多重耐药菌环境采样监测规范课件

院感培训教学课件多重耐药菌环境采样监测规范采样规范·判定标准·质控闭环汇报时间：2026课程导览01认识多重耐药菌与环境风险建立概念与采样必要性概念认知02环境采样标准操作规程掌握物表采样与送检操作规程03监测规范与判定标准解读WS/T312与菌落标准判定标准04常见耐药菌采样要点分述MRSA、CRE、鲍曼要点分菌种要点05质控闭环与暴发应对落实消毒联动与处置闭环管理采样规范·判定标准·质控闭环02/30认识多重耐药菌与环境风险环境是耐药菌传播的隐形战场01多重耐药菌环境采样监测规范多重耐药菌指对三类以上药物耐药多重耐药菌（MDROs）指对三类或以上抗菌药物同时耐药的细菌，是医院感染防控的主要难题。临床常见菌种耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）耐碳青霉烯肠杆菌（CRE）多重耐药鲍曼不动杆菌多重耐药铜绿假单胞菌产ESBLs肠杆菌科细菌环境传播风险多重耐药菌可在物体表面存活数周病床栏杆、呼叫器、门把手、输液架等高频接触表面是残留重灾区环境清洁消毒不到位会持续放大传播风险临床后果患者感染后住院时间延长、医疗费用增加，严重时危及生命护理人员操作规范程度决定传播风险，全程防控是切断医院传播的核心采样规范·判定标准·质控闭环04/30多重耐药菌环境采样监测规范MRSA感染病死率高达63.1%63.1%MRSA感染病死率医院感染占全部病例的

60%~80%以上已被世界卫生组织列为高优先级耐药病原体传播链条医务人员的手污染的医疗器械物体表面多重耐药菌由此在院内扩散，单一防控措施不足以阻断院内传播集束化干预：多项措施须同步落实手卫生管理减少不合理抗菌药物使用接触预防主动筛查环境消毒与隔离措施环境采样监测是识别感染风险点、落实预防干预、降低医院感染发生率的重要手段危害认知·传播链条·集束化干预05/30多重耐药菌环境采样监测规范环境物体表面是耐药菌重要储源存活数据超过43天CRKP在ICU真实环境体外可存活时间温度24–28℃·湿度56%–60%鲍曼不动杆菌在干燥表面可存活数周至数月储源判断：环境是重要储源床单元、设备、水槽等区域需重点监测采样原则：重点聚焦避免过度与遗漏，通过针对性监测识别感染风险点结果用途：指导防控落实直接指导消毒频次调整与隔离措施落实，为清洁消毒和暴发调查提供依据采样规范·判定标准·质控闭环06/30环境采样标准操作规程规范采样是监测质量的第一道关口02多重耐药菌环境采样监测规范常规在消毒处理后进行物表采样常规采样消毒处理后

4小时内

采样，且须在从事医疗活动前完成。流调采样选择清洁消毒前进行，可现场接种或增菌。人员准备采样者洗手、戴帽子与口罩，严格无菌操作；避免跨越采样区域、防止过程污染。物品准备试管、试管架、培养基、棉签、规格板、酒精灯、采样箱，提前备齐并核查有效期。采样规范·判定标准·质控闭环08/30多重耐药菌环境采样监测规范采样面积≥100cm²连续采样4个面积规则≥100cm²5cm×5cm灭菌规格板，连续采样

4个25cm²25cm²25cm²25cm²×合计≥100cm²被采表面＜100cm²取全部表面被采表面≥100cm²取100cm²涂擦手法棉拭子浸入含相应中和剂的无菌洗脱液，在规格板内横竖往返各涂擦5次，边涂边转动拭子。送检准备剪去手接触部位，投入

10ml含中和剂的无菌洗脱液试管，即送检。耗材提示规格板随采样管在检验科一并领取无菌一次性采样板；表面积大时，一支棉签连续完成

4个规格板采样。采样规范·判定标准·质控闭环09/30多重耐药菌环境采样监测规范棉拭子横竖往返涂擦5次并转动操作动作01取浸有含相应中和剂无菌洗脱液的棉拭子

1支02在规格板内横竖往返涂擦5次03并随之转动棉拭子使棉拭子各面充分接触采样表面防污染要点蘸取洗脱液时，手指不得伸入试管避免跨越采样区域，避免采样过程中污染收尾要求涂擦力度均匀适中，覆盖全部采样面积、不遗漏边角完成后剪去手接触部位，投入含相应中和剂的无菌洗脱液试管内采样规范·判定标准·质控闭环10/30多重耐药菌环境采样监测规范门把手等不规则表面直接涂擦采样规则表面使用规格板规整平整区域·规格板贴附采样不规则表面直接涂擦门把手、水龙头、灯开关等无平整区域，规格板无法贴附重点部位手频繁接触区域门把手、推手区域、椅子靠背中央灯开关与基座板、非感应式水龙头开关空调控制面板或遥控器、监护仪控制面板与触摸屏电话按键与听筒、静脉输液支架齐胸高度手握部分结果计算：小型物体表面采样后以CFU/件

