医院药剂科临床药学室操作规程

医院药剂科临床药学室操作规程

一、MTT法测肿瘤药敏

L原理

利用MTT化学试剂与活细胞线粒体中琥珀酸脱氢酶起反

应，生成黑色结晶（甲簪），甲簪的数量与活细胞数成正比，

利用这一点可检测抗癌药物对癌细胞抑制作用的大小，将生

成的甲簪用溶媒溶解后，用酶标仪读出其光密度（0D值），

即可算出抗癌药对癌细胞的抑制率，由此可判断该药是否敏

感。

2.操作步骤

（1）将新鲜肿瘤标本剪去坏死组织及正常组织，在无

菌条件下剪碎，过150目筛网，并用培养液冲洗2次。

（2）若癌肿瘤标本较硬或较小，为获得足够数量的癌

细胞，可用胰酶、胶原酶、DNA酶等混合酶进行消化，然后

按步骤（1）操作。

（3）吸取滤液至具塞离心管，离心10分钟（4000r/分

钟），注意平衡。

（4）弃去上清液，将得到的贴壁物用培养液配制成一

定浓度的癌细胞悬液。

（5）在96孔培养板中设置空白组、对照组、用药组,

其中空白组加培养液100微升，对照组加癌细胞悬液90微

升，用药组加癌细胞悬液90微升和抗癌药工作液10微升。

（6）将培养板放入二氧化碳培养箱，在37C、5%C02

的条件下培养48〜96小时。

（7）48〜96小时后取出96孔培养板，每孔加20微升

C02MTT试剂，继续放入培养箱中培养；4〜8小时后每孔加

入100微升10%十二烷基硫酸钠液，12〜18小时后用酶标仪

在570毫微米处读出个孔光密度（OD值），并计算抑制率。

（8）废弃物应倒入废物锅内煮沸消毒后再进行处理。

二、丙戊酸、英妥英钠、苯巴比妥、卡马西平、万古霉

素血药浓度测定法一一免疫荧光偏振光分析法

1.原理

免疫荧光偏振光分析法主要用于测定药物、激素等小分

子物质。荧光标记328医院药事管理制度抗原由于分子量小,

失去偏振性，所以其偏振光度小；而当抗原与抗体结合成大

分子物质后，分子量增大，其偏振光度变大。标本中的抗原

与一定量的标记抗原进行竞争反应，标本中的抗原越多，与

抗体结合的标记抗原就越少，激发的荧光偏振光度就越少，

从而可用于标本中抗原的定量。

2.操作步骤

（1）用抗凝管采血1〜2mL,摇匀后吸取150微升至

Eppendorf管,另加溶解剂50微升及沉淀剂300微升，在漩

涡混合器上混匀。

（2）将样品放入离心机内，离心8分钟（10800转/分

钟）。

（3）吸取离心后样品上清液200微升至对应数字键盘

的稀释孔，锁紧。

（4）将数字转盘放入TDX中，同时轻摇试剂盒，按顺

序打开盖，放入试剂台。

（5）按RUN键开始检测。

（6）检测结束后，从样品中心取出样品和试剂盒，试

剂盒储存于2〜8匕的冰箱内备用。

三、净化工作台操作规程

L净化工作台必须在检查情况良好的前提下方能使用，

启动通风机前还必须清洁周围环境。

2.安放定位后必须将箱体下四只支撑脚调置平稳合理,

减少噪声及震动现象。擦净净化工作台后，启动通风机，隔

30分钟后方可使用。

3.操作区为层流区，因此出风面与加工件之间的台面上

最好不要存放物件，以免妨碍洁净空气的正常流动。

4.当工作完毕后方可停止通风机的使用，搬运工作台时

必须将支撑脚向上移方可搬动。

5.正常使用情况下，建议每3〜6个月进行一次检漏,

气流速度检查。

6.操作人员应更换鞋、衣，以减少环境起尘，降低环境

含尘浓度。

7.风量减少时应清洁更换中效和高效过滤器。

四、90-2电动离心机操作规程

1.将所要离心的样品称量平衡，放入离心机内对称位置,

盖上顶盖。

2.将离心速度调至所需位置，设置离心时间。

3.离心机工作时，切勿打开顶盖，以防离心样品飞溅伤

人。

4.待离心机停止工作时，打开顶盖，取出样品，盖上顶

盖，并将离心速度调为零。

五、318MC型酶标仪操作规程

1.开机，仪器接通电源后，白动自检并显示：

“M0DEL318MC“READYXX：YY。

2.按MEASM0DE,显示“M0DEL318MC“测量方式:

1ABSORBANCEMODEo

3.按ENTER,显示1ABS0RBANCEM0DE“初始波长：

FILTER405o

4.输入所需波长,如570。

5.按ENTER,显示a1ABSORBANCEMODE”处理方法:

1NOREAGENTBLANKo

6.选择单孔空白，按2,显示alABSORBANCEMODE

“SINGLEWELLBLANK。

7.按ENTER,显示初始“1ABSORBANCEMODE"空白位置：

BLANKWELLAlo

8.输入所需空白位置,例如H1,显示a1ABS0RBANCEM0DE

“BLANKWELLH1。

9.按ENTER,显示u1ABSORBANCEMODE“1BLONEVERYPL。

10.选每盘扣空白，按ENTER,显示“MODEL318MC“READYXX：

YYo

1L放入96孔培养板,按START,酶标仪即自动读数。

六、TDX快速血药浓度检测仪操作规程

L开机前打开左侧盖，接缓冲液管，同时检查缓冲液量

是否足够。注意注射器内不可有气泡，用蒸储水清洗后再用

吸水纸轻轻将其吸干。

2.启动开关ON（在TDX左后位置）

3.屏幕显示日期、时间，分别按STORE储存。

4.TDX预热5分钟后,屏幕出现READY。

5.抽取患者血液1〜2mL，不同药物按不同方法处理备用。

6.从冰箱（2〜8（）内取出需检测的药品试剂盒，水平

位轻轻来回摇动试剂盒（以免药物浓度不均），打开瓶盖,

注意瓶盖与药瓶一致，不可乱盖，然后将试剂盒放入TDX机

试剂盒槽内。

7.用标有数字之样品转盘按检测样品数由转盘1〜20顺

序加入等量的玻璃比色管和塑料的样品杯，并加入已处理好

的样品，锁上转盘（手持转盘中央轴，按顺时针方向转动，

听到咯哒一声），将转盘放入TDX机中。

8.视屏显示READY后方可进行。

9.按RUN进行检测。

10.待屏幕示D0NE-REM0VERPAK,同时伴有“XX义”声，

即表示检测已完成。打开机盖，取出试剂盒后盖好，注意位

置不能弄错，放入冰箱（2〜8。0内可继续使用。

11.分析结果，清洗探头。

12.出报告。

13.按PRIME键多次，将探针拉到中间位，用蒸储水洗

探针后用清洗纸吸干净。

14.如停机多日不用，需将缓冲液更换成蒸得水。按

PRIME键多次，清洗注射器。

15.将TDX开关按到OFFo

七、GWJ-3型智能微粒检测仪的操作规程

1.打开仪器的包源开关，仪器进入自检。自检合格后方

可使用。

2.将检测杯反复冲洗干净，在灯光下观察，杯壁应光亮

洁净无污渍。

3.将搅拌转子从袋中取出，用纯净水冲洗干净。

4.用待测液体冲洗检测杯和搅拌转子。

5.将被检测液体倒入检测杯时，液体不宜过少，液面应

高于取样头30毫升，使其位于搅拌器中心位置，盖好防尘

盖。

6.调整搅拌器转速，以不出现气泡、旋涡为宜。

7.按“确认”键，进行检测操作，检测开始后，仪器自

动开启电磁阀使检测液体吸入计量管，尹分道对微粒计数;

当检测状态设置为“自动”时，仪器将连续进行数次测试;

当检测状态设置为“手动”时，仪器单次检测完毕后停止,

如需进行下一次检测，应重复本步骤。

8.检测结束后，可以进行数据查询或结果打印。

9.检测完毕后,必须使用纯净的无离子水清洗管路3次。

八、BET-40型细菌内毒素检查仪操作规程

1.向水浴槽内注入蒸用水至水位线下沿。

2.接通电源，打开电源开关，同时仪器面板上的数字显

示水浴槽内温度值。

3.按下温控键，加热指示灯亮，表示开始加热。

4.按设置键上下调节时间，一般设置1小时。

5.试验准备、试验方法及结果判断按2000版药典“细

菌内毒素检查法”的要求进行。

6.当试管放到水浴槽内时，立即开始试验。按下测试键。

7.满1小时，操作人员将双手食指放于试管架两端板的

圆形凹陷处，向上后方轻轻提升试管架，缓缓倒转180度后

观察并记录试验结具。

九、XDS系列实验室倒置生物显微镜操作规程

1.将亮度调节柄调至最小位置，接通开关，再将亮度调

节手柄调至适中位置。

2.将标本置于载物台上，使用低位同轴手轮可方便地操

纵载物台移动，并可从刻尺和游标定出观察目标的位置。

3.载物台上可安装不同的物片、试管压片等，以适应不

同的使用场合。

4.手握转换器外缘转动转换器，将低倍物镜置入光路,

通过目镜观察，使用粗微调焦手轮使标本成像清晰。

5.双手握目镜筒相对转动，可使双目瞳距与观察者瞳距

一致