胆道恶性肿瘤融合基因检测临床实践中国专家共识2026版解读-DNA与RNA共检及样本质控

CHINESEEXPERTCONSENSUSONFUSIONGENETESTINGINBILIARYTRACTCANCERS·2026胆道恶性肿瘤融合基因检测临床实践共识3条推荐意见｜7个融合靶点｜DNA与RNA共检从样本到报告：把融合检测的准确性写在质控指标上专家共识解读｜肝胆肿瘤、病理与分子诊断医师培训用融合基因FUSIONGENE检测方案TESTINGSTRATEGY样本质控SPECIMENQC本课件不含单位名称与个人署名，情境信息已脱敏；配图来自公开知识共享图库，仅用于教学示意，不含患者身份信息。CONTENTS目录按检测决策的实际顺序展开：先讲共识怎么来的，再解释融合基因为什么难检，随后比较常规检测技术与NGS方案，逐一对比七个靶点，最后落到资质、报告与样本质控。01共识概况与制订方法BTC分型、3档推荐强度与注册信息02融合基因的分子基础结构变异、断点与人群发生率03靶向治疗证据与共识1抑制剂疗效、获批状态与耐药04常规检测技术比较IHC、FISH、RT-PCR与NGS05NGS方案与建库策略DNA与RNA层面及共检模式06七个靶点详解定位、伴侣基因与检测方案07资质、同意与报告解读法规认可、告知要点与报告要素08样本管理与质量控制新鲜组织、FFPE与质控阈值201CHAPTERONE共识概况与制订方法OVERVIEWANDMETHODS胆道恶性肿瘤按病理起源分为胆管癌与胆囊癌，胆管癌再分肝内与肝外推荐意见分为A（强推荐）、B（中等程度推荐）、C（弱推荐）3个等级本共识已在国际实践指南注册与透明化平台注册，注册号为PREPARE-2025CN1083301·共识概况与制订方法共识的四个基础标识42类肿瘤的病理起源胆管癌与胆囊癌；胆管癌按生长部位再分为肝内胆管癌与肝门部及胆总管的肝外胆管癌3档专家推荐强度A强推荐、B中等程度推荐、C弱推荐；分级参照GRADE并结合ASCO指南方案作部分修改3条共识推荐意见分别针对检测人群与靶点、检测方案与结果解读、送检样本与质量控制2026版共识发布年度由两个专业学术组织的胆道肿瘤委员会牵头，组织多学科专家团队讨论、修订形成共识的循证医学证据等级评价参照GRADE分级与《牛津循证医学中心分级2011版》两套体系01·共识概况与制订方法分级与注册信息怎么读5口径共识取值页面读法推荐强度分A（强推荐）、B（中等程度推荐）、C（弱推荐）3个等级写在每条共识末尾证据等级以数字标注，本共识取2～3、3～4两档区间与推荐强度并列出现分级依据GRADE与《牛津循证医学中心分级2011版》，并参照ASCO方案修改共识表1给出完整定义条目结构共识条目＋专家组意见，意见段给出研究与文献依据本课件按主题分章讲解注册信息PREPARE-2025CN1083国际实践指南注册与透明化平台完整分级定义见共识表1，具体条款以正式发布文本为准；本课件只做要点归纳，不替代原文01·共识概况与制订方法共识要解决的四个问题61检出率偏低DETECTIONRATE临床实践发现，FGFR2等胆道恶性肿瘤融合基因检测仍面临较大挑战，FGFR2融合变异检出率明显低于文献报道，检测准确性有待进一步提高2判定层面不同THREELEVELS基因融合可从DNA、RNA或蛋白质层面判定，临床常用方法包括免疫组化、荧光原位杂交、逆转录聚合酶链式反应与二代基因测序3技术边界各异TECHSCOPE胆道恶性肿瘤