表示采样规范·判定标准·质控闭环11/30多重耐药菌环境采样监测规范采样液须含相应中和剂中和消毒剂现状问题表面残留消毒剂会抑制细菌生长，直接采样易得

假阴性

结果对策：按消毒剂类别匹配中和剂醇类、酚类普通营养肉汤含氯、含碘、过氧化物含

0.1%硫代硫酸钠洗必泰含相应中和剂的无菌洗脱液检测范围常规监测不做致病性微生物检测；疑似暴发调查或怀疑微生物污染时，检测

目标微生物采样规范·判定标准·质控闭环12/30多重耐药菌环境采样监测规范采样后4小时内送检

冷藏限24小时送检时限4

小时常温送检不得超过4小时常温24

小时冷藏送检0-4℃冷藏·不得超过24小时冷藏时限是样品有效性的生命线接种前处理20秒采样管震荡80次用力振打1.0ml吸取接种于灭菌平皿2个每样本接种平皿送检要求密封完好，避免污染泄漏做好标本标识与交接记录无菌检查边界不推荐医院常规开展灭菌物品无菌检查；仅当流行病学调查怀疑感染事件与灭菌物品有关时，方进行相应物品无菌检查。送检时限·接种前处理·无菌检查边界13/30监测规范与判定标准标准是采样结果的裁判尺度03多重耐药菌环境采样监测规范医院感染监测标准扩大适用范围适用范围医院本标准的适用对象妇幼保健院、血液净化中心、专科疾病防治院、急救中心、护理院参照执行。妇幼保健院血液净化中心专科疾病防治院急救中心护理院规范性引用GB15982《医院消毒卫生标准》WS/T313《医务人员手卫生规范》WS/T524《医院感染暴发控制指南》WS670《医疗机构感染监测基本数据集》目标性监测针对高风险人群、高发感染部位、高感染风险部门开展。重症监护病房新生儿病房手术部位感染细菌耐药性监测采样规范·判定标准·质控闭环WS/T312-202315/30多重耐药菌环境采样监测规范医院环境分四类管理标准各异四类环境，风险逐级递减风险高→低ⅠⅠ类环境洁净级别最高ⅡⅡ类环境高风险诊疗区域ⅢⅢ类环境普通诊疗区域ⅣⅣ类环境门急诊区域菌落总数卫生标准各类别标准不同，需对应判定监测频次四类均为每季度一次采样前先明确区域类别，判定才有依据。采样规范·判定标准·质控闭环16/30洁净手术室其他洁净场所非洁净手术室产房、导管室重症监护病区新生儿室母婴同室血液透析室消毒供应中心无菌物品存放区其他普通住院病区普通门（急）诊及检查治疗室感染性疾病门诊和病区多重耐药菌环境采样监测规范物表菌落标准：Ⅰ、Ⅱ类5Ⅲ、Ⅳ类10Ⅰ、Ⅱ类环境≤5CFU/cm²Ⅰ类洁净手术室等Ⅱ类非洁净手术室、产房、导管室、重症监护病区、新生儿室等Ⅲ、Ⅳ类环境≤10CFU/cm²Ⅲ类母婴同室、血液透析室、消毒供应中心无菌物品存放区等Ⅳ类普通门急诊、感染性疾病门诊和病区监测频率每季度一次超限处置分析原因重新清洁消毒复采复检目标监测例外菌落总数未超标，但检出目标耐药菌，仍须启动干预采样规范·判定标准·质控闭环17/30多重耐药菌环境采样监测规范每季度监测一次，聚焦高频接触面常规节奏环境物表监测每季度一次消毒频次高频接触表面（床栏、门把手）每日≥2次宜每4小时1次重点部位·手频繁接触区域优先门把手、推手区域椅子靠背中央处灯开关与基座板非感应式水龙头开关空调控制面板或遥控器监护仪控制面板与触摸屏电话按键与听筒静脉输液支架齐胸高度手握部分暴发加测出现或疑似多重耐药菌感染暴发时，增加清洁消毒频次，并对物品表面、公共设施采样培养。监测节奏·高频接触面·暴发应急采样18/30多重耐药菌环境采样监测规范培养48小时计数按公式计算菌落数检测流程

