病理技术考试试题及答案

病理技术考试试题及答案一、名词解释（共5题，每题4分，总计20分）1.石蜡切片术2.抗原热修复3.亲银反应4.荧光原位杂交（FISH）5.冰冻切片术二、单项选择题（共20题，每题1分，总计20分）1.常规病理组织固定最常用的固定液是（）A.无水乙醇B.10%中性福尔马林C.Bouin液D.丙酮2.10%中性福尔马林的标准pH值范围是（）A.6.0-6.5B.6.8-7.0C.7.2-7.4D.7.8-8.03.常规石蜡组织脱水的正确梯度顺序是（）A.100%→95%→90%→80%→70%B.70%→80%→90%→95%→100%C.70%→90%→95%→100%D.80%→90%→95%→100%4.常规病理石蜡切片的标准厚度是（）A.1-2μmB.3-5μmC.8-10μmD.15-20μm5.HE染色中，苏木精作为碱性染料主要结合的细胞成分是（）A.细胞质B.细胞核C.细胞外基质D.细胞膜6.HE染色中用于分化苏木精过染部分的常用试剂是（）A.盐酸酒精B.醋酸酒精C.福尔马林D.二甲苯7.下列哪种染色方法特异性用于显示组织中的胶原纤维（）A.抗酸染色B.天狼星红染色C.过碘酸-雪夫反应（PAS）D.普鲁士蓝染色8.免疫组化染色中，抗原热修复最常用的缓冲液是（）A.Tris-HCl缓冲液（pH8.0）B.柠檬酸盐缓冲液（pH6.0）C.EDTA缓冲液（pH9.0）D.磷酸盐缓冲液（pH7.4）9.免疫组化染色中，封闭内源性过氧化物酶的常用试剂是（）A.正常山羊血清B.3%过氧化氢-甲醇溶液C.牛血清白蛋白D.TritonX-10010.术中快速冰冻切片的常规制备厚度是（）A.2-3μmB.4-6μmC.8-10μmD.12-15μm11.脱钙处理主要用于下列哪种组织的石蜡包埋前预处理（）A.肝脏B.肾脏C.骨组织D.脑组织12.下列哪种试剂是病理常规技术中最常用的组织透明剂（）A.无水乙醇B.二甲苯C.石蜡D.甲醛13.病理科废弃的甲醛、二甲苯溶液属于哪类医疗废物（）A.感染性废物B.损伤性废物C.化学性废物D.病理性废物14.原位杂交技术检测的核心靶分子是（）A.蛋白质B.核酸C.糖类D.脂类15.苏木精染液配制过程中，常用的氧化剂是（）A.硫酸铝钾B.碘酸钠C.柠檬酸D.甘油16.常规石蜡包埋时，组织块的正确放置方式是（）A.组织切面朝下B.组织切面朝上C.组织侧面朝下D.随意放置17.下列哪种染色方法用于检测组织中的抗酸杆菌（）A.革兰染色B.抗酸染色C.吉姆萨染色D.瑞氏染色18.免疫组化染色中，DAB显色体系的阳性结果呈现的颜色是（）A.红色B.蓝色C.棕黄色D.绿色19.分子病理实验室中，可有效去除环境核酸污染的方法是（）A.75%酒精擦拭B.紫外线照射C.新洁尔灭擦拭D.生理盐水冲洗20.常规HE染色的完整操作流程是（）A.脱蜡→染色→分化→脱水→透明→封片B.烤片→脱蜡→水化→染色→分化→返蓝→脱水→透明→封片C.脱蜡→染色→返蓝→分化→脱水→透明→封片D.水化→染色→分化→脱水→封片三、多项选择题（共10题，每题2分，总计20分。多选、少选、错选均不得分）1.下列属于组织固定核心目的的有（）A.防止组织自溶腐败B.保持细胞原有形态结构C.使组织变硬便于后续处理D.增加组织的染色亲和性E.充分暴露组织内抗原决定簇2.下列试剂中，属于HE染色脱水剂的有（）A.二甲苯B.无水乙醇C.95%乙醇D.甲醛E.70%乙醇3.免疫组化染色中常用的对照类型有（）A.阳性对照B.阴性对照C.空白对照D.自身对照E.替代对照4.下列属于病理特殊染色技术范畴的有（）A.HE染色B.