CN119510785A 用于鉴定与抗磷脂综合征相关的狼疮抗凝物（la）的方法和试剂盒 （仪器实验室公司）

201780025859.X2017.04.19用于鉴定与抗磷脂综合征相关的狼疮抗凝本文所述的发明涉及用于诊断患者的抗磷物降低了患者血浆的因子缺乏影响以及患者血2a)在至少一种凝血抑制剂和低磷脂浓度的存在b)在至少一种凝血抑制剂和高磷脂浓度的存在下，在磷c)确定步骤a)中患者血浆的凝血时间与步骤2.根据权利要求1所述的方法，其中步骤a)的磷脂依赖性凝血试验和步骤b)的磷脂依3.根据权利要求1所述的方法，其中磷脂依赖性试验包括活化部分凝血活酶时间6.根据权利要求5所述的方法，还包括选自由下列物质组成的组中的至少一种凝血酶9.根据权利要求2所述的方法，还包括使用正常的混c)所述磷脂依赖性凝血试剂，其包含高磷脂316.根据权利要求13所述的试剂盒，其中所述磷脂依赖性凝血试剂选自由下列物质组17.根据权利要求13所述的试剂盒，其中所述至少一种凝血抑制剂包括至少一种凝血酶抑制剂。18.根据权利要求17所述的试剂盒，其中所述至少一种凝血酶抑制剂选自由下列物质19.根据权利要求13所述的试剂盒，其中所述至少一种凝血抑制剂包括至少一种因子20.根据权利要求13所述的试剂盒，其中所述凝血抑制剂和包含所述低磷脂浓度的所21.根据权利要求13所述的试剂盒，其中所述凝血抑制剂和包含所述高磷脂浓度的所22.根据权利要求14所述的试剂盒，其中所述正常的混合血浆与所述凝血抑制剂装在23.根据权利要求1所述的方法，其中所述凝血25.根据权利要求2所述的方法，其中所述凝血28.根据权利要求13所述的试剂盒，其中所述低磷脂浓度包括约0.002(g/l)至约0.229.根据权利要求13所述的试剂盒，其中所述高磷脂浓度包括约0.2(g/l)至约5.0(g/4鉴定患者血液中的狼疮抗凝物(LA)从而诊断人类患者中被称为抗磷脂综合征(APS)的凝血[0003]与APS相关的典型实验室结果包括所谓的抗磷脂抗体(又被称为狼疮抗凝物)的持[0004]APS改变凝血的正常稳态并且在临床上在患者体内表现为高凝状态的机制尚未明环β_2_糖蛋白与暴露的细胞膜磷脂相结合从而形成蛋白_磷脂复合物。一些理论认为，蛋[0005]关于APS的其他提出的机制包括自身抗体的产生增加、针对凝血因子的抗体的产过分析被称为狼疮抗凝物(LA)试验的磷脂依赖性凝血时间试验来鉴定狼疮抗凝物。据认在表现为凝血时间的反常延长。由于凝血因子抑制剂和缺乏凝血因子也会延长凝血时间，因此患者的血浆样品中这些抑制剂的存在和缺乏使APS的诊断复杂化。凝血因子抑制剂包浆与患者样品混合并重复凝血测试，以排除异常凝血因子的缺乏作为延迟凝血的根本原用正常的(混合)血浆稀释患者血浆样品的混合合研究的低灵敏度是下面描述的本发明所解决的5在下的凝血时间的标准化以及不存在凝血因子[0009]APTT筛选和dRVVT筛选(如上所述的几种LA筛选试验中的两种)为磷脂依赖性凝血低回到正常范围而确定的凝血抑制作用的降低支持了测试血浆样品中LA的存在。定患者血液中的狼疮抗凝物(LA)从而诊断人类患者的抗磷脂综合征(APS)的方法和试剂[0016]在一个方面，本发明涉及一种用于检测人类患者体内与抗磷脂综合征(APS)相关过磷脂依赖性凝血试验检测来自处于APS风险中的患者的血浆的凝血时间，其在至少一种[0017]在步骤(b)中，由步骤(a)的磷脂依赖性凝血试验检测来自处于APS风险中的患者6[0018]确定在步骤a)中的患者血浆中检测到的凝血时间与在步骤b)中的患者血浆中检与截止值进行比较。如当前LA指南中所建议的那样确定截止值，该值为正常样品分布的患者或处于脑梗塞风险中的患者所服用的药剂)的存在而造成的对凝血的影响。在混合试二氧化硅凝血时间(SCT)和稀释的凝血酶原时间(dPT)，仅举几例此类磷脂依赖性凝血试7验来确定可能由凝血因子缺乏或凝血抑制剂(如患的患者所服用的药剂)的存在所造成的对凝血的影响。