相关融合基因的独特分子特征，以及不同检测技术的适用范围和检测要点，成为制约检测结果准确性的重要内容4基层决策依据CLINICALUSE针对不同融合蛋白的靶向抑制剂已成为多种抗肿瘤药物研发的重要方向，共识以期为基层专科医师开展临床靶向诊疗实践提供决策依据准确识别融合基因病人及其发生治疗耐药的机制，是实现精准治疗的必要措施01·共识概况与制订方法胆道树：起源部位怎么分7图片来自公开知识共享图库（CCBY4.0）：胆道树命名示意图，显示肝内外胆管逐级汇合后经胆总管引流至十二指肠•按病理起源部位分为胆管癌与胆囊癌两类•胆管癌按生长部位再分肝内与肝外胆管癌•肝外胆管癌涵盖肝门部及胆总管来源•生长部位不同，融合基因的发生率随之不同•FGFR2融合主要发生在肝内胆管癌的小胆管亚型既往进展期或术后辅助治疗多以化疗为主，现已进入靶向与免疫治疗阶段02CHAPTERTWO融合基因的分子基础与流行病学MOLECULARBASISANDEPIDEMIOLOGY实体瘤中发生基因融合变异的比例为16.5%～20.0%，大多数为随机事件目前已发现约10861个基因融合，涉及8934个染色体位点胆道恶性肿瘤的融合主要集中在FGFR2、NTRK1-3、RET等靶点802·融合基因的分子基础基因融合是怎么形成的91嵌合基因CHIMERA两个独立基因的部分或全部序列通过染色体结构变异形成新的嵌合基因，进而编码具有新功能的融合蛋白2五种变异STRUCTURALVARIANTS染色体易位、倒位、插入、串联重复和缺失等是常见的染色体结构变异形式，由这些变异产生的融合基因是两个或多个基因片段在基因组中重组形成的新序列3阅读框OPENREADINGFRAME当融合断点处于两种开放阅读框之间时，可编码产生具有独特结构和功能的融合蛋白；断点定位可显著影响靶向药物敏感度4三条途径DRIVENPATHWAYS融合蛋白通过信号通路失控、表观遗传失调、形成肿瘤新抗原等多种途径驱动肿瘤发生和进展融合断点位置与伴侣基因的功能结构域共同决定融合蛋白的致癌性及药物治疗响应性02·融合基因的分子基础四个必须记住的流行病学数值1016.5%实体瘤融合变异比例下限实体瘤中发生基因融合变异的比例为16.5%～20.0%，大多数基因融合均为随机事件10861已发现的基因融合数目这些融合涉及8934个染色体位点，构成融合检测的伴侣基因长尾基础8934涉及的染色体位点伴侣基因分布广泛，FGFR2的融合伴侣见于除13、15、16、21、Y与X外的染色体7%～22%FGFR2融合总体发生率FGFR2融合多见于肝内胆管癌，是胆道恶性肿瘤中发生率最高的融合靶点除FGFR2融合外，其余融合靶点在胆道恶性肿瘤中较为罕见，发生率普遍＜1%02·融合基因的分子基础各融合靶点的发生率111FGFR2总体肝内胆管癌中总体发生率为7%～22%2欧美人群肝内胆管癌为10%～15%，高于国内报道3国内人群肝内胆管癌为5.5%～11.9%4肝外与胆囊肝外胆管癌约2%，胆囊癌约3%5NTRK1-3多见于肝内胆管癌与胆囊癌，为2%和1.7%6RET融合多发生于肝内胆管癌，发生率为1.8%7罕见靶点ALK、ROS1、NRG1、MET仅有散在报道8人群特征发病年龄更早、女性比例高于男性疾病仅限于肝脏以及丙型肝炎病毒抗体和（或）乙型肝炎表面抗原阳性，与FGFR2融合明显相关02·融合基因的分子基础染色体：融合发生的结构层面12图片来自公开知识共享图库（公有领域）：中期分裂相的彩色染色体显像，示意易