DB65T5076-2026甜瓜杂交种品种纯度鉴定技术规程 KASP标记法_第1页
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Technicalspecificationforvarietypurityidentificationofmelonhybri2026-09-25实施2026-09-25实施克区南昌路403号),新疆维吾尔自治区农业农村厅(乌鲁木齐市天山区胜利路157号),新疆维吾尔自治区市场监督管理局(乌鲁木齐市新华南路167号)。GB/T3543.1农作物种子检验规程第1部分：总则GB/T3543.2农作物种子检验规程第2部分：托样GB/T3543.5农作物种子检验规程第5部分：品种质量品种纯度鉴定GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法NY/T2594植物品种鉴定DNA分子标记法总则25.2总则5.2.2本文件遴选了33个核心SNP位点用于甜5.2.4本文件推荐使用CTAB法提取胚根等待检测样品幼嫩组织DNA,其它可以满足KAS7.2DNA提取试剂310检测程序10.1DNA的制备10.1.1引物筛选取样父本、母本和F₁各30株幼嫩组织如胚根、子叶、真叶等(4mm直径叶片打孔器等量取样，重量约10.1.2待检测样品取样孔深孔板中(提前置入1粒直径4mm的钢珠),每个96孔深孔板放置88粒种子胚根。本文件推荐使用胚c)12000r/min离心2min,倒去上清，加入500μL70%的无水乙醇，12000r/min离心410.3.1PCR扩增表1基于微孔板或微量反应的PCR反应体系96孔板(10μL)384微孔板(2pL)DNA模板(80ng/μL)5151PCR扩增程序：95℃预变性10min火延伸温度降低0.6℃,95℃变性25s,61℃退火延伸45s,30个循环。若30个11.1每份样品包含2个96孔板，每个96孔板用2个KASP标记进行鉴定，综合2个KASP标记的11.4参照阳性对照(亲本)基因型，记录异常基因型种子的数量。品种纯度(P)以%表示，按公式(1)计算：…511.5两个样品板即为两个重复，参照GB/T3543.5中表3,两个重复之间在容许误差范围之内的，以写(表2),并由检测员和技术负责人签字。样品板1标记1标记1日期：日期：注1:检测结果仅对送检样品负贵，不对送检样品以外的种子负6引物编号因组DHL92V4.0)引物序列F¹引物序列F2TCGAGGATTGCTATGGAAGTCACGATCCTGATTGAATGGCAGTGGAGTCGAkAT7表A.133个SNP位点及KASP分型引物信息(续)引物编号因组DHL92V4.0)引物序列FI引物序列F2引物序列RTAGCTCCTGAAGTATCCT8引物编号因组DHL92V4.0)变异引物序列F1引物序列F2引物序列RCTGAGAATTCAGTCCTCA9引物编号因组DHL92V4.0)变异引物序列FI引物序列F2GCTCATCCTAGGAGT(资料性)B.12%CTAB溶液，总体积200mLa)取

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