CN119505021A 一种重复结构单元重组蛋白cpE2及其制备方法和应用 （内蒙古和讯生物科技有限公司）

意开发区科尔沁南路69号留学人员创一种重复结构单元重组蛋白cpE2及其制备本申请涉及一种重复结构单元重组蛋白请的工程化的cpE2蛋白质笼能够自组装成笼状22.如权利要求1所述的重复结构单元重组蛋白c3.如权利要求2所述的重复结构单元重组蛋白cpE4.如权利要求3所述的重复结构单元重组蛋白cpE2，其特7.如权利要求6中所述的融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白的氨基酸序列如SEQ的重复结构单元重组蛋白cpE2，或包含编码如权利要求5_7中任一项所述的融合蛋白的多构单元重组蛋白cpE2，或包含编码如权利要求5_7中任一项所述的融合蛋白的多聚核苷酸10.如权利要求1_4中任一项所述的重复结构单元重组蛋白cpE2，或如权利要求8所述3一种重复结构单元重组蛋白cpE2及其制备（proteinnanocage）是一种由生物表达系统快速产生的单一蛋白成分组装而成的高度寡聚结构，可由重复蛋白质亚基的精确自组装产生，笼内部通常具有一定的空间可包装外源为用于递送抗原和治疗分子的纳米医疗设备的分子组分，相比非生物纳米材料，[0006]本申请第一方面提供了一种重复结构单元重组蛋白cpE2，所述重组蛋白cpE2自N4[0028]本申请提供了一种用于药物递送的蛋白质笼，由上述的重复结构单元重组蛋白56 物来源或通过重组技术产生，但其不必从指定的核酸序列翻译所得，它可能以包括化学合成的任何方式产生。如，通常细菌酶例如嗜热脂肪杆菌丙酮酸脱氢酶(PDH)复合物E2的氨基酸序列和干扰素(IFN)蛋白的氨基酸序列不通过肽键连接7基；E2_NC表示改造的酮酸脱氢酶(PDH)复合物E2亚基；cpE2@IFN表示连接干扰素IFN的化氨基酸序列RRAIAKAMVHSKHTAPHVTLIKLTFLPYVVKALVSALREYALAQEINELAEKARDGKLTMKGASCTITNIGSAGGQWFTINHPEVAILGIGRIAEKPIVATAQKALNHIKRLLSDPEL8LVAHRKKFKAIAAEKGIKLPYVVKALVSALREYPVLNTSIDGLLVPVIKHADRKPIFALANELAEKARDGKLTPGEMKGTITNIGSAGGQWFTPVINHPAILGIGRIAEKPIVRDGEIVPMLALSLSFDHRMIDGATAQAIAAEKGIKLTFLPYVVKAADRKPIFALAQEINELAEKGQWFTPVINHPEVAILGIGDHRMIDGATAQKALNHIKRREKMSGIRRAIAKAMVHSKSIDDETEEIIQKHYYNIGITDRGLLVPVIKHADRKPIFVAAPMLALSLSFDHRMIDGQKALNHIKRLLSDPELLLMKPATTEGEFPETREKMSGIIAKAMVHSKHTAPHVTLMD9GSGSSAAAKPATTEGEFPEKMSGIRRAIAKAMVHSKHTVTLMDEADVTKLVAHRKKFAAEKGIKLTFLPYVVKALVREYPVLNTSIDDETEEIIQYNIGIAADTDRGLLVPVIKHLTPGEMKGASCTITNIGSAPIVRDGEIVAAPMLALSLSRMIDGATAQKALNHIKRLLGGSGGCDLPQTHSLGSRRTLMLMRRISLFSCLKDRHDFGFPNLFSTKDSSAAWDETLLDKFELYQQLNDLEACVIQGVGVPLMKEDSILAVRKYFQRITKEKKYSPCAWEVVRAEIMRSFSLVAHRKKFKAIAAEKGIKLPYVVKALVSALREYPVLNTSIDGLLVPVIKHADRKPIFALANELAEKARDGKLTPGEMKGTITNIGSAGGQWFTPVINHPAILGIGRIAEKPIVRDGEIVPMLALSLSFDHRMIDGATAQLNHIKRLLGGSGGCDLPQTDRHDFGFPQEEFGNQFQKAPVLHEMIQQIFNLFSTKDSSWDETLLDKFYTELYQQLNDLCVIQGVGVTETPLMKEDSILRKYFQRITLYLKEKKYSPCVVRAEIMRSFSLSTNLQESL目的DNA片段和质粒载体混合，加入T4DNA连接酶（T4DNAligase）和连接酶缓冲液连接。[0061]取含有上述各蛋白表达载体的100μl甘油菌接种到5ml含有卡那抗生素（100μg/通过粒度分析动态光散射法（DLScpE2粒径较野生型E2_WT由25nm扩大到38nm，工程化LinTT1_cpE2@IFN粒径较cpE2由38nm扩大到67nm，提高了近一倍载药量。将纳米颗粒按同浓度的待测药物，将培养板在培养箱孵育24h。最后向每孔加入20μL的CCK_8溶液（MeilunBio将培养板置于培养箱内孵育30min,用酶标仪测定在450nm处的吸光度。CCK_8实验如图7_8所示，结果显示20μM的LinTT1_cpE2@IFN对GL261和U87最高达到约60%的杀伤效果。孔板底部画1条横线，细胞培养24h后用10uL枪头比着直尺垂直对准孔板(也可用划痕专用