在试剂盒的内容物中提供的混合试通过计算设备进行，如自动临床分析仪，例如ACLTOP系列(Instrumentation8于本文所述的试验的均值或平均值，计算来自一组未鉴定为具有APS的正常患者的血浆的[0041]如本文所用，dRVVT试剂是指测量凝血时间的磷脂依赖性稀释的鲁塞尔氏蝰蛇毒液时间试剂，例如，dRVVT筛选和确认试验(InstrumentationLaboratory氯甲基酮(PPACK)浓度对基于APTT的二氧化硅凝血(SCT筛选)的凝血时间和基于APTT的二[0045]图2以图表形式示出了根据本发明的一个实施方案的PPACK浓度对SCT试验的筛正常的混合血浆(NPP)的筛选/确认比率[0046]图3以图表形式示出了根据本发明的一个实施方案的PPACK浓度对SCT试验的标准化比率(NR)的作用。在自动混合研究中(使用NPP/PPACK材料以1:1稀释)，在1000ng/mlPPACK的条件下，3种浓度的LA阳性样品(未稀释、使用NPP以1:1或1:3稀释)的NR分别为[0047]图4A至图4B以图表形式示出了根据本发明的一个实施方案的PPACK浓度对dRVVT[0048]图5以图表形式示出了PPACK浓度对dRVVT测试的筛选/确认比率的作用。渐增的9原始样品有效稀释8倍)仍然保持阳性的L[0050]图7A至图7B以图表形式示出了根据本发明的一个实施方案的I_2581以及组合使选/确认比率的作用保持相似。图7B示出了在组合使用或不组合使用PPACK的情况下，I_及它们的组合使用对dRVVT试验的筛选/确认比率的作用。图8A示出了水蛭素提高了NPP样品(从没有水蛭素时的筛选/确认比率1.02提高至含有1000ng/ml水蛭素时的筛选/确认比率1.18)和LA阳性样品(从没有水蛭素时的筛选/确认比率1.41提高至含有1000ng/ml水蛭使用时表现出协同效应(NPP样品为三角形，LA阳性样品为菱形)。其他凝血抑制剂例如PPACK和利伐沙班的组合可能发生协同从1.72[0054]抗凝血酶和因子Xa的抗凝物通过有效降低反应混合物中这些因子的可用量来延浆(NPP)添加到患者血浆样品中并重复凝血试验)，从而解决了用于诊断APS的LA检测中的准磷脂依赖性试验时，来自这些不同抑制剂的协同效应在LA检测和APS的诊断中赋予了工他正常血浆)。在另一个实施方案中，上述试剂盒进一步包括或旨在与LA试验如APTT试剂发明方法的一个实施方案中，通过将患者的血浆与下列物质混合以进行凝血筛选凝血试在dRVVT试验或稀释凝血酶原时间试验中使用高磷脂和低磷脂替换高磷脂APTT和低磷脂(TAP)以及它们的组合)以及具有低磷脂浓度的APTT试剂混合来进行因子Xa筛选凝血试验。磷脂dRVVT替换高磷脂APTT和低磷脂A验凝血时间与测定的正常贫血小板血浆的筛选试验凝血时间进行比较，并表示为比率[0062]在本发明的一个优选实施方案中，截止比率优选来自至少40名正常的健康受试[0063]在本发明的一个优选的实施方案中，示例性截止比率表示为约1.00至约1.20的于LA阳性样品和LA阴性(贫血小板NPP)样品，PPACK对SCT筛选(低的磷脂浓度)和SCT确认[0069]使用LA阴性样品以不同比例(LA阳性:LA阴性为1:1和1:3)稀释LA阳性样品，以进[0070]现在参照图4至图6，PPACK模型证明了凝血酶抑制剂在dRV其中在测试(即，在混合研究设定中)期间使测试[0071]在SCT试验和dRVVT试验中使用PPACK表明：即使在混合研究中稀释样品也能够使=18)进行测试时，两个缺乏因子V的血浆样品和一个缺乏因子X的样品表现出高水平的筛[0076]表2：在PPACK存在下，使用1:1的混合研究设定的通过dRVVT筛选和自HemosIL8dRVVT的相应结果(参见表1)，这表明在350nMPPACK存在下，混合研究设定样品两者的dRVVT筛选/确认比率，当与具有提高LA试验灵敏度能力的抑制剂一起使用时，制剂)提供了此类组合与LA抗体靶向抗原的异质性相关的能力的另一个实例。水蛭素提高选/确认比率(图8)而表现出有限的NR增加(图9)。当在混合研究中一起使用水蛭素和阿加其配置为：(a)使血浆样品与包含低浓度磷脂和凝血抑制剂的第一磷脂依赖性凝血试验试与截止比率进行比较，并基于与所述截止比率的所述比较结果建立狼疮抗凝物的辅助诊进的LA试验灵敏度/特异性以及混合研究的更好利用性。各种凝血酶抑制剂和因子Xa抑制协同效应可用于优化与LA抗