CN119490557A 一种偶联物抗体比为2的双特异性抗体偶联药物的制备方法 （上海药明合联生物技术有限公司）

一种偶联物抗体比为2的双特异性抗体偶联本发明涉及一种偶联物抗体比为2的双特异的制备方法包括以下步骤：(1)将含有双特异性氧化反应；(3)加入金属离子螯合剂和连接有接2的双特异性抗体偶联药物。本发明制备获得的物含量高于70wt不需要引入蛋白质工程、酶22.根据权利要求1所述的偶联物抗体比为2优选地，所述含有双特异性抗体的溶液中的双特异性抗3.根据权利要求1或2所述偶联物抗体比为2的双特异性抗体偶联药物的制备方法，其二核苷酸或烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸中的任意一种或4.根据权利要求1～3任一项所述偶联物抗体比为2的双特异性抗体偶联药物的制备方优选地，所述含有双特异性抗体的溶液中的双特异优选地，步骤(3)中所述获得所述偶联物抗体比为2的双特异性抗体偶联药物前还包5.根据权利要求1～4任一项所述偶联物抗体比为2的双特异性抗体偶联药物的制备方3结构域和第三Fab结构域共价连接，所述第二Fab结构域和第三Fab结构域的氨基酸序列相6.根据权利要求5所述偶联物抗体比为2的双特7.根据权利要求5或6所述偶联物抗体比为2的双特异性抗体偶联药物的制备方法，其优选地，所述双特异性抗体的组成包括SEQIDNO.1～SEQIDNO.4所示的氨基酸序权利要求1～7任一项所述的偶联物抗体比为2的双特异性抗体偶联药物的制备方法制备得到。优选地，所述药物通过接头与双特异性抗体铰链区10.如权利要求1～7任一项所述的偶联物抗体比为2的双特异性抗体偶联药物的制备方法或权利要求8或9所述的偶联物抗体比为2的双特异性抗体偶联药物在制备抗肿瘤药物4[0001]本发明涉及抗体药物领域，尤其涉及一种偶联物抗体比为2的双特异性抗体偶联[0004]双抗技术的发展同时也给ADC药物带来新的思路，通过设计一个双抗ADC残基或利用链间二硫键进行随机偶联的方式实现小分子药物在双抗上的位点特异性偶联。[0006]为解决上述技术问题，本发明提供了一种偶联物抗体比为2的双特异性抗体偶联[0008]第一方面，本发明提供了一种偶联物抗体比为2的双特异性抗体偶联药物的制备5[0011](3)加入金属离子螯合剂和连接有接头的药物分子，反应后获得所述偶联物抗体[0013]本发明提供了一种简单高效，不需蛋白质工程、连接子有效载荷修饰和/或酶催联过程相比，本发明的生物偶联过程产生的DAR2多价双抗ADC产物的均一性可以得到显著改善，DAR2的含量通常超过70wt最好超过80wt而在常规巯基随机偶联工艺制备的[0018]优选地，所述含有双特异性抗体的溶液中双特异性抗体的浓度为0.02～0.04mM(DTNB)、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)或烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADP)中的任意一种67[0060]SEQIDNO.1：DIQLTQSPSSLSASVGDRVSITCKASQDVSIAVAWYQQGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFAVYYCQQHYITPLTFGAGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKS[0061]SEQIDNO.2：QVQLQQSGSELKKPGASVKVSCKASGYTFTNYGMNWVKPTYTDDFKGRFAFSLDTSVSTAYLQISSLKADDTAVYFCARGGFGSSYWYFDVWGQGSLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCGGGGSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWVRQAPGKGLEWVARIYPTNGYTRYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCSRWGGDGFYAMDYWGQGTLVTVLEDLKNVFPPEVAVFEPSEAEISHTQKATLVCLATGFYPDHVELSWWVNGKEVHSGVCTDPQPLKEQPALQDSRYALSSRLRVSATFWQNPRNHFRCQVQFYGLSENDEWTQDRAKPVTQIVSAEAWGRASDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPCREEMTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSL[0062]SEQIDNO.3：DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDVNTAVAWYQQKGVPSRFSGSRSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQHYTTPPTFGQGTKVEIKPDIQNPDCAVYQLRDSKSSDKSVCLFTDFDSQTQVSQSKDSDVYITDKCVLDMRSMDFKSNSAVAWSQKSDFACANAFQNSIIPECT[0063]SEQIDNO.4：QVQLQQSGSELKKPGASVKVSCKASGYTFTNYGMNWEPTYTDDFKGRFAFSLDTSVSTAYLQISSLKADDTAVYFCARGGFGSSYWYFDVWGQGSLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVCTLPPSREEMTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEAL域和第三Fab结构域的轻链，SEQIDNO.4中含有第二Fab结构域的重链、第二CH2和第二8体偶联药物由第一方面所述的偶联物抗体比为2的双特异性抗体偶联药物的制备方法制备[0070]第三方面，本发明提供了如第一方面所述的偶联物抗体比为2的双特异性抗体偶联药物的制备方法或第二方面所述的偶联物抗体比为2的双特异性抗体偶联药物在制备抗DAR2的含量通常超过70wt最好超过80wt不需要引入蛋白质工程、酶促反应或额外有[0074](2)本发明制备获得了一种DAR2双特异性抗体偶联药物，使用双特异性抗体本身[0079]实施例中未注明具体技术或条件者，按照本领域内的文9[0087]本实施例提供了一种DAR2的双特异性抗体偶联药