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文档简介

本发明提供一种提高谷氨酰胺发酵产量的产能力的微生物中的天冬氨酸转氨酶的编码基22)在天冬氨酸转氨酶的编码基因的起始密码子的6.根据权利要求5所述的微生物，其特征在于，天冬氨酸转氨酶活性降低是通过如下2)在天冬氨酸转氨酶的编码基因的起始密码子的8.根据权利要求7所述的微生物，其特征在于，所述微生物9.权利要求5_8任一项所述微生物在谷氨酰胺或其衍生物的发酵生产或提高谷氨酰胺3利用基因工程手段，弱化具有谷氨酰胺生产能力的微生物中的天冬氨酸转氨酶的编码基[0011]本发明中，所述天冬氨酸转氨酶的编码基因在NCBI上的参考序列编号为CEY17_[0014]本发明中，所述微生物为棒杆菌、肠杆菌、枯草芽孢杆菌，优选谷氨酸棒杆菌4[0020]优选地，所述微生物为谷氨酸棒杆菌MHZ_0513_3，或谷氨酸棒杆菌工程菌ATCC[0027]aspB基因起始密码子弱化为TTG后的菌株MHZ_0513_3_aspBa1t，与出发菌株MHZ_因的起始密码子的上游_24bp处插入终止子后的菌株MHZ_0513_3_aspB*，失活aspB基因的[0032]所用的出发菌分别为谷氨酸棒杆菌MHZ_0513_3、谷氨酸棒杆菌工程菌ATCC[0034]谷氨酸棒杆菌工程菌ATCC14067_glnAY405F是以谷氨酸棒杆菌ATCC14067为模式5均按照常规实验条件，如Sambrook等分子克隆实验手册(SambrookJ&RussellDW,[0043]SEQIDNO:3：rrnB终止子序列。在aspB基因的起始密码子的上游_24bp处插入引物，制备重组片段DN，所得片段经琼脂糖凝胶回收试剂盒(天根)纯化。同时将pK18_mobsacB(武汉淼灵生物科技有限公司)载体用无缝克隆试剂盒(南京诺唯赞生物科技股份6有限公司)。将所得到的质粒命名为pK18_aspBa1t。将pK18_aspBa1t分别转入谷氨酸棒杆菌增测序，验证获得的为目的突变菌株，分别并命名为MHZ_0513_3_aspBa1t、ATCC14067_F/P68_Ter_R为引物，制备重组片段Ter。将UP、DN、Ter片段和经过XbaI/HindIII消化的氨酸棒杆菌MHZ_0513_3和ATCC14067_glnAY405F中。使用引物P71_ID_F/P72_ID_R扩增片段组片段DN。将UP、DN片段和经过XbaI/HindIII消化的pK18_mobsacB载体进行组装，转化到的质粒命名为pK18_ΔaspB。将pK18_ΔaspB分别转入谷氨酸棒杆菌MHZ_0513_3和ATCC[0053]发酵验证谷氨酰胺产量的方法：将冻存于_80℃甘油管中的菌株接种于下述斜面7株ATCC14067_glnAY405F中。表2结果显8

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