位、倒位、插入等染色体结构变异的发生层面•融合由两个或多个基因片段在基因组中重组形成新序列•常见结构变异为易位、倒位、插入、串联重复与缺失•已发现的融合涉及8934个染色体位点•FGFR2伴侣基因广泛分布于除13、15、16、21、Y与X号外的染色体•约35%的FGFR2伴侣基因集中于10号染色体伴侣基因多样性即「长尾效应」，在FGFR2、NRG1与NTRK中尤为显著03CHAPTERTHREE靶向治疗证据与共识1TARGETEDEVIDENCEANDSTATEMENT1FIGHT-202、NAVIGATE等试验证实靶点抑制剂可为晚期不可切除病人带来生存获益FGFR抑制剂在肝内胆管癌二线治疗中总体客观缓解率达20.7%～51.6%获得性耐药通常发生在治疗后6～12个月，主要机制为激酶结构域突变1303·靶向治疗证据与共识1共识1：检测人群与靶点范围14共识1·检测人群证据等级2～3｜推荐强度A对晚期或不可切除胆道恶性肿瘤病人，建议可进行包含FGFR2、NTRK1/2/3、RET、ALK、ROS1、NRG1、MET等靶点的融合基因检测方案，以筛选潜在可靶向治疗人群，其中对肝内胆管癌人群检测的临床价值尤为重要。筛选人群SCREENING•以筛选潜在可靶向治疗人群为目的•重视肝内胆管癌、女性或年轻病人•乙型肝炎表面抗原和（或）丙型肝炎抗体阳性者更需检测•其余融合靶点发生率普遍＜1%，阳性病例特征报道尚缺长尾效应LONGTAIL•肝内胆管癌的FGFR2融合已报道150余种伴侣基因•除最常见的BICC1外多为个案报道•泛实体瘤NTRK队列鉴定出88种独特伴侣•其中65.9%为新发现类型决策价值DECISION•伴侣基因不同可改变融合蛋白功能特性•融合断点定位显著影响靶向药物敏感度•明确断点位置与伴侣类型对治疗决策具有指导价值•BICC1融合组缓解率优于非BICC1组（42.9%对30.8%）03·靶向治疗证据与共识1FGFR抑制剂的疗效口径15药物疗效数据口径与场景佩米替尼总体客观缓解率35.5%FGFR1/2/3抑制剂，人群肝内胆管癌占比98%；已获批准用于经治FGFR2融合或重排的晚期胆管癌总体区间20.7%～51.6%各类FGFR抑制剂在肝内胆管癌二线治疗中的缓解率范围Infigratinib18.8%～23.1%研究报道的客观缓解率区间Derazantinib20.7%～21.4%二线缓解率；在2例未经系统治疗者中中位无进展生存期为5.7个月Erdafitinib显示抗肿瘤活性Ⅰ期研究与RAGNAR研究结果，尚未给出稳定缓解率区间除佩米替尼、Futibatinib等药物外，其他尚未被纳入指南的FGFR抑制剂也均显示出较好疗效03·靶向治疗证据与共识1已获批与尚待获批的靶向药物16已取得适应证APPROVED•佩米替尼：既往至少一种系统治疗后、FGFR2融合或重排的晚期、转移性或不可手术切除胆管癌•恩曲替尼、拉罗替尼：经充分验证方法诊断为NTRK融合的成人和儿童实体瘤•塞普替尼、普拉替尼：RET融合阳性的非小细胞肺癌、甲状腺髓样癌与甲状腺癌•Zenocutuzumab：晚期不可切除或转移性NRG1融合阳性胆管癌，尚未在国内获批尚无BTC适应证OFFLABEL•RET抑制剂在胆道恶性肿瘤中未取得适应证，仅有部分缓解、完全缓解与疾病稳定报道•ALK抑制剂阿来替尼、洛拉替尼、克唑替尼均未批准用于胆道恶性肿瘤•MET抑制剂克唑替尼、卡马替尼在胆道恶性肿瘤中无获批适应证•ROS1抑制剂克唑替尼