抗酸染色C.PAS染色D.网状纤维染色E.免疫荧光染色5.冰冻切片技术的适用场景包括（）A.术中快速病理诊断B.免疫荧光染色C.酶组织化学染色D.常规住院患者病理诊断E.新鲜组织分子病理样本制备6.下列属于病理科生物安全二级防护用品的有（）A.乳胶手套B.防护服C.护目镜D.医用外科口罩E.鞋套7.临床常用脱钙液的主要成分包括（）A.硝酸B.盐酸C.甲酸D.乙二胺四乙酸（EDTA）E.无水乙醇8.下列关于石蜡包埋的操作规范，正确的有（）A.包埋用石蜡温度通常高于熔点2-4℃，一般为58-62℃B.组织块切面朝下平整放置于包埋框底部C.包埋过程中应避免产生气泡，防止影响切片完整性D.同一患者的不同部位组织可放入同一包埋盒E.包埋后需快速冷却凝固，保证蜡块硬度均匀9.下列属于分子病理检测技术的有（）A.聚合酶链反应（PCR）B.荧光原位杂交（FISH）C.免疫组织化学染色D.二代测序技术E.原位杂交（ISH）10.病理科档案管理的内容包括（）A.病理切片B.石蜡包埋块C.病理申请单D.病理报告存根E.保存期内的大体标本四、简答题（共4题，每题5分，总计20分）1.简述10%中性福尔马林固定液的配制方法及组织固定的主要目的。2.简述免疫组化染色中抗原热修复的原理及常用方法。3.简述常规石蜡切片制备中出现切片破碎、不完整的常见原因。4.简述病理科医疗废物的分类及核心处理要求。五、论述题（共2题，每题10分，总计20分）1.试述苏木精-伊红（HE）染色的完整操作流程及各环节的质量控制要点。2.试述免疫组化染色出现假阴性结果的常见原因及防控措施。参考答案及评分标准一、名词解释1.石蜡切片术：是病理常规诊断中最核心的组织标本制备技术（1分），指将新鲜组织经固定、梯度脱水、透明、浸蜡、石蜡包埋等步骤制成石蜡包埋块（2分），再用切片机切成3-5μm的薄片，经染色后供光学显微镜下病理诊断使用的技术（1分）。2.抗原热修复：是免疫组化染色前的关键预处理步骤（1分），指通过加热处理组织切片，破坏甲醛固定过程中蛋白质之间形成的交联键（2分），使被遮蔽的抗原决定簇重新暴露，恢复抗原的免疫反应性，提高染色阳性率和准确性（1分）。3.亲银反应：属于特殊组织化学染色反应的一种（1分），指某些细胞内的物质（如类癌细胞中的嗜银颗粒）无需外加还原剂（2分），可直接将银染液中的银离子还原为金属银颗粒并沉积在阳性部位，呈现黑色的反应（1分）。4.荧光原位杂交（FISH）：是分子病理检测的核心技术之一（1分），依据核酸碱基互补配对原理，用荧光基团标记的特异性核酸探针与组织细胞内的靶DNA或RNA进行杂交（2分），通过荧光显微镜观察荧光信号的数量、位置或形态，检测靶核酸的存在、拷贝数变化或结构异常（1分）。5.冰冻切片术：指将新鲜组织在低温环境下快速冷冻达到适宜硬度后直接进行切片的技术（2分），具有制备速度快、能较好保留组织抗原活性和酶活性的特点（1分），主要用于术中快速病理诊断、免疫荧光染色及酶组织化学染色等场景（1分）。二、单项选择题1.B解析：10%中性福尔马林是病理组织固定的首选试剂，对组织形态保存好，成本低廉。2.C解析：10%中性福尔马林的标准pH为7.2-7.4，接近人体生理pH，可减少组织损伤。3.B解析：脱水需从低浓度到高浓度逐步进行，避免组织细胞急剧收缩变形，常规梯度为70%→80%→90%→95%→100%，其中95%和100%乙醇通常设置2道以保证脱水充分。4.B解析：常规石蜡切片厚度为3-5μm，肾穿刺、肝穿刺等活检标本可薄至2-3μm。5.B解析：苏木精为碱性染料，可与细胞核内带负电的DNA结合，将细胞核染为蓝紫色。