranostics性对照(Hussain,etal.,NucleicAcidTher.且通过3o_硫醇的引入促进的稳定性改进显示了比不耐受的异吲哚核心修饰技术更优越。可能是由于在DM1上引入的RGD环肽阻碍了药物到达细胞。对于具有突变RGE靶向基序的两细胞毒性没有观察到显著差异。尽管携带可释放DM1的PDC_3和PDC_6在六种化合物中相对靶向肽能够特异性地将药物传递给表达更高αvβ3受体的U87_MG细胞。此外，PDC_2在HEK_基团和/或功能到共轭物中。荧光靶向肽共轭物已被报道为非侵入性成像在临床前模型中挥着重要作用，因此它是一个重要的诊断和治疗靶点(Tai,etal.,J.Control.Release2010,146,264275)。通过噬菌体展示技术鉴定出的肽LTVSPWY被报道能够结合HER2受体[0289]这些通过OPA衍生物合成的进一步功能化的共轭物进一步扩展了化合物的化学范[0291]总之，已用于