未批准用于胆道恶性肿瘤，阳性个案曾达部分缓解1例携带FGFR2：：BICC1融合的胆囊癌病人经佩米替尼治疗后获部分缓解，提示抑制剂对FGFR2融合阳性胆囊癌或有积极作用03·靶向治疗证据与共识1获得性耐药的四个层面17时间窗6～12个月•FGFR靶向治疗后疾病进展通常发生在6～12个月•临床应用中不可避免出现获得性耐药主要机制激酶结构域•FGFR2激酶结构域发生获得性突变•突变干扰FGFR抑制剂与靶点结合外推证据其他癌种•胆道恶性肿瘤中融合相关耐药报道仍较少•非小细胞肺癌已证实RET、ALK、MET融合与靶向耐药相关检测建议后线依据•对耐药病人建议同时覆盖更多融合类型•并覆盖激酶结构域突变以全面解析耐药机制目前关于融合基因在胆道恶性肿瘤耐药中的作用仍需进一步探索，为后线治疗方案提供分子依据03·靶向治疗证据与共识1组织学起点：从形态到分子18图片来自公开知识共享图库（CCBY-SA3.0）：胆管癌组织学高倍镜图像，可见腺癌成分与间质反应，画面为染色切片、不含身份信息•融合检测的前提是获取合格的肿瘤组织学或细胞学标本•取材应尽量选取肿瘤组织较多区域并避开坏死组织•肿瘤成分占比需达到20%以上方可送检•肉眼难以判别时可采用冰冻切片判读•穿刺活检标本推荐在安全前提下多部位取材组织形态学诊断与分子检测在同一份标本上衔接，样本质量决定检测下限04CHAPTERFOUR常规检测技术横向比较FOURROUTINEASSAYS临床常用检测方法包括免疫组化、荧光原位杂交、逆转录聚合酶链式反应与二代基因测序免疫组化与荧光原位杂交无法提供融合伴侣及断点的确切核苷酸序列信息RNA测序方法是胆道恶性肿瘤融合变异检测的金标准1904·常规检测技术比较四类技术的原理要点201免疫组化IHC通过检测嵌合蛋白过表达或细胞内蛋白质定位异常，直接提示融合变异存在；受抗体特异性与融合事件复杂性影响，易出现假阳性或假阴性2荧光原位杂交FISH利用碱基互补配对原理，使荧光标记探针与目标基因DNA退火结合后观察杂交信号模式，判断是否发生融合并确定基因重排的位置和模式3逆转录PCRRT-PCR通过特异性引物结合融合断点或断点周围区域，扩增相应互补DNA序列以识别基因融合，具有较高的敏感度与特异度4二代测序NGS高通量基因测序技术，可在DNA或RNA层面判定融合事件，能同时筛查已知和未知融合类型，尤其适用于罕见或复杂融合NGS的三项优势为检测通量高（同时检测数百万个核酸片段）、覆盖广与定位明确04·常规检测技术比较四种方法怎么选21免疫组化快、成本低•泛TRK抗体可同时检测NTRK1/2/3融合蛋白表达，适合初筛•存在生理性表达导致的假阳性，对NTRK3灵敏度有限荧光原位杂交结果直观•操作较复杂，一次仅能检测少数位点，受杂交效率影响可出现假阴性•判读较主观，对制片与判读技术要求高，检测前须严格培训逆转录PCR已知融合•检测通量较低，只能检测已知经典融合类型•无法检测引物未覆盖或未知的融合类型二代测序覆盖最广•支持组织学、细胞学及体液等多种样本类型•依据检测层面分为DNA测序与RNA分析两类方案在荧光原位杂交结果不确定的情况下，建议进行RNA测序进一步验证04·常规检测技术比较技术路线的三条选型原则22需要根据样本来源、样本质量、病人临床信息特征及融合基因分子特征，制订规范化、个体化的检测方案。1判定层面基因融合可从DNA、RNA或蛋白质层面判定，三个层面的信息量、成本与时效差异明显，选型须先明确要回答的问题。