6.A解析：1%盐酸酒精是HE染色中最常用的分化液，可去除细胞核外的非特异性苏木精着色。7.B解析：天狼星红染色可特异性显示胶原纤维，偏光显微镜下可区分Ⅰ型和Ⅲ型胶原；PAS染糖原/粘多糖，普鲁士蓝染含铁血黄素，抗酸染色染分枝杆菌。8.B解析：pH6.0的柠檬酸盐缓冲液是免疫组化抗原热修复最常用的缓冲液，适用绝大多数抗原；pH9.0的EDTA缓冲液多用于核抗原等难修复抗原。9.B解析：3%过氧化氢-甲醇溶液可灭活组织内的内源性过氧化物酶，避免后续DAB显色出现非特异性背景。10.B解析：术中冰冻切片常规厚度为4-6μm，过薄易破碎，过厚会影响细胞形态观察。11.C解析：骨组织含钙量高，质地坚硬，需经脱钙处理软化后才能进行石蜡包埋和切片。12.B解析：二甲苯可与无水乙醇互溶，也可溶解石蜡，是连接脱水和浸蜡步骤的核心透明剂。13.C解析：甲醛、二甲苯具有毒性、腐蚀性，属于化学性医疗废物，需专门收集处置。14.B解析：原位杂交的核心是核酸探针与靶核酸的互补结合，检测对象为DNA或RNA。15.B解析：苏木精本身无染色活性，需经氧化剂氧化为苏木红后才能与媒染剂结合发挥染色作用，碘酸钠是最常用的氧化剂。16.A解析：包埋时组织切面朝下，可保证切片时切到组织最大观察面，满足诊断需求。17.B解析：抗酸染色利用分枝杆菌细胞壁的蜡质成分不被盐酸酒精脱色的特点，特异性显示抗酸杆菌。18.C解析：DAB（二氨基联苯胺）是免疫组化最常用的辣根过氧化物酶底物，阳性产物为棕黄色不溶性沉淀。19.B解析：紫外线照射可破坏核酸分子的磷酸二酯键，有效降解环境中的核酸污染，是分子病理实验室常用的污染防控方法。20.B解析：HE染色完整流程为烤片→脱蜡→水化→苏木精染色→分化→返蓝→伊红染色→梯度脱水→透明→封片，顺序错误会导致染色失败。三、多项选择题1.ABCD解析：固定会通过蛋白交联遮蔽抗原决定簇，不会暴露抗原，E错误；其余均为固定的核心目的。2.BCE解析：二甲苯为透明剂，甲醛为固定剂，排除AD；不同浓度乙醇均为常用脱水剂。3.ABCDE解析：所有选项均为免疫组化常用对照类型，用于验证染色结果的可靠性。4.BCD解析：HE染色为常规染色，免疫荧光属于免疫病理技术范畴，排除AE；其余均为特殊染色。5.ABCE解析：常规住院患者病理诊断使用石蜡切片，冰冻切片分辨率不足，不用于常规诊断，排除D。6.ABCDE解析：病理科处理感染性标本时需采用生物安全二级防护，所有选项均为必备防护用品。7.ABCD解析：无水乙醇为脱水剂，不属于脱钙液成分；脱钙液分为强酸类（硝酸、盐酸）、弱酸类（甲酸）和螯合剂类（EDTA）。8.ABCE解析：不同患者的组织严禁放入同一包埋盒，避免交叉污染导致诊断错误，D错误；其余均为包埋操作规范。9.ABDE解析：免疫组化检测蛋白质，属于免疫病理技术，排除C；其余均为核酸检测类的分子病理技术。10.ABCDE解析：所有选项均属于病理档案管理范畴，需按规定期限保存。四、简答题1.（1）配制方法：取37%-40%甲醛水溶液100ml，加入蒸馏水900ml配制成10%甲醛溶液，再加入磷酸二氢钠（NaH₂PO₄·H₂O）4g、磷酸氢二钠（Na₂HPO₄·7H₂O）6.5g，充分搅拌溶解后校准pH至7.2-7.4即可（2分）。（2）固定目的：①防止组织自溶和腐败，保持细胞原有形态结构；②使组织内蛋白质、糖等成分凝固，增加组织硬度，便于后续脱水、包埋和切片；③使组织内不同成分对染料的亲和性产生差异，便于染色区分；④固定后的组织可长期保存，不会变质（3分）。2.