DB53-T 1433-2025 烟草抗番茄斑萎病毒鉴定技术规程

烟草抗番茄斑萎病毒鉴定技术规程2025-10-29实施2025-10-29实施I本文件按照GB/T1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》给出的规则起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由云南省烟草专卖局(公司)提出。本文件由云南省烟草标准化技术委员会(YNTC12)归口。本文件起草单位：云南省烟草农业科学研究院、云南省烟草公司昆明市公司。本文件主要起草人：于海芹、黄昌军、刘勇、袁诚、曾建敏、童治军、姜宁、方敦煌、谢永辉。本文件的发布机构提请注意，声明符合本文件时，可能涉及到本标准的相关专利的使用，具体的专一种抗番茄斑萎病毒烟草植株的筛选方法(ZL20161005486.3)本文件的发布机构对于上述专利的真实性、有效性和范围无任何立场。上述专利持有人已向本文件的发布机构保证，他们同意在公平、合理、无歧视基础上，免费许可任何组织或者个人在实施该地方标准时实施专利。相关信息可通过以下联系方式获得：专利权人：云南省烟草农业科学研究院。地址：云南省昆明市五华区圆通街33号。请注意除上述专利外，本文件的某些内容仍可能涉及专利，本文件的发布机构不承担识别这些专利1本文件规定了烟草植株材料抗番茄斑萎病毒(tomatospottedwiltorthotospovirus,TSWV)毒源制备与接种方法和烟草材料抗病性鉴定。本文件适用于烟草的栽培品种、育种材料、种质资源以及野生种等植株材料对TSWV抗性的鉴定和评价。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T23222-2008烟草病虫害分级及调查方法3术语和定义下列术语和定义适用于本标准。TSW属于布尼亚病毒目(Bunyavirales),番茄斑萎病毒科(Tospoviridae),正番茄斑萎病毒属由TSWV侵染烟草引起的病害，病害症状见附录A。烟草抗TSW鉴定resistanceevaluationoftob指人工接种抗病性鉴定，依据TSWV侵染烟草植株的特性，叶片接种病毒，诱发病害，观察烟草植株对TSWV的病症反应，以病情指数差异评价烟草材料抗病性的过程。4毒源制备与接种方法2片～3片真叶时移植至花盆中，挑选生长健壮的3片～4片真叶的烟苗，备用。2在人工气候箱、光照培养室或60目防虫日光温室中接种，温度宜为22℃~25℃、每日光照时间不少于14h、湿度宜为60%～80%。取仅感染TSWV的病叶1g,放于研钵中，加入5mL接种缓冲液(附录C)和2g石英砂(200目～400目),充分研磨至混合均匀，得到TSWV毒源汁液，置于冰盒上备用。4.4接种方法及病害观察选取4.1中烟苗，在第2片～3片真叶上均匀喷洒石英砂，每片叶取4.3TSWV毒源汁液500μL,摩擦烟苗真叶。接种后用无菌水喷雾清洗叶片，暗培养出之后按4.2条件诱发病害。14d后，本氏烟表现出TSWV典型症状。5烟草材料抗病性鉴定试验设3次重复，随机排列，每个重复不少于15株。以野生烟“花烟草(Nicotianaalata)”或栽培烟Polata为高抗对照，主栽品种“云烟87”或“K326”为感病对照。5.2接种与诱发病害按照4.1的方法对待鉴定材料和抗感对照进行育苗，取4.4表现TSVV典型症状的本氏烟，按照4.3的方法准备毒源，按照4.4的方法进行接种，并按照4.2的条件诱发病害。接种后定期(每5d～7d调查一次)开展病情调查，以株为单位调查全部烟株。病害严重度分级见附录D。各次调查数据中，以感病对照最早达到感病状态时的调查数据为依据，进行抗性评价。病情指数的计算方法参照GB/T23222-2008,品种抗性评价标准见附录E。5.5有效性接种后至少有3次病害调查数据，同批次感病对照病情指数大于75,且抗病对照的病情指数低于25时，抗性评价结果有效。3(资料性)4(资料性)B.1症状本氏烟接种TSWV后，叶片皱缩，轻微黄化褪绿，茎干弯曲，一般不产生坏死，表现为系统侵染。B.2病毒纯度高若TSWV接种液混杂其它常见病毒(如TobaccoMosaicVirus,TMV、CucumberMosaicVirus,CMV)时，本氏烟会产生坏死。若TSWV接种液混杂有其他病毒，应重新制备仅含TSWV的毒源。B.3病毒浓度高本氏烟接种TSWV后一般不产生坏死，故病毒浓度高。B.4毒源存活时间长本氏烟接种TSWV后，一般不产生坏死表型，可长期存活。B.5发病特征感病对照接种本氏烟TSWV毒源，两周内全部发病。5(规范性)接种缓冲液的配制6(规范性)病害严重度分级病害严重度分级：——0级：全株无病，或仅接种部位出现黄色环纹或褪绿斑点。——1级：接种叶片接种部位外出现黄色环纹或褪绿斑点，非接种叶片正常，或植株无明显矮化。——3级：接种叶以上低于三分之一的叶片或茎秆表现症状，或植株矮化到正常株高的三分之二以——5级：接种叶以上三分之一至二分十的叶斤或茎秆表现症状，或植株矮化到正常株高的三分之二至二分之一。——7级：接种叶以上高于二分之一的叶片或茎秆表现症状，或植株矮化到正常株高的二分之一至三分之一。——9级：全株叶片和茎秆表现症状，或病株矮化到正常株高的三分之一以下。7(资料性)品种抗性评价标准划分品种抗病性评