2信息完整性免疫组化与荧光原位杂交无法获悉融合伴侣及断点的确切核苷酸序列；需要断点与伴侣信息时应选择测序层面检测。3金标准目前RNA测序方法是胆道恶性肿瘤融合变异检测的金标准；全基因组与全转录组测序成本高、流程复杂，多用于科学研究。全基因组测序需大量起始DNA、平均覆盖度较低且对标本质控要求高，一般不用于常规临床检测04·常规检测技术比较荧光原位杂交：信号与局限23图片来自公开知识共享图库（CCBY-SA3.0）：荧光原位杂交原理示意，显示探针标记、变性、杂交与信号识别流程•探针须具备较高敏感度与特异度，以识别特定片段•检测FGFR2融合主要采用断裂探针法，识别染色体断裂区域•对距离较近（＜3Mb）的重排存在检测局限性•无法明确具体融合伴侣，更适用于融合事件快速筛查•226例样本中检出23例阳性、其中3例为假阳性RNA测序在特异性与敏感度上分别达到99.5%与100%，为该靶点最准确方案05CHAPTERFIVENGS方案与建库策略SEQUENCINGSTRATEGY建议优先采用DNA测序与RNA测序同步共检或平行共检的高通量方案DNA测序可同步识别单核苷酸变异、插入缺失、拷贝数变异、突变负荷与微卫星不稳定RNA测序可在仅含外显子的转录本层面鉴定融合，断点位置相对固定2405·NGS方案与建库策略共识2：优先共检、互补验证25共识2·检测方案证据等级3～4｜推荐强度A对晚期不可切除或初诊需系统治疗的病人，建议优先采用DNA测序与RNA测序同步共检或平行共检的高通量方案；受限时可结合其他方法互补检测和验证。受限情形LIMITS•样本量受限时•检测平台受限时•临床时效受限时•可结合免疫组化、荧光原位杂交、逆转录PCR或单一测序层验证信息互补COMPLEMENT•DNA层面识别融合与重排及五类变异•RNA层面擅长融合、可变剪接与表达定量•联合可获得更可靠且信息更丰富的结果•不同测序panel之间检测效能存在差异方法取舍TRADE-OFF•综合考虑样本获取难度与治疗时间窗口•RNA检测采用扩增子测序法更为合适•技术层面已实现DNA与RNA在同一panel•需重点评估拷贝数变异时改用捕获法平行共检05·NGS方案与建库策略DNA测序与RNA测序26DNA-NGSDNALEVEL•标本为肿瘤组织学和细胞学标本，还可通过循环肿瘤DNA检测血液、胆汁等体液•主要适用于IDH1突变、ERBB2突变或扩增等驱动基因变异•外显子区域仅约占人类全基因组的1%•融合断点绝大多数广泛分布于内含子和基因间隔区，长片段与重复序列可致漏检•无法获悉融合DNA片段是否发生转录，难判非经典融合是否为驱动事件RNA-NGSRNALEVEL•检测标本为肿瘤组织学样本，在体液等其他样本类型中应用受限•在仅含外显子的转录本层面鉴定融合，无需考虑内含子与可变剪接影响•融合表现为两个基因外显子结合，断点位置相对固定•可用较小靶区域与较少探针实现融合事件全面检测•还可检测可变剪接、明确融合读码框并定量基因表达水平FGFR2等断点多样、伴侣复杂的基因，只有对这些区域设计完整探针覆盖才能全面检测05·NGS方案与建库策略NGS检测的四步流程271样本质控与质量保证PRE-QC评估核酸含量、完整性与纯度，确认样本类型与肿瘤细胞含量是否满足所选建库方法的要求2预处理与接头连接LIBRARY完成样本预处理、接头连接与预扩增；扩增子法流程快速、所需样本量较少，杂交捕获法流程较长3靶区捕获与纯化CAPTURE利用与目标区域互补的核酸探针进行富集，随后完成靶区纯化与