（1）原理：甲醛固定过程中，蛋白质分子之间会形成交联键，遮蔽抗原决定簇，导致抗体无法与靶抗原结合（1分）；抗原热修复通过高温加热，破坏蛋白质之间的交联键，使被遮蔽的抗原决定簇重新暴露，恢复抗原的免疫反应性，提高免疫组化染色的阳性率（2分）。（2）常用方法：①水浴加热法：将切片放入盛有修复液的容器中，置于95℃以上水浴箱加热15-20min；②高压加热法：将切片放入高压锅内的修复液中，加热至压力阀喷气后维持1-2min；③微波加热法：将切片放入盛有修复液的容器中，用微波炉中高档加热10-15min（2分）。3.切片破碎、不完整的常见原因包括：①组织固定不及时或固定不充分，组织自溶变软，切片时易碎；②组织脱水过度或透明时间过长，组织变脆，切片时易碎裂；③包埋用石蜡温度过高，导致组织焦化变脆；④切片刀刀刃不锋利或有缺口，切片时易拉扯组织导致破碎；⑤蜡块冷却不充分，硬度不足，切片时易变形破碎；⑥展片水温过高，导致组织散开破碎；⑦捞片时操作不当，或切片粘附不牢，染色过程中脱片（答出5点即可得满分）。4.（1）分类：病理科医疗废物分为感染性废物、病理性废物、损伤性废物、化学性废物、药物性废物5类（2分）。（2）处理要求：①感染性废物：用双层黄色医疗废物袋盛装，鹅颈式封口，标注清晰，日产日清；②病理性废物：手术切除的废弃组织、标本等按感染性废物管理，需消毒后处置，需保存的大体标本按档案管理要求存放；③损伤性废物：针头、载玻片、刀片等锐器放入专用锐器盒，装满3/4时封口，严禁混放；④化学性废物：甲醛、二甲苯、染液等废液用密封专用容器收集，交有资质的第三方机构处置，严禁直接排入下水道；⑤药物性废物：废弃的试剂、药品按药物性废物规范收集处置（3分）。五、论述题1.HE染色完整流程及质控要点如下：（1）烤片：将捞好的白片置于60℃烤箱中烤30-60min，或56℃烤片过夜（1分）。质控要点：烤片温度不宜超过65℃，时间不宜超过24h，避免组织抗原丢失或染色偏深；烤片充分可防止染色过程中组织脱片（1分）。（2）脱蜡：切片依次放入二甲苯Ⅰ、二甲苯Ⅱ中各10min，完全脱去组织周围的石蜡（1分）。质控要点：二甲苯需定期更换（一般每处理500张切片更换1次），脱蜡不充分会导致染色不均；室温过低时需适当延长脱蜡时间（1分）。（3）水化：依次放入100%乙醇Ⅰ、100%乙醇Ⅱ各3min，95%乙醇3min，80%乙醇3min，70%乙醇3min，最后用蒸馏水冲洗2min（1分）。质控要点：梯度乙醇浓度需准确，定期更换；高浓度乙醇污染会导致低浓度乙醇脱水能力下降，影响水化效果（1分）。（4）苏木精染色：苏木精染液染色5-10min，自来水冲洗去浮色（1分）。质控要点：苏木精染液需定期过滤、补充氧化剂，染色时间根据室温、染液新旧调整，避免过染或染色过浅（1分）。（5）分化与返蓝：1%盐酸酒精分化3-5s，自来水冲洗后入40-50℃温水返蓝1-2min，或0.5%稀氨水返蓝30s（1分）。质控要点：分化时间需严格控制，最好镜下观察，以细胞核清晰、细胞质无蓝色为准；返蓝需充分，避免细胞核发灰（1分）。（6）伊红染色、脱水透明、封片：0.5%伊红水溶液染1-3min，自来水冲洗；依次经70%、80%、95%、100%梯度乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封片。质控要点：伊红染色时间适当，核浆对比鲜明；脱水彻底，避免切片浑浊；封片时避免气泡，树胶量适中。2.免疫组化假阴性的常见原因及防控措施如下：（1）组织前处理因素（2分）：①原因：标本固定不及时，组织自溶导致抗原降解；固定液选择不当（如酸性固定液破坏抗原）；固定时间过长，蛋白