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中国兽医协会发布I请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。1大熊猫外周血涂片制备与染色技术规程本文件规定了大熊猫外周血涂片制备、染色和质量血细胞形态学检查bloodcellmorphologicalexam后在显微镜下观察其形态，为疾病的筛查与诊断提供4仪器、试剂与耗材级，无丙酮，用于固定）、蒸馏水或缓冲液（用于染色）、25.1人工制备血涂片操作操作人员需穿戴手套、口罩、实验服，避免直接接触血液样5.1.2采血血液采样方法按照T/CVMA235相关内容进行5.1.3滴样5.1.4推片5.1.6染色5.1.6.1瑞氏染色法。滴加3~5滴瑞氏染液覆盖涂片，液与染液混合，混匀，继续染色5min~10min。用蒸馏水轻轻冲洗，去除多余染液，直立晾干。5.1.6.2吉姆萨染色法。将涂片先用甲醇固定3mimin~30min，用蒸馏水冲洗，晾干。5.2全自动血涂片制备仪制备血涂片操作5.2.1准备5.2.1.1设备与试剂准备全自动推染片机或者半自动染片机（需人工制备血涂片后机5.2.1.2人员防护准备5.2.2取样推染片机可根据血液标本的红细胞比容或黏度来调整滴加的血量（2μl~4μl）。35.2.3进样5.2.4推片推片角度（20.0°~36.0°)、速度（30mm/s~185mm/s），血滴延展时间（0.5s~3.0s），仪器可根据血细胞分析的血细胞比容测定（HCT）检测结果调整血滴延展时间、推片速度和定期对仪器的推染片效果进行评估，做好仪器的维护保养。定期更换仪器推玻片和染液紫红色，核染色质清晰可见，细胞内外无或少见染料沉着。如染色不理想，可重新制49.1推片注意事项c)推片时，勿在垂直方向上对推片施力，也不可过早离开载玻片表面；d)应根据血液浓稠程度调整推玻片与载玻片的角度及推片速度，若血液稀薄，则应加大二者的f)血涂片不可接触福尔马林蒸汽，不可冷藏保存。9.2染色注意事项a)涂片样本应完全风干，根据涂片厚薄、有核细胞数量多少及环境温度调整染色时间；b)涂片厚、有核细胞数量多及环境温度低时，可适当延长染色时间；c)滴加的染液量应充足，避免染液蒸发导致染料沉淀物附着于涂片上；d)染液应新鲜或定期过滤，避免形成染料沉淀物妨碍涂片观察；f)不同厂家生产的染色时间稍有不同5A.1大熊猫血液人工涂片瑞氏染色示意图大熊猫血液人
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