扩增文库构建后的质控与定量4测序与数据分析SEQUENCING进行高通量基因测序并拆分下机数据；所有环节均应有标准操作规程和完整操作记录全流程管理涵盖每个环节，须在通过省级相关技术审核和登记备案后方可开展肿瘤高通量基因测序05·NGS方案与建库策略杂交捕获法与扩增子法28杂交捕获法HYBRIDCAPTURE•利用与目标区域互补的核酸探针进行富集•适用于高通量基因panel、全外显子组或转录组测序•流程较长，对样本量和质量要求较高•核酸用量：DNA需50～200ng，RNA需150～1000ng•需重点评估拷贝数变异时的推荐路线扩增子法AMPPLICON•通过特异性引物对目标区域进行PCR扩增•建库流程快速，所需样本量较少，适用FFPE等部分降解样本•检测范围通常限于已知靶点，对未知融合伴侣存在局限•核酸用量：DNA与RNA各25ng，最低可至10ng•若两个相关基因均未纳入引物清单则会出现漏检对于核酸量较低的标本，采用扩增子法具有较明显优势05·NGS方案与建库策略高通量测序平台29图片来自公开知识共享图库（CC0）：桌面式高通量基因测序仪实物照，画面为设备与实验台面，不含可辨认人员面部与患者信息•NGS可在DNA或RNA层面判定融合事件•同时筛查已知和未知融合类型，适用罕见或复杂融合•支持组织学、细胞学及体液等多种样本类型•分为基于DNA测序与基于RNA分析两类方案•共检须避免两类核酸相互干扰并实现下机数据精准拆分所用试剂需获得国家药品监督管理局批准，或在试点机构使用已备案的检测试剂06CHAPTERSIX融合靶点的分子特征SEVENFUSIONTARGETSFGFR2是胆道恶性肿瘤中最常见的融合变异，检测技术难度也最高NTRK、RET、NRG1、ALK、MET、ROS1在胆道恶性肿瘤中多为罕见或个案明确断点位置与伴侣基因类型，是判断致癌性与药物敏感性的关键3006·融合靶点详解七个靶点的定位与现状31靶点染色体定位发生率与药物现状FGFR210q26.13肝内胆管癌5.5%～11.9%；佩米替尼已获批用于经治FGFR2融合或重排者NTRK1/2/31q23.1、9q21.33、15q25.3胆道恶性肿瘤约0.1%；恩曲替尼、拉罗替尼已获泛实体瘤适应证RET10q11.2约0.1%，肝内胆管癌1.8%；塞普替尼、普拉替尼尚无该瘤种适应证NRG18p12罕见；Zenocutuzumab已获美国批准、国内尚未上市，篮子试验中胆管癌占比6%、缓解率20%ALK2p23.1仅个案报道；阿来替尼、洛拉替尼、克唑替尼均未获批用于该瘤种MET7q31发生率低，仅个案报道；克唑替尼、卡马替尼无获批适应证ROS16q22.1胆管癌约1.1%；克唑替尼未获批，阳性个案曾达部分缓解各靶点的发生率与获批状态差异明显，检测方案须与可用的治疗手段相匹配06·融合靶点详解伴侣基因与融合断点321最常见伴侣BICC1约占所有FGFR2融合的27%2热点占比仅20%～30%的融合伴侣为热点基因BICC13其他伴侣AHCYL1、TACC2、CCDC6、KIAA1217、WAC等4断点集中主要位于第17～18外显子及内含子区域5三种亚型经典、亚经典、非经典；仅前两者受激酶抑制剂抑制6无伴侣重排约10%的阳性病例无法明确融合伴侣7基因间区11.1%的重排下游断点位于基因间区，经转录后剪接成融合8复杂重排存在17号内含子相关重排等较复杂形式伴侣基因多含二聚化结构域，可诱导FGFR2受体二聚化并持续激活信号通路06·融合