LABORATORYPROCEDURE混匀采样液采样管震荡

20秒

或用力振打

80次接种样本吸取

1.0ml

样品接种，每样本

2个

平皿倾注琼脂加入45℃-48℃营养琼脂

15-18ml，边倾注边摇匀培养计数琼脂凝固后置

36℃±1℃

培养

48小时，计数菌落结果计算

RESULTCALCULATION细菌菌落总数（CFU/cm²）=平板上菌落数

×

稀释倍数采样面积（cm²）小型物体表面结果以

CFU/件

表示。怀疑与医院感染暴发有关时，进行目标微生物检测。采样规范·判定标准·质控闭环19/30常见耐药菌采样要点不同耐药菌，采样各有侧重04多重耐药菌环境采样监测规范MRSA采样：聚焦鼻咽、咽喉、腹股沟三部位采样鼻咽拭子插入一侧鼻孔，贴鼻黏膜轻转；同一拭子在另一侧鼻孔重复；断点处折断拭子轴入管咽喉尖端插入咽后壁与扁桃体区域，轻轻旋转腹股沟擦拭褶皱处皮肤，旋转尖端数次检测条件孵育

33-35℃

，培养

24小时头孢西丁为最佳mecA表达诱导剂运送要求所有运送管贴患者身份标签放入生物危险袋处理采样规范·判定标准·质控闭环21/30多重耐药菌环境采样监测规范mecA基因介导MRSA耐药检测要点耐药机制mecA基因编码

PBP2a，对β-内酰胺类亲和力低，即使药物存在仍能合成细胞壁。检测难点异抗性使甲氧西林耐药判定困难，需给耐药亚群充分生长条件。关键条件孵育温度33-35℃培养时间24小时判定标准ICU物表MRSA检出量≤5CFU/cm²手术器械应无菌检出mecA基因阳性即判定为MRSA采样规范·判定标准·质控闭环22/30多重耐药菌环境采样监测规范CRE环境监测聚焦床单元设备水槽CRE判定口径1任一碳青霉烯类耐药对亚胺培南、美罗培南、厄他培南中任一种耐药2天然耐药菌株的补充判定摩根菌、变形杆菌、普罗威登菌等对亚胺培南天然耐药，需对美罗培南或厄他培南耐药3产碳青霉烯酶或产生碳青霉烯酶，即可判定监测区域WS/T826-2023床单元设备水槽按WS/T826-2023要求，检测床单元、设备、水槽等重点区域微生物污染情况；暴发时针对性采样排查环境储源。反馈时限24小时内检验科须

24小时内

反馈CRE检测结果，并标注感染或定植状态。采样规范·判定标准·质控闭环23/30多重耐药菌环境采样监测规范CRKP体外存活超43天需主动筛查存活数据超43天体外存活时长ICU环境（24-28℃、湿度56%-60%）下，床单元周围表面易被广泛污染。主动筛查30%-50%无症状携带者检出比例ICU高危患者入院时及每周采集肛拭子或粪便标本，可检出无症状携带者。临床后果9%-10%2023年广东ICU中CRE分离率50%-70%神经外科ICU的CRE感染患者总体病死率环境采样与主动筛查结合，可早期识别定植患者与环境储源。采样规范·判定标准·质控闭环24/30多重耐药菌环境采样监测规范鲍曼不动杆菌干燥表面存活数周环境顽固性干燥表面存活时长数周至数月经手部、污染器械接触传播，亦可空气飞沫扩散ICU、呼吸科病房为高发区域采样聚焦床单元水槽呼吸机面板湿润及高频接触表面培养与鉴定血琼脂/麦康凯琼脂35-37℃

培养

18-24

小时CHROMagar显色培养基提高分离效率MALDI-TOFMS准确率

＞95%采样规范·判定标准·质控闭环25/30多重耐药菌环境采样监测规范耐药基因检测助力鲍曼鉴定常见耐药基因blaOXA-23blaOXA-24blaNDM-1等碳青霉烯酶基因AdeABC

外排泵基因、porin

蛋白缺失检测手段PCR、基因测序或全基因组测序XpertCarba-R

等分子平台可在

1-2小时

内识别碳青霉烯酶基因药敏与质控参照

CLSI

或

EUCAST，重点关注碳青霉烯类、多黏菌素类、替加环素部分菌株需补充联合药敏（如多黏菌素+利福平）定期验证培养基性能，以

ATCC19606

标准菌株做药敏质控耐药基因·分子检测·药敏质控26/30多重耐药菌环境采样监测规范常规监测免检致病菌，暴发时查目