靶点详解四个罕见靶点的证据现状33NRG1三项致癌条件•须位于融合基因3′端并含第6～7外显子EGF样结构域•阅读框完整，或存在内部转录起始位点ALK断点集中•常见断点位于第19内含子或第20外显子，EML4为最常见伴侣•非经典融合一线治疗中位无进展生存8.4个月短于12.0个月MET断点决定功能•断点主要集中于第1与第14内含子等区域•第14外显子缺失与蛋白过表达及更高缓解率相关ROS1伴侣影响疗效•胆管癌中伴侣基因包括RDX、GOPC，多为个案•CD74融合者中位无进展生存17.0个月短于非CD74的21.0个月泛瘤种研究发现的常见伴侣类型尚不能直接外推至胆道恶性肿瘤人群，需本土数据支撑06·融合靶点详解各靶点的检测方案要点34NTRK与RETNTRK/RET•NTRK2内含子较长，引物设计或探针覆盖范围至关重要•免疫组化适合初筛但需分子检测验证•逆转录PCR适用已知融合（如ETV6：：NTRK3）快速检测•RET断点集中在第10或11号内含子，不同伴侣间敏感度差异较小•DNA联合RNA测序可更精准识别RET融合伴侣类型其余五个靶点FGFR2/NRG1/ALK/MET/ROS1•FGFR2可采用荧光原位杂交或测序方案，前者适合快速筛查•对可疑融合需通过RNA测序或长读长测序验证为功能性融合•NRG1检测中RNA测序可直接验证功能性融合转录本，为金标准•测序覆盖ALK全序列及伴侣基因可提高检出率•ROS1断点多位于大内含子，DNA层面易因覆盖不足漏检循环肿瘤DNA检测适用组织样本不足者，可动态监测但灵敏度较低、可能漏检低丰度融合06·融合靶点详解长读长测序：验证可疑融合35图片来自公开知识共享图库（CCBY4.0）：纳米孔测序原理示意图，显示膜双层、孔道蛋白与驱动酶牵引单链核酸穿过孔道的读取过程•DNA层面检出的可疑融合需进一步验证为功能性基因融合•长读长测序可跨越内含子与重复序列区域•适用于断点多样、伴侣复杂的FGFR2融合•RNA层面可直接给出融合转录本与读码框信息•验证结论应写入报告的融合点位置与融合亚型项报告解读须根据证据等级评估变异与药物敏感度的关系07CHAPTERSEVEN检测资质、知情同意与报告ACCREDITATIONANDREPORTING境内实施肿瘤高通量基因测序的机构需通过省级相关技术审核和登记备案检测实验室应已通过国家级认可机构的检查和认可开展前应取得病人或其指定法定代理人的知情同意文件3607·资质、同意与报告解读开展检测的六项资质核对37机构是否完成审核备案？须通过省级卫生行政部门相应技术审核和登记备案后方可开展肿瘤高通量基因测序实验室是否通过认可？应已通过中国合格评定国家认可委员会、ISO15189或美国病理医师协会检查和认可试剂是否合规？所用试剂需获国家药品监督管理局批准，或在试点机构使用已备案的测序试剂环节是否有标准规程？从样本质控到测序分析的全流程均应有标准操作规程和完整操作记录知情同意是否齐备？应取得病人或其指定法定代理人的知情同意文件，并获悉肿瘤家族史等相关信息局限性是否告知？须向医师与病人告知检测包含的驱动基因数量、报告范围及技术分析的灵敏度与特异度知情同意内容应充分体现高通量测序的法规依据、临床应用价值和局限性07·资质、同意与报告解读知情同意的四个告知层面381目的与范围PURPOSE充分向其解释依据精准医学治疗理念进行肿瘤高通量基因测序的目的和适用范围2检测内容CONTENT告知检测包含的驱动基因数量、信息、报告范围等关键内容，使病人理解能查到什么、查不到什么3性能与局限PERFORMANCE说明技术分析的灵敏度和特异度，并充分告知检测的局限性，包括漏检与结果不确定的可能4结果用途USAGE充分告知检测结果是否用于精准个体化治疗，并明确须由临床医师参考并决策开展前还应获悉肿瘤家族史等相关信息，使知情同意与临床决策衔接07·资质、同意与报告解读报告要素与融合变异解读39报告结构6项规范报告应包含的信息模块4点融合变异解读的必备内容报告的解读部分应根据证据等级评估变异与药物敏感度的关系受检者与样本受检者信息与样本信息一并列明，便于溯源与复核质控信息呈现核酸量、完整性等质控结论，说明是否满足检测要求检测项目描述写明检测范围和方法，界定本次检测覆盖的基因清单实验室信息包括实验室名称、操作人员及报告审核人员结果与解读给出基因功能分析与具体变异形式，并评估其临床意义融合变异的解读应包括融合基因的标识和命名、融合点位置、融合亚型，以及功能与致病性评估07·资质、同意与报告解读测序全流程管理链路40质控STEP1•样本质控与质量保证•评估核酸含量与完整性预处理STEP2•样本预处理与切片•接头连接与预扩增捕获STEP3•基因组靶区捕获•靶区纯化建库STEP4•扩增文库构建•构建后质控与定量测序STEP5•高通量基因测序•数据分析与拆分全流程管理涵盖每个环节，所有环节均应有标准操作规程和完整操作记录，保证结果可追溯07·资质、同意与报告解读合规实验室的场景要求41图片来自公开知识共享图库（CCBY-SA4.0）：基因扩增检验实验室内的多台测序平台与实验台面，画面不含可辨认人员面部与患者信息•测序相关机构需通过技术审核和登记备案•实验室应通过国家级认可机构检查和认可•所有环节须具备标准操作规程•操作记录完整可追溯是报告可靠性的前提•试剂来源与备案状态应与检测项目匹配中国合格评定国家认可委员会是国内医学检测实验室质量评定的国家级认可机构08CHAPTEREIGHT样本管理与质量控制SPECIMENANDQUALITYCONTROLFFPE样本是胆道恶性肿瘤最常用的融合基因检测样本，并可用于RNA测序用于测序检测的样本肿瘤细胞含量应在20%以上建议尽量使用保存年限较短（3～5年以内）且DV200＞30%的标本4208·样本管理与质量控制样本类型与送检时限43新鲜组织理想样本•核酸尤其是RNA降解较少、质量较高，取材避开坏死组织•穿刺标本推荐多部位取材，肿瘤成分占比需达20%以上FFPE样本最常用•融合基因检测是定性检测，对RNA定量要求较低•可抽提DNA或RNA，分别用于两类测序方案血液样本有限适用•可从外周血提取循环肿瘤DNA进行融合基因检测•血浆游离RNA技术尚不成熟，不推荐用于融合检测送检时限关键节点•直接送检样本离体后10min内置于RNA组织保存液•择时送检应在离体后30min内置于液氮或-80℃冰箱样本肿瘤细胞含量不达标时，可采用有效的肿瘤细胞富集方法提高比例，或更换检测方法08·样本管理与质量控制质控指标怎么读44指标参考阈值含义与适用核酸用量25ng＋25ng扩增子法通常需DNA与RNA各25ng，最低可至10ng；捕获法分别需50～200ng与150～1000ng肿瘤细胞含量＞20%检测拷贝数变异及微卫星不稳定、突变负荷等标记物时组织样本应＞20%；RNA层面尚无明确最低阈值RIN值0～10基于18S与28S核糖体RNA电泳分析，数值越高完整性越好，更适用于高质量新鲜冰冻样本DV200＞30%长度超过200个